腦泰方提取物對局灶性腦缺血大鼠血漿TXB2及6-Keto-PGF1α含量的影響1)

陳 懿,陳 敏,譚 琥,劉吉勇,王芊芊,李 敏,葛金文

血栓素A2(TXA2)不僅有促進血小板聚集的作用,而且是很強的血管收縮劑,由血管壁產生的前列環素(PGI2)則是很強的血小板聚集抑制劑和血管擴張劑,任何因素導致兩者平衡失調即引起血管疾病[1]。目前常測定其穩定的代謝產物血栓素B2(TXB2)和 6-酮-前列腺素 F1α(6-keto-PGF1α)反映 TXA2和PGI2的濃度。

腦泰方能明顯改善氣虛血瘀型腦梗死患者的臨床癥狀和神經功能缺損程度[2]。本研究旨在從維持 TXB2/6-Keto-PGF1α動態平衡角度初步探討腦泰方對局灶性腦缺血的保護作用。

1 材料與方法

1.1 藥物與主要試劑 腦泰方提取物(Naotaifang extracts,N TF),腦泰方由黃芪、川芎、地龍等藥物組成,經水煎、醇提后制成浸膏粉(由湖南中醫藥大學藥學院制劑教研室提取,每1 g浸膏粉含生藥 4 g);TXB2與6-Keto-PGF1α放免試劑盒(生產批號20080925)購自北京普爾偉業生物科技有限公司。

1.2 動物模型制作及分組 Sprague-Dawley(SD)大鼠65只,體重280 g～300 g,鼠齡7個月～8個月,雌雄不限,購自上海斯萊克實驗動物有限公司,許可證號SCXK(滬)2007-0005。

參照Longa等[3]的方法并加以改進制備大鼠左側大腦中動脈阻塞模型(MCA)。MCA阻斷后1.6 h栓線抽出恢復再灌注。假手術組只進行左側頸部血管分離,正常對照組不做任何處理。

參照Longa等[3]5分制法對手術大鼠進行評分,分值在1分～3分者入組,死亡不足動物隨機替補。將65只大鼠稱重編號,按完全隨機法分為正常對照組、假手術組、模型組和腦泰方組,分1 d、3 d、5 d、7 d 4個時間點觀察,每亞組5只大鼠。每日對大鼠灌胃1次,每次灌胃容量1 mL/100 g大鼠;于最后一次給藥后1 h,麻醉,取標本。

1.3 血漿TXB2、6-Keto-PGF1α含 量檢測 TXB2和6-Ke to-PGF1α含量測定采用放射免疫法。大鼠頸總動脈插管取血2 mL按9∶1置于2%乙二胺四乙酸二鈉(EDTANa2)溶液的塑料管中,4℃3 000 r/min離心15 min,取血漿用于檢測。

2 結 果

本研究發現,與假手術組同時間比較,模型組術后1 d、3 d、5 d、7 d TXB2含量明顯升高(P＜0.01),血漿 6-Keto-PGF1α以 1 d、5 d、7 d變化顯著(P＜0.05或 P＜0.01)。與相應時間點模型組比較,腦泰方治療組血漿TXB2含量及TXB2/6-Keto-PGF1α比值降低明顯(P＜0.01),其中 TXB2/6-Keto-PGF1α比值在腦泰方治療7 d后,與假手術組及正常對照組比較無統計學意義(P＞0.05)。詳見表1。

表1 各組血漿 TXB2、6-Keto-PGF1α含量比較(±s)

表1 各組血漿 TXB2、6-Keto-PGF1α含量比較(±s)

組別 n T XB2(ng/L)6-Keto-PGF1α(ng/L)T XB2/6-Keto-PGF1α假手術組 1 d 5 302.85±39.83 1 490.22±208.34 0.204±0.011 3 d 5 286.07±27.71 1 438.56±154.18 0.199±0.009 5 d 5 317.61±30.57 1 589.49±202.60 0.200±0.008 7 d 5 299.71±41.39 1 548.27±226.55 0.194±0.011模型組 1 d 5 473.37±12.702) 1 858.39±108.542) 0.255±0.0092)3 d 5 369.37±22.412) 1 602.91±61.71 0.230±0.0072)5 d 5 367.37±31.952) 1 788.76±188.001) 0.206±0.012 7 d 5 439.00±22.662) 1 821.33±86.562) 0.241±0.0042)腦泰方組 1 d 5 265.70±24.433) 1 576.54±166.433) 0.169±0.0122)3)3 d 5 259.92±28.473) 1 713.64±155.762) 0.152±0.0112)3)5 d 5 263.55±18.302)3) 1 654.15±152.85 0.160±0.0112)3)7 d 5 366.01±18.802)3) 1 939.59±167.702) 0.189±0.0063)正常對照組 5 309.41±31.28 1 554.99±67.01 0.199±0.011與假手術組比較,1)P＜0.05,2)P＜0.01;與模型組比較,3)P＜0.01

3 討 論

正常情況下,TXA2和PGI2保持著動態平衡以維持對血管及供血的調節;腦缺血時神經組織損傷,花生四烯酸代謝異常,導致TXA2和 PGI2的比例失調,血小板合成 TXA2增多,導致血小板過度聚集和血管強烈收縮,導致低灌流,加重腦組織的損傷[4,5]。因此,降低 TXA2含量,恢復 TXA2和PGI2的相對平衡以保護腦組織日益受到重視[6]。

本研究采用線栓法建立大鼠腦缺血再灌注模型,腦血流被暫時阻斷,局部腦組織因缺血而壞死,缺血區血管內皮細胞分泌功能紊亂,表現為TXA2釋放增加,使 TXA2/PGI2平衡破壞,從而導致血栓形成。模型組1 d、3 d、5 d、7 d血漿 TXB2含量和TXB2/6-Keto-PGF1α比值升高,說明血小板聚集作用加強,聚集的血小板再發生變形,進一步釋放出前列環素等活性物質,如此反復,血小板聚集越來越多,導致急性缺血性腦血管疾病的發生。經腦泰方治療后,血漿TXB2含量和TXB2/6-Keto-PGF1α比值明顯降低,至第7天,TXA2和PGI2之間的動態平衡已趨向正常。故認為腦泰方可降低腦缺血損傷時TXA2合成,調節TXA2和PGI2之間的動態平衡,從而抑制了血小板的聚集,舒張血管,增加腦血流量,減輕缺血時腦組織的損傷程度,進而降低腦缺血后的致殘程度,這可能是腦泰方治療腦缺血取得較好療效的機制之一。

[1]Fang YC,Wu JS,Chen JJ.Induction of prostacyclin/PGI2synthase expression after cerebral ischemia-reperfusion[J].J Cerebral Blood Flow Metabolism,2006,26(4):491-501.

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[3]Longa EZ,Weinstein P R,Carlson S,et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke,1989,20(1):84-94.

[4]李青蘭,任澤恩,武建坤,等.絡泰對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用[J].長治醫學院學報,2008,22(3):165-167.

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