金黃膏外敷治療糖尿病潰瘍的實驗研究*

王 軍，楊 瑞，袁向科，徐 陽，嚴豪杰，付 贏

（天津中醫藥大學第一附屬醫院外科，天津 300193）

糖尿病潰瘍是常見的糖尿病慢性合并癥之一，是導致糖尿病病人截肢致殘的主要原因，其病、生理機制涉及高血糖、蛋白質非酶糖基化、缺氧、山梨醇通路、肌醇耗竭、神經血流減少等諸多因素。本實驗通過研究金黃膏在促進創面愈合時的分子機制，闡述中藥治療糖尿病難愈性潰瘍的作用機制。為臨床使用外用藥治療糖尿病難愈性潰瘍提供可靠的實驗依據及理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料 雄性SD大鼠100只，金黃膏、凡士林，精蛋白鋅胰島素注射液，多功能真彩色細胞圖像分析管理系統、SP免疫組化試劑盒、濃縮型3，3-二氨基聯苯胺（DAB）顯色劑試劑盒、血管內皮細胞生長因子（VEGF）、一抗兔抗鼠 CD34。

1.2 方法

1.2.1 動物模型的建立與分組 100只SD大鼠按150 mg/kg劑量，注射四氧嘧啶將96只隨機血糖值＞16.7 mmol/L的糖尿病大鼠做背部皮膚潰瘍造膜。隨機分為A-金黃膏組，B-胰島素組，C-凡士林組。分別以不同藥物紗條覆蓋創面，無菌紗布包扎，換藥1次/d，持續3周，直到創面愈合。

1.2.2 標本采集及制備 于第3、7、14、21天，各組分別取8只大鼠，用10%的水合氯醛麻醉。備皮后常規消毒鋪巾，取各組動物創面組織備檢各指標。術后將大鼠處死。

1.2.3 病理學檢測成纖維細胞數及新生毛細血管數蘇木-伊紅（HE）染色，光鏡下，每個標本隨機在創面中心及創緣四周選擇5個高倍視野,計數肉芽組織中成纖維細胞數和新生毛細血管數,并求其均值。

1.2.4 免疫組織化學法檢測VEGF及CD34 血管內皮細胞生長因子工作濃度1∶100，在Image-Pro Plus多功能真彩色細胞圖像分析管理系統上顯微鏡觀察：選擇實驗組和對照組的陽性和陰性組織相、進行400×的顯微照相。圖像分析：選擇有意義的組織相，經登錄、編號、采集、分析、讀取數據、最后存盤。

1.2.5 統計學處理 SPSS 11.5統計軟件進行統計分析，所有數據計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較檢驗，若正態分布用單因素方差分析，若偏態分布采用秩和檢驗，用P<0.05表示差別有顯著性。

2 結果

2.1 肉芽組織中成纖維細胞及新生毛細血管數量的比較 傷后3、7、14、21 d成纖維細胞數、新生毛細血管數檢測：A組創面與B組及C組相比較，有顯著性差異（P＜0.01）。而B組和C組組之間無明顯差異（P＞0.05）。

2.2 各組CD34水平的比較 A組、B組、C組3組潰瘍創面均可檢測到CD34。治療后第7天CD34值達到高峰，隨著傷口的愈合CD34值較前減小，3組比較有顯著差異（P＜0.05）。

2.3 各組VEGF水平的比較 A組和B組均能顯著地促進機體分泌VEGF。A組在第3、7、14、21天，VEGF 的 IHS 值分別為 4.12±1.24，7.37±2.44、4.87±1.64 及 2.62±0.91，并與 B 組及 C 組相比較，均有顯著性差異（P＜0.05）。見表 1。

3 討論

金黃膏是由金黃散和麻油制成的軟膏劑型。金黃散是《醫宗金鑒》里的經方，文獻記載有清熱除濕、散瘀化痰、止痛消腫的作用，由大黃、黃柏、姜黃、白芷、天南星、陳皮、蒼術、厚樸、甘草、天花粉等藥物組成。研究證實金黃膏及其提取液均有較強的抑菌作用；能夠提高傷口分泌物和外周血中溶菌酶含量；具有激活巨噬細胞和增強其吞噬功能的作用。

表1 治療后成纖維細胞數、新生毛細血管數、CD34、VEGF比較(±s)Tab.1 Comparison of the number of fibroblasts,the number of new blood capillaries,CD34,VEGF after treatment(±s)

表1 治療后成纖維細胞數、新生毛細血管數、CD34、VEGF比較(±s)Tab.1 Comparison of the number of fibroblasts,the number of new blood capillaries,CD34,VEGF after treatment(±s)

