酵母硒對圍產(chǎn)前期奶牛全血硒含量和血液抗氧化能力的影響

東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 雒國彬 趙洪波 文奇男 王志博 張永根＊

奶牛在圍產(chǎn)期（產(chǎn)前21 d至產(chǎn)后21 d）由于生理狀態(tài)、組織代謝的變化以及泌乳開始對營養(yǎng)物質(zhì)需求的急劇增加，都會使其神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫狀態(tài)發(fā)生很大的變化（Goff和Horst，1997）。 圍產(chǎn)期對奶牛健康是非常關(guān)鍵的階段。奶牛在圍產(chǎn)期可能經(jīng)歷氧化應(yīng)激，氧化應(yīng)激可以引起圍產(chǎn)期奶牛機能紊亂，從而導(dǎo)致相關(guān)的代謝疾病（Ronchi等，2000）。硒作為谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的組成成分具有抗氧化作用。酵母硒作為有機硒，具有毒性低、對環(huán)境污染小、生物利用率高等優(yōu)點（鐘榮珍等，2005）。本試驗研究了不同水平酵母硒對圍產(chǎn)前期（產(chǎn)前21 d至分娩）奶牛全血硒含量和血液抗氧化能力的影響，以便為酵母硒在奶牛養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 選取20頭處于干奶期 （產(chǎn)前4周），體況評分相近（3.25 ～ 3.75），胎次相近（3 ～ 4胎），預(yù)產(chǎn)期相近的中國荷斯坦奶牛。

1.2 試驗設(shè)計 試驗采用完全隨機區(qū)組設(shè)計，隨機分為4組（A、B、C和D組），每組5頭奶牛。A組（對照組）：飼喂基礎(chǔ)日糧（硒含量0.29 mg/kg DM）；B組：飼喂基礎(chǔ)日糧+酵母硒 2.4 g/d（硒含量0.49 mg/kg DM）；C組：飼喂基礎(chǔ)日糧+酵母硒4.8 g/d（硒含量 0.69 mg/kg DM）；D 組：飼喂基礎(chǔ)日糧+酵母硒7.2 g/d（硒含量0.89 mg/kg DM）。所用的酵母硒（商品名：賽樂硒，英文名稱：SELPLEX）成分：酵母硒、干啤酒酵母，硒1000 mg/kg（由北京奧特奇生物制品有限公司提供）。試驗期為3周，預(yù)試期1周，從預(yù)產(chǎn)前4周（產(chǎn)前28 d）開始，持續(xù)到分娩當(dāng)天。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗牛按牛場常規(guī)飼養(yǎng)管理程序進行。試驗組和對照組飼喂配制相同的基礎(chǔ)日糧，日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。每天分早 （06∶00）、中（13∶00）、晚（20∶00）3 次給料，牛只全天自由采食。試驗各組根據(jù)施加的處理不同，飼喂不同水平的酵母硒。每日酵母硒平均成3份，分3次飼喂，酵母硒與適量基礎(chǔ)日糧混合進行飼喂，以保證準(zhǔn)確采食。同時每頭牛補充維生素E 800 mg/d，以滿足奶牛的需要。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.4 樣品收集與分析 分別在產(chǎn)前14、7 d和分娩當(dāng)天，尾靜脈采集血液20 mL，其中取10 mL用一次性真空采血管（規(guī)格：肝素管）收集，用于測定全血硒含量，采用熒光法測定參照GB/T 5009.93-2003《食品中硒的測定》；另取10 mL用一次性真空采血管 （規(guī)格：無添加劑管）收集，3000 r/min離心15 min，分離制得血清，-20℃冷凍保存。使用南京建成生物工程研究所提供試劑盒測定血清中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、總抗氧化能力 （T-AOC）、總超氧化物歧化酶 （TSOD）的活力和丙二醛（MDA）的含量，按試劑盒說明進行操作。

1.5 數(shù)據(jù)處理 應(yīng)用SAS 9.1統(tǒng)計分析軟件的ANOVA過程進行方差分析，采用Duncan’s方法進行多重比較，數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示。

2 結(jié)果

2.1 酵母硒對圍產(chǎn)前期奶牛全血硒含量的影響見表2。由表2可以看出，在產(chǎn)前14 d，B、C、D組分別比對照組提高了16.67%、25%和16.67%（P<0.05）；在產(chǎn)前 7 d，飼喂酵母硒各組與對照組相比差異不顯著（P<0.05）；在分娩當(dāng)天，D組比對照組提高20%（P<0.05），B組和C組都提高了6.67%，差異不顯著（P＞0.05）。

