補陽還五湯對腦缺血再灌注大鼠腦組織NO及NOS的影響

宮健偉，葉蕾（濱州醫學院，山東煙臺264003）

補陽還五湯對腦缺血再灌注大鼠腦組織NO及NOS的影響

宮健偉，葉蕾
（濱州醫學院，山東煙臺264003）

目的觀察補陽還五湯對腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織一氧化氮（NO）及其合酶（NOS）的影響。方法采取血管內栓塞阻斷法制成大鼠腦缺血再灌注模型，比較補陽還五湯與尼莫地平對大鼠腦組織中的NO、NOS的變化。結果與假手術組比較，各組大鼠腦組織NO及NOS含量均不同程度降低；補陽還五湯組與尼莫地平組均較模型組顯著增高NO及NOS含量，補陽還五湯組作用明顯。結論補陽還五湯具有增加腦NO及NOS含量的作用。

補陽還五湯；腦缺血；一氧化氮；一氧化氮合酶；大鼠

腦卒中病具有高發病率和高病死率的特點，其中缺血性腦卒中約占腦卒中病人的70%以上。補陽還五湯出自清代醫家王清任的《醫林改錯》，方由黃芪四兩，當歸尾一錢半，赤芍二錢，地龍、川芎、桃仁、紅花各一錢等7味藥物組成，具有補氣、活血、通絡作用，主治腦卒中后遺癥，是中醫臨床上用于預防腦卒中和治療腦卒中及后遺癥的常用名方。現代藥理研究證實，補陽還五湯具有改善腦循環、增加腦血流量、改善血流動力學、改善腦細胞能量代謝、抗氧化作用及抑制自由基的產生和滅活自由基、拮抗神經毒性作用、減輕炎癥反應、促進神經干細胞增殖分化抑制神經細胞凋亡和調節神經遞質或神經肽紊亂等多方面作用［1］。本實驗采取血管內栓線阻斷法制成經典的大鼠腦缺血再灌注模型（MACO模型），觀察補陽還五湯對腦組織一氧化氮（NO）及其合酶（NOS）的影響。

1 材料與方法

1.1 動物及藥物試劑清潔級SD大鼠，雌雄各半，體質量150～180 g，購自煙臺綠葉制藥股份有限公司。補陽還五湯液：按《醫林改錯》原方所載的各藥（黃芪120 g，當歸尾6 g，赤芍5 g，川芎、地龍、桃仁、紅花各3 g），依據原書的用量比例，浸泡，進行水煎煮，煎煮30 min，過濾；再加水煎煮30 min，過濾，兩次濾液合并，并濃縮成150%的液體（每毫升含原方生藥1.5 g），冰箱保存備用。尼莫地平：天津制藥廠，冰箱保存備用。水合氯醛：購自上海化學試劑公司生產，批號20070716；一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（NOS）試劑盒：由南京建成生物工程研究所提供（批號200801017）。

1.2 實驗方法清潔級SD大鼠隨機編號分為4組：假手術組，模型對照組，補陽還五湯湯液組，尼莫地平組，每組10只。

采取灌胃法，補陽還五湯按7.5 mL／kg的劑量進行灌胃；模型組及假手術組則分別給予等量的生理鹽水進行灌胃；尼莫地平1 mg／kg術前30 min皮下注射。每日1次，連續7 d后，實施腦缺血再灌注造模。采取經典方法血管內栓線阻斷法造成MACO模型［2-3］：以10%水合氯醛（0.4 mL／100 g）腹腔注射麻醉大鼠，頸部正中切口，沿氣管兩側分離出左右頸總動脈（CCA），并在動脈下穿線備用。然后，迅速用套有硅膠的動脈夾夾閉雙側頸總動脈，造成急性腦缺血。以翻正反射消失，雙側瞳孔放大，呼吸加深但能自主呼吸為模型成功標志。30 min后開放CCA再灌注。假手術組所采用的方法與模型組相同，但不夾閉雙側頸總動脈的操作。腦缺血造模30 min后開放CCA再灌注2 d后，立即迅速斷頭取腦。在冰浴中取左側大鼠大腦從額極后3 mm取腦，用冰磷酸鹽緩沖液沖洗后置液氯保存待測。指標測定時腦組織用冰磷酸鹽緩沖液制成10%腦組織勻漿，3 500 r／min于4℃離心15min，分離上清液，分別測定NO及NOS含量。具體按試劑盒操作步驟的要求測定。

