柴胡三參膠囊對實驗性心律失常保護作用的研究1)

劉建和,胡熙苒,何少平,李 群,程 坤

柴胡三參膠囊是自制的治療心律失常方劑。本研究從實驗性致心律失常觀察柴胡三參膠囊(CHSS)對大鼠室性心律失常的保護作用,以進一步探討柴胡三參膠囊抗心律失常的作用機制。

1 材料與方法

1.1 藥物 柴胡三參膠囊主要原料粉由湖南中醫藥大學第一附屬醫院制劑室提供,批號:681210;普萘洛爾由大同市衛華藥業有限責任公司生產,國藥準字:H14021703;普羅帕酮由山東仁和制藥有限公司生產,國藥準字號:H37020793;維拉帕米由石家莊科迪藥業有限公司生產,國藥準字:H13020858。

1.2 試劑 10%水合氯醛、氯仿、3.5%氯化鈣溶液、0.005%烏頭堿溶液。

1.3 動物 健康Wistar大鼠100只,清潔級,雌雄各半,體重200 g～320 g;昆明小鼠100只,雌雄各半,體重25 g～35 g。許可證號:SCXK(滬)2008-0016,由上海西普蘭必凱實驗動物公司提供。

1.4 儀器 生物信號采集系統(成都儀器廠RM-6280)、潔凈工作臺、電子天平、齒鑷、棉簽、注射器。

1.5 方法

1.5.1 氯仿致小鼠心律失常 選取健康KM小鼠100只,雌雄各半,體重28 g～30 g,按體重編號后,以隨機數字表法完全隨機分為5組,每組20只。分別為:模型對照組;柴胡三參膠囊小劑量組;柴胡三參膠囊中劑量組;柴胡三參膠囊大劑量組;普萘洛爾組。柴胡三參膠囊按成人推薦劑量4.8 g/d計算,折算成2次/日,每次2.4 g的1/2倍(小劑量)、等效劑量(中劑量)、2倍(大劑量)給藥,普萘洛爾折算后給予7 mg/kg。模型對照組給予等量生理鹽水灌胃,灌胃給藥 2次/日,連續7 d。末次給藥30 min,將小鼠置于倒扣的600 mL燒杯中,取氯仿2 mL滴于棉球上,讓小鼠吸入氯仿直至呼吸停止(每測試1只小鼠,加1 mL氯仿)。立即取出小鼠,打開胸腔,肉眼觀察小鼠心臟活動節律,記錄各組小鼠產生室顫(VF)的動物數,對其結果進行統計分析檢驗。

1.5.2 氯化鈣致大鼠心律失常 選取健康Wistar大鼠50只,雌雄各半,體重 200 g～320 g,按體重編號后,以隨機數字表法完全隨機分為5組,每組10只。分別為模型對照組;維拉帕米組;柴胡三參膠囊小劑量組;柴胡三參膠囊中劑量組;柴胡三參膠囊大劑量組。末次給藥后30 min,用10%水合氯醛0.3 mL/kg腹腔麻醉,仰位固定。舌下靜脈注入3.5%氯化鈣溶液105mg/kg(10 s內推完),并記錄心電圖Ⅱ導聯,以觀察其心律失常情況。記錄室早(VP)、室速(V T)、VF、死亡率及死亡(CA)時間并分析。

1.5.3 烏頭堿致大鼠心律失常 選取健康Wistar大鼠50只,雌雄各半,體重250 g～320 g,按體重編號后,以隨機數字表法完全隨機分為5組,每組10只。分別為模型對照組;普羅帕酮組;柴胡三參膠囊小劑量組;柴胡三參膠囊中劑量組;柴胡三參膠囊大劑量組。末次給藥后30min,用10%水合氯醛0.3 mL/kg腹腔麻醉,仰位固定。舌下靜脈注入0.005%烏頭堿溶液0.05 mg/kg(10 s內推完),并記錄心電圖Ⅱ導聯,以觀察其心律失常情況。記錄 VP、V T、VF及 CA時間并分析。

