降脂清肝顆粒干預脂肪肝家兔脂質代謝作用研究*

李玉紅，江海濤，蘇 菁，李 亮，劉 鵬

（天津中醫藥大學中醫藥研究院，天津市中藥藥理學重點實驗室，方劑學教育部重點實驗室，現代中藥發現與制劑技術教育部工程研究中心，天津 300193）

非酒精性脂肪肝（NAFLD）包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纖維化和肝硬化。NAFLD的病因和發病機制尚未完全明了，與肥胖、胰島素抵抗、高脂血癥等密切相關[1]。研究表明[2]，NAFLD患者碳水化合物攝入過高，多不飽和脂肪酸與飽和脂肪酸比例過低，飼喂家兔高脂高糖飼料造成NAFLD模型，與臨床外源性碳水化合物、脂肪酸攝入過多導致脂肪肝發病機制一致，本實驗應用此模型評價降脂清肝顆粒（JZQG）對NAFLD的治療效果。

1 實驗材料

1.1 藥物 JZQG原料藥，棕褐色干膏粉，由天津中醫藥大學中醫藥研究院提供，出膏率20%，用蒸餾水配成1.6、0.8、0.4 g/mL的藥液；東寶甘泰（復方蛋氨酸膽堿片）：通化東寶藥業股份有限公司生產（批號：050512），用蒸餾水配成36 g/L的藥液。

1.2 實驗動物 健康大耳白家兔72只，雄性，體質量（2.3±0.3）kg，由天津市華榮實驗動物科技有限公司提供，飼養于18～22℃清潔級動物實驗室，合格證編號：W-J津實動質R-A準字第001號。

1.3 實驗試劑 甘油三酯（TG）試劑盒（批號:220391）、總膽固醇（TC）試劑盒（批號:180101），中生北控生物科技股份有限公司提供；游離脂肪酸（NEFA）試劑盒，南京建成生物工程研究所提供。

1.4 實驗儀器 半自動生化分析儀（95版200型，荷蘭威圖）；分光光度計（721RS型，上海第三分析儀器廠）。

2 實驗方法

2.1 分組及給藥 家兔適應性喂養后，禁食（不禁水）12 h，耳緣靜脈取血檢測血清TG、TC，按血清TG隨機分為：空白組10只、模型組62只，模型組給予高脂高糖飼料喂養。6周后，檢測血清TG、TC含量，選取模型成功家兔50只，按血清TG值隨機分為：模型組，JZQG 8、4、2 g生藥/kg組，東寶甘泰組。各給藥組灌胃相應藥物，空白組和模型組給等體積的蒸餾水，用藥體積按5 mL/kg體質量計算，灌胃給藥5周。用藥治療期間空白組飼以普通飼料，模型組和各給藥組給予定量高脂高糖飼料以維持模型，自由飲水。

2.2 高脂高糖飼料配方 10%豬油，1%膽固醇，15%蔗糖，74%基礎飼料混合。

2.3 標本制作及指標檢測 用藥治療期間，每周1次耳緣靜脈取血監測血脂變化。實驗結束，家兔禁食（不禁水）12 h，10%水合氯醛75 mg/kg腹腔注射麻醉動物，腹主動脈取血，血樣3500 r/min離心15 min，檢測血清 TG、TC、NEFA。迅速打開腹腔，取出肝臟，用生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干稱質量，取前葉中部肝組織約20 mm×20 mm×3 mm，10%中性福爾馬林固定；另取一固定部位肝組織檢測肝臟TG、TC。

肝臟病理檢測：肝組織常規洗滌、脫水、石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察病理變化，通過人工計數把各組肝細胞病變程度分等級比較；肝指數（%）＝肝質量/體質量×100%；參考文獻檢測肝脂[3]。

2.4 統計方法 用SPSS 11.5軟件包進行統計學處理，正態分布的計量資料用單因素方差分析，偏態分布的計量資料用秩和檢驗，等級資料用ridit分析。

表1 JZQG對NAFLD家兔肝臟脂變類型、脂變分級、炎癥程度的影響Tab.1 Effects of JZQG on pimelosis type,severity and inflammation Classification in rabbits with NAFLD

3 結果

3.1 家兔肝臟形態 空白組家兔肝臟被膜光滑，肝小葉結構正常，肝細胞大小正常；模型組家兔肝小葉結構欠清晰，肝細胞腫大，多灶性壞死脫失，竇間隙部分消失，少量尚存，肝細胞出現彌漫性、泡沫樣脂肪變性，肝小葉內炎癥點狀或小灶性壞死，匯管區有程度不等的炎細胞浸潤及纖維組織增生；JZQG高中劑量組肝細胞脂肪變性程度低于模型組，匯管區及肝細胞小葉內炎癥也較模型組減輕，見圖1。

根據病理學脂肪肝分級標準[4]，將各組家兔肝臟脂變類型、脂變分級、炎癥程度列表，見表1。

3.2 JZQG對NAFLD家兔肝指數、肝組織TG、TC含量的影響 與空白組相比，模型組家兔肝指數、肝組織TG、TC含量明顯升高（P＜0.01）。JZQG8g生藥/kg組、4 g生藥/kg組可以降低家兔肝指數、肝組織TG、TC含量，與模型組相比有顯著性差異（P＜0.01或P＜0.05）。見表 2。

3.3 JZQG對NAFLD家兔血清TG、TC、NEFA的影響 與空白組相比，模型組家兔血清TG、TC、NEFA顯著升高（P＜0.01）。JZQG 8 g生藥/kg組、4 g生藥/kg組能明顯降低血清TG含量，JZQG 8 g生藥/kg組能降低血清TC，3個劑量組均能降低血清NEFA，與模型組相比差異顯著（P＜0.01）。見表3。

