豬血漿蛋白粉中IgG含量的酶聯(lián)免疫檢測方法研究

劉中勇 馬孝斌 高東微 劉 津 王雅靜

血漿蛋白粉(Spray-dried Plasma Protein,SDPP)是利用現(xiàn)代生物技術(shù)和加工手段，對新鮮血液進(jìn)行抗凝處理和分離，將血漿從血液中分離出來，再進(jìn)行壓縮和低溫保存，然后采取特殊的工藝進(jìn)行噴霧干燥，最后制成乳白色或淺褐色的粉末狀產(chǎn)品[1-2]。由于血漿蛋白粉含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，其作為一種新型、高效、安全的功能性蛋白質(zhì)飼料，在斷奶仔豬飼養(yǎng)中已經(jīng)成為必不可少的蛋白飼料。

血漿蛋白粉目前還無統(tǒng)一質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，但已形成業(yè)內(nèi)認(rèn)可的檢測指標(biāo)，如感官檢測、顯微鏡分析、水溶性檢測、常規(guī)指標(biāo)檢測、凝膠實(shí)驗(yàn)及免疫球蛋白IgG定量檢測[3]。其中IgG的檢測基層使用的主要是免疫單擴(kuò)散法，該方法耗時(shí)長，一般需要1～2 d才能出結(jié)果，重復(fù)性也差[3]。而作為國家標(biāo)準(zhǔn)的液相色譜方法由于儀器及檢測成本較高，在基層難以推廣[4]。因此目前亟需一種快速檢測方法解決這個(gè)問題。本研究通過制備豬IgG單克隆抗體，進(jìn)行調(diào)試優(yōu)化，建立了基于間接競爭酶聯(lián)免疫原理的快速檢測方法。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 試劑

豬IgG、牛IgG、豬乳鐵蛋白等參考標(biāo)準(zhǔn)品，弗氏完全和不完全佐劑、細(xì)胞培養(yǎng)液等均購自美國Sigma公司；辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗鼠IgG二抗為博奧森生物公司產(chǎn)品；四甲基聯(lián)苯胺購自欣經(jīng)科生物科技公司；其他常用有機(jī)試劑、無機(jī)試劑均為分析純，由北京化學(xué)試劑公司提供。

1.2 材料和儀器

酶標(biāo)板條、細(xì)胞培養(yǎng)板等（華美生物工程公司），MK3酶標(biāo)儀（熱電公司），振蕩器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司），細(xì)胞培養(yǎng)箱（日本三洋），電子天平（德國賽多利斯），其余為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。……