注：▲P＜0.01，★P＜0.01，◆P＜0.05 ，■P＜0.05。

組別n 成纖維細胞數新生毛細血管數金黃膏組胰島素組凡士林組8883 d 24.8±5.7918.7±4.14▲16.6±3.83▲7 d 55.89±6.8843.65±4.23▲40.23±5.34▲14 d 4.8±8.7130.46±6.2▲28.34±7.3▲21 d 15.78±2.7813.25±1.46▲11.12±1.46▲3 d 7.01±2.204.87±1.14★3.76±0.83★7 d 14.89±3.889.65±3.23★8.13±2.34★14 d 9.78±1.326.33±1.21★5.92±1.30★21 d 5.38±1.784.45±1.46★3.12±1.56★組別n CD34VEGF金黃膏組胰島素組凡士林組8883 d 5.71±1.793.25±0.881.12±0.837 d 9.28±1.884.80±1.24◆1.75±0.70◆14 d 4.71±1.253.01±0.92◆0.87±0.35◆21 d 2.42±0.781.25±0.460.62±0.513 d 4.12±1.243.12±0.83■1.37±1.18■7 d 7.37±2.444.50±1.30■2.25±1.03■14 d 4.87±1.642.62±0.91■1.37±0.91■21 d 2.62±0.911.12±0.83■0.87±0.64■

據本研究結果初步推測金黃膏促進糖尿病難愈性潰瘍愈合的主要機制有以下幾點。

3.1 促進肉芽組織生成 豐富的新生毛細血管能充實肉芽組織且改善創面微循環，為組織修復提供所必須的氧及豐富的營養物質，有利于傷口愈合；纖維母細胞又是創傷修復最主要的細胞。成纖維細胞的功能和形態及細胞周圍環境的變化在很大程度上影響著創面愈合的進程[1]。創傷形成后，纖維母細胞發生增殖、遷移，并合成、分泌膠原和胞外基質（蛋白質）成分，參與肉芽組織形成、創口收縮及組織重建的過程，其數量變化會對創傷愈合產生巨大影響[2]。本研究表明金黃膏能明顯提高創面新生毛細血管數，顯示金黃膏能改善創面微循環，加速組織修復過程。同時金黃膏能顯著提高創面肉芽組織中成纖維細胞數量，并能促進成纖維細胞成熟生成膠原纖維、彈性纖維、網狀纖維及基質成分，從而促進傷口愈合。

3.2 促進生長因子的分泌 研究表明[3]該因子對糖尿病足潰瘍的治愈與降低截肢率有顯著效果。CD34為黏蛋白樣血管遞質素的一種，主要表達于多能造血干細胞、定向祖細胞、骨髓基質細胞、和血管內皮細胞[5]，可以根據創面CD34表達作為新生血管形成的量化指標。本研究可見金黃膏顯著促進機體分泌VEGF來加快肉芽組織的形成及加快創面愈合，并在金黃膏組肉芽組織中檢測CD34顯著增多，說明金黃膏可以顯著地促進機體分泌CD34來加快肉芽組織的形成及加快創面愈合。

3.3 保護和濕潤創面作用 金黃膏軟膏接觸創面部分受皮溫液化為液體，經與創面物質反應變化后，在創面形成一層黃色的保護膜屏障，阻斷細菌所需營養物質的攝入、同時可加快表皮細胞遷移速度、維持創面正常的電勢梯度、促使更多的生長因子受體與生長因子結合等，這些都能改善創面局部循環，提高局部血流量，增強局部組織免疫功能，使壞死組織液化，終將促進創面愈合[6]。

本研究發現金黃膏組使創面愈合時間縮短，經病理及免疫檢測發現創面新生毛細血管數及成纖維細胞數較對照組增加，瘡面愈合早期VEGF及CD34表達增加。本研究檢測到金黃膏組肉芽組織中CD34表達增加，說明新生毛細血管數增加。金黃膏組肉芽組織中VEGF呈坡峰狀顯著增多，說明金黃膏促進創面愈合的機制可能是通過促進機體早期分泌VEGF來加快肉芽組織的形成從而加快創面愈合。

[1] 肖正華，張正軍，周 倩，等.糖尿病足部潰瘍患者白介素-1對成纖維細胞增殖及基質金屬蛋白酶-2和基質金屬蛋白酶-9的影響[J].中國慢性病預防與控制，2008，16（6）：581-583.

[2] 秦全江.成纖維細胞在皮膚創傷愈合中的作用及其調控[J].國外醫學：創傷與外科基本問題分冊，2000，12(1)：33-33.

[3] Huang P,Li S,Han M,et a1.Autologous transplantation of granulocyte colony-stimulating fact ormobilized peripheral blood mononuclear cells improves critical limb ischemia in diabetes[J].Diabetes Care,2005,28(9):2155-2160.

[4] 張煒沂，陳 虎.CD34分子介導黏附作用的研究進展[J].新鄉醫學院學報，2008，25（5）：533-535.

[5] 劉淑蘭，梁艷華.濕性理念加整體干預治療1例放射性傷口的效果觀察[J].創傷外科雜志，2009,11(1)：92-93.