1.6 統計學處理 采用SPSS 17.0軟件分析。所有數據以均數±標準差(±s)表示,各組實驗結果的差異性檢驗若符合正態性分布采用方差分析,組間比較用LSD法檢驗;若方差不齊采用Tamhane's T 2檢驗。

2 結 果

2.1 柴胡三參膠囊抗氯仿致小鼠室顫的作用 在氯仿致小鼠室顫的模型中,與模型對照組相比,柴胡三參膠囊小劑量組對小鼠室顫發生率有減少趨勢,柴胡三參膠囊的中劑量與模型組相比有統計學意義(P＜0.05);而高劑量組減小VF發生時間率更低(P＜0.01);普萘洛爾組與模型對照組相比,有統計學意義(P＜0.01)。詳見表 1。

表1 柴胡三參膠囊抗氯仿誘發室顫作用(±s)例(%)

表1 柴胡三參膠囊抗氯仿誘發室顫作用(±s)例(%)

組別 n 室顫模型對照組 20 18(90)CHSS小量組 20 14(70)CHSS中量組 20 12(60)1)CHSS大量組 20 10(50)2)普萘洛爾組 20 8(40)2)與模型對照組比較,1)P＜0.05,2)P＜0.01

2.2 柴胡三參膠囊對氯化鈣致大鼠心律失常的作用 在氯化鈣模型中,與模型組照組相比,柴胡三參膠囊小劑量組對縮短心律失常的時間有一定作用,但無統計學意義;柴胡三參膠囊中劑量有縮短心律失常的發生時間的趨勢,對于各心律失常持續時間的縮短及死亡時間的延長均有較好作用,與模型組相比有統計學意義(P＜0.05);柴胡三參膠囊大劑量組對 VP、VT、VF及CA時間的延長均有明顯作用,與模型對照組相比有統計學意義(P＜0.05);與模型對照組相比,維拉帕米組對 VP、VT、VF的作用及CA時間的延長有統計學意義(P＜0.01);各組大鼠死亡率有降低趨勢。詳見表2。

表2 柴胡三參膠囊抗氯化鈣誘發心律失常的作用(±s)

表2 柴胡三參膠囊抗氯化鈣誘發心律失常的作用(±s)

組別 VP時間(s)VT時間(s)VF時間(s)CA(%)CA時間(s)模型對照組 39.68±11.47 44.79±8.32 53.36±12.80 90 172.60±17.54 CHSS小量組 32.99±9.83 40.92±7.30 46.98±9.54 80 194.20±15.26 CHSS中量組 28.96±7.881) 34.97±8.351) 40.10±10.761) 70 207.04±14.451)CHSS大量組 27.36±9.221) 33.74±9.001) 33.45±11.751) 60 241.68±41.241)維拉帕米組 27.86±9.671) 33.22±11.571) 36.07±10.691) 70 229.81±42.461)與模型對照組比較,1)P＜0.05

2.3 柴胡三參膠囊對烏頭堿致大鼠心律失常的作用 在烏頭堿模型中,與模型對照組相比,柴胡三參膠囊小劑量組對縮短心律失常的時間有一定作用,但無統計學意義;柴胡三參膠囊中劑量有縮短心律失常發生時間的趨勢,對于VF持續時間的縮短較為明顯,與模型對照組相比有統計學意義(P＜0.05);柴胡三參膠囊大劑量組對VP有較好作用,與模型對照組相比有統計學意義(P＜0.05),其對VT、VF、CA時間的延長有明顯作用,與模型對照組相比有統計學意義(P＜0.05);與模型對照組相比,普羅帕酮組對VP、VT、VF的作用及死亡時間的延長均有統計學意義(P＜0.05)。詳見表3。

表3 柴胡三參膠囊抗烏頭堿誘發心律失常的作用(±s)min

表3 柴胡三參膠囊抗烏頭堿誘發心律失常的作用(±s)min

組別 VP時間 VT時間 VF時間 CA時間模型對照組 5.19±1.89 6.92±1.75 9.82±3.27 23.96±6.20 CHSS小量組 4.88±1.69 6.73±1.34 9.37±1.76 26.50±4.45 CHSS中量組 3.99±1.50 5.61±1.61 7.34±1.971) 33.38±11.19 CHSS大量組 3.15±1.881) 4.49±1.841) 6.19±2.531) 41.98±20.381)普羅帕酮組 3.11±1.471) 4.49±2.241) 5.82±2.131) 42.20±19.451)與模型對照組比較,1)P＜0.05

