正交設計優化尿素軟膏質量控制工藝

陳渝軍，楊 杰，梅 艷，管紅珍，李琳琳

(武漢市婦女兒童醫療保健中心，湖北武漢 430016)

尿素軟膏作為皮膚外用藥，主要適用于皮膚角化癥、手足皸裂、干皮癥、魚鱗病等。其主要成分為尿素，可溶解角蛋白，增加蛋白質的水合作用，從而使角質軟化和溶解。我院制劑室配制的尿素軟膏是臨床皮膚科常用的藥物。本文采用正交試驗設計法，根據中國醫院制劑規范[1]收載的紫外分光光度法測定尿素的含量方法，考察提取次數、水浴溫度、加10%氯化鈉溶液量及提取時間的影響，確定尿素軟膏中尿素質量控制的最佳提取工藝。

1 儀器與試藥

UV-160A紫外分光光度計（日本島津）；AB204十萬分之一電子分析天平（瑞士梅特勒托利多）。尿素對照品（中國生物制品檢定所，批號：100288-200201）；尿素（湖南省芙蓉聯合制藥廠，批號：20080712），甘油、羊毛脂、凡士林等輔料均為藥用級，其余均為分析純。

2 方法與結果

2.1 正交試驗設計

影響提取工藝的因素主要有：提取次數、水浴溫度、加10%氯化鈉溶液量及提取時間等因素，各取三個水平，按L9（34）設計正交試驗。 見表 1。

表1 正交試驗因素水平Tab.1 The different factors of orthogonal test

2.2 含量測定

2.2.1 專屬性試驗 按處方相當于尿素25 mg的量的尿素、甘油、羊毛脂、凡士林分別用10%氯化鈉溶液溶解定容于100 ml量瓶中，分別于350～600 nm處掃描，見圖1，在此范圍均無吸收；分別按照“2.2.3”項下規定自“精密量取”到“15 min”操作并同樣掃描，見圖2，可見僅尿素在此范圍內有吸收，且其最大吸收波長為430 nm。故本文選擇430 nm為尿素含量的測定波長。

2.2.2 標準曲線的繪制 精密稱取尿素對照品適量，用10%氯化鈉溶液溶解成0.25 g/L的溶液，備用。按照“2.2.3”項下規定自“精密量取”到“15 min”操作并在430 nm的波長處測定吸光度，以其吸收度對濃度進行線性回歸，得回歸方程C=220.7413A-0.4864（r=0.9999，n=7）。 結果，尿素檢測濃度在50～350 μg/ml范圍內呈良好線性關系。

2.2.3 含量測定 精密稱取樣品0.25 g，按表2所列條件進行提取，合并提取液，定容至100 ml作供試品溶液。精密量取供試品溶液與對照品溶液各4 ml，分別置具塞試管中，各精密加入對二甲氨基苯甲醛溶液4 ml，搖勻，暗處放置15 min，立即照紫外分光光度法，在430 nm波長處測定吸光度，按（A供×C對）/（A對×C供）×100%計算尿素百分含量， 即得。方差分析見表3。

表2 正交試驗結果Tab.2 The results of orthogonal test

表3 方差分析結果Tab.3 The results of variance test

從表2結果可以看出，對于提取工藝影響大小順序為B＞A＞D＞C；由表 3可知，A、B 因素水平變化對實驗結果有顯著影響，C、D因素對實驗影響不大。結合直觀分析，擬定最佳提取工藝為A1B1C3D1，即精密稱取樣品0.25 g，采用提取次數4次、水浴溫度60℃、每次加15 ml 10%氯化鈉溶液提取15 min，合并提取液，定容至100 ml量瓶中，作供試品溶液。

2.3 提取工藝的驗證試驗

取樣品（批號：091208）5份，按最佳工藝提取測定尿素含量，實驗結果較為理想，樣品編號1的尿素含量為92.45%；樣品編號2的尿素含量為97.47%；編號3的尿素含量為94.59%；編號4的尿素含量為98.03%；編號5的尿素含量為95.62%，所有數據的（±s）為（95.63±2.25）。

2.4 與《中國藥典》2005年版[2]方法比較

取樣品（批號：091208）適量（約相當于尿素 50 mg），共5份，加乙醇20 ml，水浴加熱，溶解后置冰浴中冷卻30 min，過濾至100 ml量瓶中，用乙醇洗滌容器及濾器并入量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，濾過，續濾液作為供試品溶液。另精取尿素對照品適量，用乙醇稀釋成每毫升約含0.5 mg尿素，為對照品溶液。精密量取供試品與對照品溶液各3 ml，分別置25 ml量瓶中，各精密加對二甲氨基苯甲醛溶液10 ml，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，暗處放置15 min，必要時濾過，立即照紫外分光光度法，在430 nm波長處測定吸光度，計算，即得。結果與優選最佳工藝比較，兩種方法有顯著性差異，見表4。

表4 兩種提取方法結果比較Tab.4 Compare with two kinds of extract method

3 討論

在中國醫院制劑規范收載了測定尿素乳膏含量的方法，沒有明確規定水浴溫度，然而在實際的操作過程中發現其重現性并不理想，故在此對其提取的方法進行了探討。

近幾年的文獻不管用何種方法提取均采用與對照品或原料對比計算尿素含量，本文在反復實驗中探索也認為反應受外界條件影響較大，采用對比法計算尿素含量較為準確，故在含量測定時也采用對比法計算。

《中國藥典》2005年版中尿素乳膏采用乙醇為溶劑一次提取，方法較為簡單，但所用試劑成本較高，且與本文所選最佳工藝比較，結果有顯著性差異，以最佳工藝方法提取率高，更為接近真實值，故采用本文提取工藝更佳。

[1]中華人民共和國衛生部藥政局.中國醫院制劑規范[S].二版.北京:中國醫藥科技出版社,1995:140.

[2]朱莉,吳奧玲.氫化可的松尿素乳膏的制備及質量控制[J].中國醫院藥學雜志,2007,27(2):254-255.

[3]盛國榮,于葆華.復方環磷腺苷乳膏的制備及質量控制[J].中國藥房,2007,18(7):531-533.

[4]吳英嬌,李成.復方尿素硅油乳膏的制備及質量控制[J].中國現代藥物應用,2009,3(10):8-9.

[5]國家藥典委員會.中國藥典[S].二部.化學工業出版社,2005:279.

[6]李世根,謝少玲,蘇錫潭.丹皮酚凝膠的制備及質量控制[J].中國藥房,2006,14(10):145-146.

[7]周慧,李正國,王紅.HPLC測定雙丹顆粒中丹皮酚的含量[J];中成藥,2005,17(05),156-157.

[8]溫利明,倪海華.金膽片全水型薄膜包衣的生產工藝研究[J].中國藥業,2005,18(10):156-157.