海洛因依賴者血清中Th1和Th2細胞產生主要細胞因子水平的研究

何 軍 左 麗 (貴陽醫學院免疫學教研室,貴陽550004)

阿片類物質濫用現象已成為—個全球性健康和社會問題,越來越引起人們的重視。阿片類物質影響機體神經、內分泌、免疫、循環、代謝等各個器官系統的功能狀態[1,2],長期吸食海洛因可導致機體免疫功能的降低,使機體對寄生蟲、病毒、細菌的機會感染率增高,同時長期海洛因依賴者多交叉采用不潔凈注射器靜脈注射吸毒,使其遭受血源傳播性病原體如乙肝、丙肝、梅毒、HIV、炭疽等感染遠高于正常人群[3,4]。早在1974年,Brown等[5]提出海洛因對免疫功能有損傷作用的觀點,表現為淋巴細胞轉化率顯著降低。Bhargara等[6]又發現海洛因可廣泛抑制機體細胞免疫功能,使淋巴細胞增殖和活性受抑制。

細胞因子作為細胞間信號傳遞分子,主要參與調節免疫應答、免疫細胞分化發育、介導炎癥反應等。有學者認為,細胞因子含量測定可作為了解機體免疫功能的一項重要指標[7]。到目前為止,阿片類藥物影響機體的免疫功能主要從性別、年齡、吸毒方式等進行研究,而排除常見血液性傳播病毒感染的海洛因依賴者,根據吸食海洛因時間長短,檢測不同亞類T淋巴細胞產生的主要細胞因子來了解海洛因對機體免疫功能的影響報道較少,本文做了相關研究,報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 受檢對象:海洛因依賴組:收集2009年1月～12月貴州省第二人民醫院美沙酮維持治療門診就診的海洛因依賴者共93例,其中男69例,女24例,年齡20～52歲,平均38.2歲。吸食海洛因時間平均8.0年,海洛因日均用量0.25～5.2克。全部患者海洛因濫用史明確,符合DSM-Ⅲ-R關于阿片類藥物依賴診斷標準。均排除HBsAg、HCV、HIV、TP陽性(用ELISA法),全自動生化分析儀排除肝功能異常(ALT＞40),腎功能異常(BUN、CRE、UA在參考范圍外),排除接受過美沙酮治療,6月內使用免疫制劑。對照組:來自貴州省第二人民醫院體檢中心正常健康體檢者31例,其中男22例,女9例,年齡在21～50歲,平均年齡37歲。各例排除內容同上。

1.2 主要試劑和儀器 主要的ELISA試劑盒為美國GBD公司原裝,試劑批號:I015-50,I042-00。-40℃低溫冰箱(青島海爾公司),德國Eppendorf微量移液器,美國BIO-TEK ELX800UV酶聯免疫檢測儀,北京普朗DNX-9620A電腦洗板機,恒溫水浴箱(上海醫療器械七廠600型)。

1.3 研究方法 標本收集:提供血樣者均空腹采集靜脈血4 ml于真空采血管,37℃水浴 30分鐘后,3 000 r/min離心15分鐘,取血清1.5 ml于Ep管,-40℃冰箱保存待測。測定方法:雙抗體夾心ELISA法檢測血清IFN-γ、IL-4水平,按照試劑說明書操作。

2 結果

2年以內組、5-10年組、10年以上組海洛因依賴者血清IFN-γ水平均高于正常對照組(P＜O.O5),而血清IL-4水平均低于正常對照組(P＜0.05)。IFN-γ水平,2年以內組低于5～10年組,兩組間有統計差異(P＜0.05),而與10年以上組相當,兩組間無統計差異;5～10年組高于10年以上組,兩組間有統計差異(P＜0.05)。IL-4水平,2年以內組含量高于5～10年組,兩組間有統計差異(P＜0.05);2年以內組與10年以上組相當,兩組間比較無統計差異;5～10年組低于10年以上組,兩組間有統計差異(P ＜0.05,表 1,圖1 、2)。

表1 各組海洛因依賴者血清中Th1和Th2細胞產生主要細胞因子水平的比較(±s,pg/ml)Tab.1 Comparisons among theconcentrations of the cytokines produced mainly by Th1/Th2 cell in sera from theheroin addicts of different periods of time(±s,pg/ml)

表1 各組海洛因依賴者血清中Th1和Th2細胞產生主要細胞因子水平的比較(±s,pg/ml)Tab.1 Comparisons among theconcentrations of the cytokines produced mainly by Th1/Th2 cell in sera from theheroin addicts of different periods of time(±s,pg/ml)

Note:1)Compared with normal,P＜0.05;2)Compared with 5-10 yearsgroup,P＜0.05;3)Compared with over 10 yearsgroup,P＜0.05.