表2 酵母硒對奶牛全血硒含量的影響μg/mL

2.2 酵母硒對圍產(chǎn)前期奶牛血清抗氧化能力的影響

2.2.1 酵母硒對GSH-Px活力的影響 見表3。通過表3可以看出，在產(chǎn)前14 d，D組奶牛血清中GSH-Px活力比對照組提高11.81%（P<0.05）；在產(chǎn)前7 d，B組比對照組提高38.33%，C組和D組與對照組相比無顯著差異（P＞0.05）；在分娩當(dāng)天，C組比對照組提高20.69%（P<0.05），D組比對照組提高46.67%（P<0.01）。

表3 酵母硒對奶牛血清GSH-Px活力的影響U/mL

2.2.2 酵母硒對血清T-AOC的影響 見表4。通過表4可以看出，在產(chǎn)前14 d，各飼喂酵母硒組血清中T-AOC與對照組相比都有提高，但差異不顯著（P＞0.05）；在產(chǎn)前7 d，B組比對照組提高36.46%（P<0.01）；在分娩當(dāng)天，B組比對照組提高 31.47%（P<0.05）。

2.2.3 酵母硒對血清T-SOD活力的影響 見表5。通過表5可以看出，在產(chǎn)前14 d，C組奶牛血清中T-SOD活力比對照組提高9.67%（P<0.01），在產(chǎn)前7 d，C組和D組比對照組分別提高7.51%和5.26%（P<0.05）；在分娩當(dāng)天，各飼喂酵母硒組都比對照組有提高，但差異不顯著（P＞0.05）。

表4 酵母硒對奶牛血清T-AOC的影響U/mL

表5 酵母硒對奶牛血清T-SOD活力的影響U/mL

2.2.4 酵母硒對血清MDA的影響 見表6。通過表6可以看出，在產(chǎn)前14 d，各組之間差異不顯著（P ＞ 0.05）；產(chǎn)前 7 d，B、C 組和 D 組分別比對照組降低 45.60%、38.38%和 32.17%（P<0.05），飼喂酵母硒各組之間差異不顯著 （P＞0.05）；在分娩當(dāng)天，B組比對照組降低56.77%（P＜ 0.01），C 組比對照組降低 23.35%（P ＜ 0.05），D組與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。

表6 酵母硒對奶牛血清MDA的影響nmol/mL

3 討論

與無機來源硒相比，給反芻動物飼喂有機來源的硒（包括酵母硒和富硒飼料）通常能提高血液和組織中的硒濃度和提高GSH-Px的活性 （許宗運等，2007）在本次研究中，產(chǎn)前14 d和分娩當(dāng)天得到的結(jié)果證明這一點，而在產(chǎn)前7 d飼喂酵母硒各組與對照組沒有顯著差異（P＞0.05），這可能是因為所選擇的試驗?zāi)膛５纳a(chǎn)階段不同造成的，此階段奶牛可能動員內(nèi)源硒使血硒濃度提高，機理有待進一步研究。

本研究中奶牛血清中GSH-Px活力在產(chǎn)前7 d，T-SOD活力在產(chǎn)前14 d和7 d的變化表明：適宜水平的酵母硒提高了GSH-Px活力和T-SOD活力，隨著酵母硒水平的提高，都呈下降的趨勢，這與許宗運等（2007）和劉強（2008）報道相同。硒在低濃度范圍內(nèi)可清除活性氧自由基（ROS），且清除效果隨硒濃度增大而增強，使ROS含量不斷減少。此時，硒的生物效應(yīng)表現(xiàn)為營養(yǎng)作用。當(dāng)硒處于高濃度范圍內(nèi)時，硒催化產(chǎn)生ROS，且隨硒濃度增大，ROS產(chǎn)生量增多，硒的生物效應(yīng)表現(xiàn)為毒性作用（徐輝碧，2001）。這說明高濃度的硒催化產(chǎn)生了ROS，機體清除過多的ROS，導(dǎo)致GSH-Px活力和T-SOD活力的降低。丙二醛（MDA）含量在產(chǎn)前7 d和分娩當(dāng)天隨著酵母硒水平的提高，呈上升的趨勢，說明高濃度的硒催化產(chǎn)生過多ROS，使機體脂質(zhì)過氧化速度加快，產(chǎn)生過氧化物增多，導(dǎo)致過氧化物代謝終產(chǎn)物MDA的含量升高。適宜的酵母硒水平提高血清中T-AOC，隨著酵母硒添加水平提高，T-AOC降低，這與許宗運等（2007）報道相同，這表明適宜的酵母硒添加水平提高了血清的總抗氧化能力，而酵母硒添加水平過高會降低血清的抗氧化能力。

4 結(jié)論

從本研究可以得出，圍產(chǎn)前期奶牛添加酵母硒2.4 g/d能夠提高全血硒含量和抗氧化能力。

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