3 討 論

心律失常屬“心悸”“怔忡”的范疇。古代中醫對心律失常的認識,雖各家均有不同,但大多認為病因不外乎虛實兩者,氣血陰陽虧虛及血瘀飲停之變。病機多為虛實夾雜,本虛標實。現在多數醫家主張其基本病機離不開虛、瘀、痰、熱,本虛是本病的發病基礎,標實是病理產物。心悸是由多種原因導致,使正氣受損,痰瘀郁熱內生,阻滯氣機,郁久化熱,痰瘀熱互結;機體正氣已虛,無力抗邪外出,邪正相爭,若正勝邪退則脈律暫時穩定;若邪勝正退則內擾心神而發為心動悸,因而心悸常呈陣發性。這其中痰為宿根,若有情志誘因即可發作,故益氣活血、解郁化痰即可防邪勝而發病,以達防治心悸之目的。

柴胡三參膠囊是治療冠心病心律失常的有效驗方[1]。由柴胡、法夏、黨參、丹參、苦參、黃連、炒常山、甘草等組成。本方以和法為立方基礎,大凡臨床上錯綜復雜,虛實夾雜的病證均應以“和解”為治療大法。在該方中,柴胡為君,能和解開郁,調暢氣機;臣以法夏,化痰燥濕,消痰下氣;丹參,活血通經,涼血消腫,清心除煩;苦參清火燥濕,兼通利小便;黃連,大苦大寒,燥濕清熱;常山善開痰結,甘草補脾益氣,滋咳潤肺,緩急解毒,調和百藥共為佐使。柴胡三參膠囊治療心悸,取其和解開郁,使氣機調暢;取其清熱、化痰、活血,使邪去而正安;因正氣已損,故又應顧護正氣,扶正以祛邪,標本兼治以定悸。全方合用,共奏和解定悸、益氣活血、清熱化痰之功效。

動物實驗證實法夏有明顯的抗心律失常作用。清半夏水煎液200%濃度26.5 ml/kg預防給藥,對氯化鋇誘發的大鼠心律失常有明顯的拮抗作用[1];黨參水煎液和水提醇沉法制得的注射液均能明顯延長注射異丙腎上腺素小鼠缺氧存活時間,說明能增強動物心肌耐缺氧能力[2];丹參的主要成分丹參素可能具有鈣拮抗劑的作用,抑制血管緊張素Ⅱ所介導引起細胞內鈣離子升高,從而抑制心肌細胞肥大和心肌成纖維細胞增殖[3]。苦參能抑制傳導和自律性,延長不應期,抑制異位節律點,能明顯對抗烏頭堿、氯化鋇和結扎左冠狀動脈前降支誘發的大鼠室性心律失常,也能明顯對抗氯乙酰膽堿CCI-Ach混合液誘發的小鼠心房纖顫或撲動[4];黃連素中所含的小檗堿有明顯抗心律失常作用,類似于胺碘酮,阻滯鈉通道,有輕度的非競爭性阻滯作用,延長房室結及旁道不應期,減慢傳導,延長動作電位[5],還有研究表明其抗心律失常的機制,可能是直接或間接抑制了Ca2+的膜內流,延長動作電位平臺期和延長3相復極時間,中斷折返激動,從而防治心律失常[6]。含有常山的中成藥對用垂體后葉素造成大鼠急性心肌缺血模型和冠脈結扎所誘發犬急性心肌缺血所致心律失常有較好的保護作用[7];甘草的有效成分甘草酸可延長烏頭堿誘發的心律失常潛伏期,減少室顫率,增加毒毛花苷誘發的室性心律失常的閾值,推測甘草酸可能具有影響心肌細胞離子通道的作用[8]。