表2 JZQG對NAFLD家兔肝指數、肝組織TG、TC的影響(±s)Tab.2 Effects of JZQG on liver coefficient,TG and TC in liver in rabbits with NAFLD(±s)

表2 JZQG對NAFLD家兔肝指數、肝組織TG、TC的影響(±s)Tab.2 Effects of JZQG on liver coefficient,TG and TC in liver in rabbits with NAFLD(±s)

注：與空白組比較，**P<0.01;與模型組比較，△P<0.05,△△P<0.01。

組別 劑量（g/kg）n空白組模型組JZQG JZQG JZQG東寶甘泰－－8420.18101010101010肝指數（%）2.65±0.443.97±0.64**3.09±0.60△△3.38±0.53△3.92±0.453.23±0.57△△肝組織TG（mmol/kg）10.2±1.320.6±4.2**13.0±3.1△△15.9±2.6△△18.8±4.312.1±2.4△△肝組織TC（mmol/kg）4.8±0.733.2±3.7**22.9±3.1△△26.1±4.1△△26.6±5.7△△24.2±2.1△△

4 討論

非酒精性脂肪肝至今尚無完全有效的藥物治療，目前臨床治療多集中在干涉其發病機制的各種途徑，治療方案主要針對胰島素抵抗、氧化應激、糖尿病、高脂血癥、肥胖與肝纖維化等[5]。臨床研究表明，一個多學科綜合治療方案對脂肪肝是行之有效的，包括限制熱量及飽和脂肪酸攝入、規律的體育鍛煉以及藥物干預等。中醫藥治療脂肪肝有確切的療效，具有降低血脂、改善肝內脂肪沉積、保護肝臟、改善臨床癥狀等多種功能，具有廣闊的應用前景。

表3 JZQG對NAFLD家兔血清TG、TC、NEFA含量的影響(±s)Tab.3 Effects of JZQG on TG,TC and NEFA in serum in rabbits with NAFLD(±s)

表3 JZQG對NAFLD家兔血清TG、TC、NEFA含量的影響(±s)Tab.3 Effects of JZQG on TG,TC and NEFA in serum in rabbits with NAFLD(±s)

注：與空白組比較，**P<0.01;與模型組比較，△△P<0.01。

組別 劑量（g/kg）n空白組模型組JZQG JZQG JZQG東寶甘泰－－8420.18101010101010 TG(mmol/L)2.27±0.7515.24±9.61**5.89±4.54△△5.28±5.08△△10.30±9.299.61±7.76 TC(mmol/L)1.16±0.4320.52±5.31**13.08±5.12△△20.65±7.1420.08±7.1921.84±4.39 NEFA（μmol/L）121.32±81.291295.26±580.80**279.74±173.28△△409.21±416.79△△600.53±171.29△△1000.00±625.62

降脂清肝顆粒由制何首烏、決明子、柴胡、丹參等中藥組成。何首烏養血益肝，固精益腎，潤腸通便，導濁下行；決明子滋肝腎；柴胡疏肝氣；丹參養血活血，祛瘀化濁；澤瀉利水化濕；姜黃活血通經。制首烏配決明子補益肝腎；柴胡、丹參、澤瀉、姜黃疏肝導濁，全方融補虛瀉實為一體，升清導濁，通補并用，共湊補益肝腎、疏肝導濁之功，適用于肝腎陰虛、濁邪沉積之非酒精性脂肪肝、高脂血癥。

現代藥理研究表明，方中何首烏對脂肪肝有確切療效[6]，阻止高TC在肝內的沉積，降低谷草轉氨酸（AST）和谷丙轉氨酸（ALT）；決明子能明顯改善體內膽固醇的分布狀況，對于膽固醇最終被轉運到肝臟作最后處理十分有利，提取物具有良好的降脂保肝作用[7]；姜黃具有良好的抗脂肪肝作用等[8]。

本實驗研究結果顯示，JZQG能夠減輕高脂高糖飼料誘發的脂肪肝家兔肝臟脂肪變性程度，顯著降低肝指數、肝組織TG、TC含量及血清TG、TC、NEFA含量，調節脂肪肝家兔血脂，減輕脂質在肝臟的沉積，從而起到抗脂肪肝作用。

[1] Zelber-Sagi S,Nitzan-Kaluski D,Halpern Z,et al.Prevalence of primary non-alcoholic fatty liver disease in a population-based study and its association with biochemical and anthropometric measures[J].Liver Int,2006,26:856-863.

[2] Toshimitsu K,Matsuura B,Ohkubo I,et al.Dietary habits and nutrient intake in non-alcoholic steatohepatitis[J].Nutrition,2007,23:46-52.

[3] 徐叔云,卞如濂,陳 修.藥理實驗方法學[M].第3版.北京：人民衛生出版社，1982：1191-1192.

[4] 范建高,曾民德.脂肪性肝病[M].北京：人民衛生出版社，2005：364-366.

[5] Devaraj S,Siegel D,Jialal I.Simvastatin (40mg/day),adiponectin levels,and insulin sensitivity in subjects with the metabolic syndrome[J].Am J Cardiol，2007，100:1397-1399.

[6] 中國現代應用藥學編輯部.首烏制劑治療脂肪肝相關研究獲得國家專利[J].中國現代應用藥學，2008，25（2）：114-114.

[7] 劉必旺，趙 換，王 艷，等.決明子乙酸乙酯提取物對多因素誘導的大鼠脂肪肝的影響[J].世界結合雜志,2008,3（10）:579-581.

[8] 任永麗，徐宗佩，梁汝圣，等.姜黃素對家鴨脂肪肝模型肝脂與血脂的干預效果及機制研究[J].時珍國醫國藥，2008，19（10）：2327-2329.