Cytokines Heroin addicts groups Within 2 years 5-10 years Over 10 years Normal group IFN-γ 108.52±25.841)2) 133.13±36.351)3) 113.4±38.171) 88.73±33.94 IL-4 129.18±83.421)2) 76.35±47.011)3) 139.74±111.371) 251.50±58.01

圖1 吸食海洛因2年內、5-10年、10年以上和正常人血清IFN-γ、IL-4水平比較Fig.1 Comparison of concentrations of IFN-γand IL-4 in sera between the groups of heroin addicts of within 2 years,5-10 years,over 10 years and the normal group

3 討論

海洛因是阿片類衍生物,與阿片受體結合后發揮作用,人體內包括免疫細胞在內的多種細胞表面廣泛表達阿片受體。當海洛因作為外源性阿片物質進入機體后,影響機體的神經-內分泌-免疫調節網絡,使機體的免疫系統的固有免疫、細胞免疫和體液免疫功能嚴重受損[8]。Vallejo等[9]認為外源性海洛因通過下丘腦-垂體-腎上腺軸和自主神經系統抑制免疫功能,至少部分由中樞、外周神經和免疫細胞的阿片受體介導。Saurer等[10]證實神經系統的神經伏核作為海洛因的神經基質參與誘導機體免疫系統改變。細胞因子作為免疫調節網絡中的關鍵性介質,與神經-內分泌系統聯系緊密,故研究海洛因依賴者血清細胞因子水平對了解海洛因影響機體免疫功能有重要意義。

人體的免疫系統存在復雜的調節機制,其中T細胞亞群對于免疫應答的方向和結果有著非常重要的意義[11]。CD4+T細胞是構成機體適應性免疫功能的重要組成部分,根據產生細胞因子及生物學功能的不同分為Thl、Th2細胞等。Th1細胞主要產生IFN-γ等細胞因子,Th2細胞主要產生IL-4等細胞因子,IFN-γ和IL-4相互拮抗,調控Th1和Th2細胞的擴增和功能。

本實驗觀察在海洛因依賴者吸食海洛因三個時間段IFN-γ水平均高于正常對照組,與目前國內外研究的吸毒者IFN-γ水平降低存在一定差異[12],但與嗎啡依賴大鼠的報道一致[13],而IL-4水平均低于正常對照組,與研究文獻報道一致[12,14,15],與另一些研究文獻報道也存在差異[16,17],各研究報道不一致,可能為研究方法不同或吸毒方式、吸毒者年齡、性別不同及物種不同等有關,有待進一步研究。

本實驗觀察從2年以內、5～10年到10年以上海洛因依賴者血清中T細胞產生主要細胞因子的變化,IFN-γ水平逐漸降低,IL-4水平從降低到升高改變。IFN-γ水平的升高和IL-4水平的降低提示Th1細胞介導的細胞免疫功能亢進,抑制Th2細胞介導的體液免疫功能,導致Th1/Th2平衡紊亂。Th細胞是機體重要的免疫調節細胞,主要包括Th1和Th2,Th1細胞主要分泌的IFN-γ,促進MHC分子表達和抗原遞呈,溶解病毒感染的單核細胞,同時釋放大量的細胞因子,血清IFN-γ的升高,提示T細胞的大量激活。IFN-γ還可刺激CTL細胞的增殖和分化,特異性殺傷病毒或胞內寄生病原體感染的靶細胞。Th2細胞主要分泌的IL-4,促進B細胞的活化、增殖、分化,抗體的產生和IgE類別轉換,可抑制Th1類細胞因子產生。Th1和Th2的調節對維持機體正常免疫功能至關重要[18],正常情況下,Th1/Th2通過分泌細胞因子發揮相互調節和彼此制約作用,Mosmann[19]認為Th1與Th2的平衡是決定身體免疫狀態的基礎,Th1與Th2比值發生偏移,將導致機體的某一種反應占優勢,繼而引起疾病。本研究海洛因依賴者的三個吸食海洛因時間段的Th1/Th2均高于正常對照組,說明海洛因依賴者的Th1/Th2處于失衡狀態。尤其海洛因依賴5～10年間時表現更為顯著,表現體液免疫功能嚴重缺陷,此時,增加了病原體入侵機體并使之感染的風險,分泌抗體減少,可能罹患病毒感染并使之消除的難度就更加大。吸食海洛因超過10年,機體表現IFN-γ分泌逐漸減少,IL-4產生相對升高,細胞免疫缺陷趨勢增加,機體感染細菌、病毒、寄生蟲的機會就會越來越大。多項研究表明,阿片肽系統一方面對機體Th1和Th2型細胞因子有調節作用,另一方面,細胞因子也同樣對阿片肽和阿片受體系統有調控作用[20]。

Th1、Th2細胞產生主要細胞因子IFN-γ、IL-4在海洛因依賴者血清中水平改變明顯,證明海洛因依賴者存在Th1/Th2功能紊亂,特別是吸食5～10年間以Th1亢進,Th2降低為主。

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