本實驗表明,柴胡三參膠囊有較好的拮抗氯仿、烏頭堿和氯化鋇誘發實驗性心律失常的作用。氯仿誘發的心律失常與交感神經系統活性增高及心臟β受體激活有關[9]。在氯仿致心律失常的模型中,與模型對照組相比,柴胡三參膠囊的小、中、高劑量組可減小室顫的發生時間率;明顯對抗氯仿誘發的心律失常,有較強的調節自主神經功能和膜穩定作用。本實驗采用氯化鈣誘發心律失常,作用機制較為復雜,主要與鈣離子對心臟心肌細胞的直接作用有關,與心肌細胞膜上鈣離子的內流有關[10]。在氯化鈣模型中,與模型組相比,柴胡三參膠囊的中、大劑量有縮短心律失常的發生時間作用,柴胡三參膠囊可明顯抑制氯化鈣所致的大鼠雙向性室性心律失常,可通過抑制鈣離子內流或促進鉀離子的流出,降低心臟快反應細胞的自律性。烏頭堿誘發心律失常的作用機制是復雜的。主要是由于它能激活心肌細胞的快Na+通道,使心肌快Na+通道開放,加速心肌細胞Na+內流,提高快反應細胞的自律性,從而加速起搏點自律,誘發多源性異位節律點,縮短心肌不應期,導致心律失常[11-13]。在烏頭堿模型中,與模型組相比,柴胡三參膠囊的各劑量組有縮短心律失常發生時間的趨勢,并且呈劑量依賴性顯著性縮短心律失常持續時間(P＜0.05)。本實驗顯示,柴胡三參膠囊可明顯抑制烏頭堿誘發的大鼠心律失常,能作用于此類離子通道而發揮其抗心律失常作用。柴胡三參膠囊治療心律失常是一種綜合作用過程,其不單是通過抑制心臟單一離子通道而發揮作用的,而是在于整體的調節作用,這可能也是該方起效的原因。

[1]劉建和,易剛強,程丑夫.柴胡三參湯治療冠心病室性期前收縮臨床研究[J].中國中醫藥信息雜志,2005,12(11):13-15.

[2]劉繼林.水半夏與半夏部分藥理作用的對比研究[J].成都中醫藥學院學報,1989,12(2):41.

[3]董昆山.現代臨床中藥學[M].北京:中國中醫藥出版社,1998:60.

[4]郭自強,王碩仁,朱陵群,等.活血藥對血管緊張素Ⅱ致心肌肥大細胞內鈣濃度變化的影響[J].環球中醫藥,2009,2(2):99-101.

[5]韓向東,陳長勛.苦參堿的心血管藥理研究進展[J].中藥新藥與臨床藥理,2006,17(1):72.

[6]王本祥.現代中藥藥理學[M].天津:天津科學技術出版社,1997:1147-1161;1183-1187.

[7]沈映君.中藥藥理學[M].第 6版.上海:上海科學技術出版社,1995:51-52.

[8]丁書文,焦華琛,解硯英,等.青蒿常山對冠脈結扎所誘發犬急性心肌缺血所致心律失常的保護作用[J].中華中醫藥學刊,2008,26(8):1613-1614.

[9]仰禮真,姚望,祁小燕,等.甘草次酸對豚鼠心室肌單個細胞L型鈣通道的影響[J].中國新藥與臨床藥理,2002,13(3):161-163.

[10]陳汝興,袁燦興.炙甘草注射液抗實驗性心律失常的研究[J].中國中藥雜志,1991,16(10):617.

[11]尹克春,劉淑娟,陳力,等.當歸顆粒對抗氯化鈣引起實驗性心律失常的作用[J].廣東醫學,2008,29(11):1785-1786.

[12]Frieze J,Gleitz J,Gutser UT,et al.Aconitum spalkaloids:The modulation of voltage-dependent Na+channel,toxicity and antinociceptive properties[J].Eur J Pharmaco,1997,337(2-3):165-174.

[13]王國斌,付琴,林先明,等.心律泰膠囊抗實驗性心律失常的實驗研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2003,14(2):105.