1.3 統計學分析采用SPSS 12.0統計軟件進行統計學處理，實驗結果以均數±標準差±s）表示，統計分析用t檢驗。

2 結果

模型組大鼠腦組織NO和NOS含量明顯低于假手術組；補陽還五湯組大鼠腦NO及NOS含量均不同程度低于假手術組，而高于模型組，且有統計學意義。見表1。

表1 對腦組織中NO、NOS含量的影響±s）μmol／g

表1 對腦組織中NO、NOS含量的影響±s）μmol／g

注：與假手術組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

組別n NO NOS假手術組10 3.68±1.03 12.67±1.43＃＃模型組10 1.51±1.31＃＃8.96±1.04＃＃補陽還五湯組10 2.73±0.74＃▲10.02±0.94＃＃▲▲尼莫地平組10 2.58±0.81＃▲9.64±1.28＃＃

3 討論

補陽還五湯是清代著名醫家王清任創立的益氣活血之代表方劑，方中重用黃芪大補元氣，取其“氣旺而促進血行”，血暢則絡脈通，從而治療氣虛血瘀絡阻的各種疾病。近年來報道用補陽還五湯治療缺血性腦血管病均取得了較好的療效。研究表明，缺血再灌注是大多數缺血性腦血管病的病理生理過程，而引起缺血再灌注損傷的機制比較復雜，至今尚未徹底闡明［4］。

NO是一種具有多種生物活性的氣體小分子，其主要生理作用是擴張血管、促進免疫、抗血栓形成等。研究表明，固有型NOS（cNOS）在基礎條件下起作用，產生的NO對腦循環起重要的調節作用；而誘導型NOS（iNOS）在基礎條件下不起作用，在缺血時表達并產生高濃度的NO，從而加速能量消耗，損傷DNA，導致神經細胞死亡。腦組織在遭受缺血性刺激時，NO濃度和NOS活性常明顯升高，特別是在缺血再灌注早期，是引起缺血性腦損傷的主要因素之一［5］。可見，NO既具有潛在的有益作用，又有毒性作用，NO濃度升高主要發生在缺血早期，此時對神經細胞產生毒性作用，而在再灌注后期，NO對腦血流等具有有益調節作用。本研究發現，在再灌注48 h后，腦組織NO含量降低，NOS活性降低，表明此時腦組織內NO合成障礙。給予補陽還五湯后，可對抗再灌注后期NO含量和NOS活性的降低。總之，本研究表明，在腦缺血后再灌注48 h，腦組織NOS活性降低，NO合成減少。補陽還五湯對腦組織能量代謝具有一定的調節作用，并可增加NOS活性，促進NO合成，提示該方有對抗腦缺血、保護腦組織的作用。

［1］王敏，鄧長青.補陽還五湯抗腦缺血作用的研究概況與展望［J］.湖南中醫學院學報，2000，20（4）：71-72.

［2］陳奇.中藥藥效研究思路與方法［M］.北京：人民衛生出版社，2005：219.

［3］Longa E Z，Weinstein P R，Carisons，et，al.Reversible middle cerebral arteryocclusion without craniectomy in rats［J］.Stroke，1989，20（1）：84-91.

［4］吳基良，劉超.補陽還五湯對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用［J］.中國老年學雜志，2004，24（6）：552.

［5］Hangai M.er al.Inducible Nitric Oxide Synthase in Retinal Ischemia2 Reperfusion Injury［J］.Exp Eye Res，1996，63（5）：501-509.

R285.5

A

1007－4813（2010）06－0819－02

2010－08－04）

宮健偉（1978－），男，碩士，講師。研究方向：古今名方的臨床與實驗研究。