HPLC法測定婦科泡騰栓中蛇床子素的含量

陳惠紅，呂建偉，廖玉香（.柳州市中醫院藥劑科，廣西 柳州 54500； .江西中醫學院，江西 南昌 330004）

婦科泡騰栓是醫院傳統經驗方婦科洗劑改進的制劑，由黃柏、苦參、蛇床子、魚腥草、野菊花、忍冬藤等中藥組成，具有清熱燥濕、瀉火解毒、殺蟲止癢等功效，臨床用于治療婦科各種陰道炎。原制劑質量標準已研究了薄層色譜定性鑒別和黃柏中鹽酸小檗堿的含量測定方法[1]，為進一步控制該制劑質量，對方中另一主藥蛇床子的主要有效成分蛇床子素進行含量測定研究。目前蛇床子素的含量測定方法有分光光度法[2]、薄層掃描法[3]、氣相色譜法[4]和高效液相色譜法[5]等。本文采用高效液相色譜法測定蛇床子素的含量。

1 儀器與試藥

LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司），包括SPD-20A紫外檢測器、LC-20AT輸液泵、LCsolution工作站；AL204電子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；雙頻數控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；UV-1601紫外可見分光光度計（日本島津公司）。

婦科泡騰栓（規格：每粒2.7 g，柳州市中醫院制劑室制備）；蛇床子素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110822-200305）；乙腈為色譜純；水為純化水；其他試劑均為分析純 。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Shimpack VP-ODS C18柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)；流動相為乙腈-水（60∶40）；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；檢測波長為323 nm。理論塔板數按蛇床子素峰計算應不低于3000。

2.2 測定波長選擇

取蛇床子素對照品適量，加乙醇使溶解，用紫外分光光度計于200～400 nm范圍內掃描，結果表明，蛇床子素對照品在323 nm波長處有最大吸收峰，因此選擇323 nm作為測定波長。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 取蛇床子素對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1 mL含0.072 mg的溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備 取本品10粒，稱定重量，切碎，混勻，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醇20 mL，精密稱定重量，超聲提取15 min，再精密稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，置0 ℃以下放置30 min，取出，微溶后迅速濾取上清液，放至室溫，即得。

2.3.3 陰性對照溶液的制備 取不含蛇床子的處方藥材，按婦科泡騰栓的制備方法制備陰性樣品，取陰性樣品10粒，照供試品溶液的制備方法，制備陰性對照溶液。

2.4 陰性干擾試驗

按“2.1”項下的色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20 μL進樣測定，結果供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上有一相同保留時間的色譜峰，而陰性對照溶液無干擾，見圖1。

圖1 典型的高效液相色譜圖A-蛇床子素對照品；B-樣品；C-陰性對照； 1-蛇床子素Fig 1 Typical HPLC chromatogramsA-reference substance of osthole; B-sample; C-negative control;1-osthole

2.5 線性關系考察

精密吸取對照品溶液0.50，1.00，2.00，4.00，6.00 mL于10 mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取20 μL進樣，按“2.1”項下的色譜條件，以濃度C（μg·mL-1）為橫坐標，峰面積A為縱坐標進行線性回歸分析，得回歸方程：A= 84 987C+ 5276，r= 0.999 9，結果表明：蛇床子素在3.6～43.2 μg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.6 精密度試驗

取同一濃度對照品溶液20 μL，按“2.1”項下的色譜條件，重復進樣6次，測得峰面積的RSD為1.20%，結果表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗

取同一供試品溶液，分別在放置0，0.5，1，2，4，8 h后，依法測定，結果RSD為0.78%，表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.8 重復性試驗

取同一批樣品10粒，切碎，混勻，精密稱定6份，按“2.3.2”項下方法制備6份供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件測定，計算含量，RSD為1.06%。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品6份，每份約0.25 g，各精密加入蛇床子素對照品，按“2.3.2”項下方法處理后，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，各進樣20 μL，測得蛇床子素峰面積，計算回收率，結果平均回收率為98.20%，RSD = 1.42%，詳見表1。

表1 蛇床子素回收率試驗結果Tab 1 Recovery test of osthole

2.10 樣品含量測定

分別精密稱取3批樣品，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下的色譜條件測定。按外標法計算蛇床子素含量，結果見表2。

3 討論

3.1 提取時間的選擇

本試驗參考有關資料[6-7]，樣品采用乙醇超聲提取，方法簡便。同時考察了超聲提取時間對樣品中蛇床子素提取的影響,結果用乙醇超聲處理10，20，30 min測定結果相近，為確保提取完全,故選擇超聲處理15 min。

3.2 流動相的選擇

曾參考相關文獻[5-8]，分別選用不同比例的甲醇-水、乙腈-水作為流動相進行試驗，根據分離情況，甲醇-水作為流動相雖然經濟實惠，但分離效果不甚理想，最后選擇乙腈-水（60∶40）為流動相，可以使蛇床子素與其他成分很好地分離，峰形理想，且陰性對照無干擾。

本試驗采用HPLC法測定婦科泡騰栓中主要有效成分蛇床子素的含量，方法簡便、準確、重現性好，能有效地用于婦科泡騰栓的質量控制。

[1] 陳惠紅，楊曉敏，李茵，等.婦科泡騰栓的制備及質量控制[J].中成藥，2008，30（10）：附26-附28.

[2] 史家明，張根元.紫外分光光度法測定蛇床子酊劑的含量[J].江蘇藥學與臨床研究，2001，9（2）：14-16.

[3] 魏桂林，劉大偉，羅添，等.薄層掃描法測定復方蛇床子洗劑中蛇床子素的含量[J].時珍國醫國藥，2006，17（4）：562-563.

[4] 張曉霞，周卯星，張高勇，等.氣相色譜法測定蛇床子提取物中蛇床子素的含量[J].時珍國醫國藥，2006，17（8）：1384-1385.

[5] 陳艷平，霍明，陳艷明，等.HPLC法測定蛇床子和婦炎靈膠囊中蛇床子素的含量[J].中成藥，2003，25（3）：196-198.

[6] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005版.北京：化學工業出版社，2005：219-220.

[7] 黃輝，林輝.HPLC法測定婦炎靈膠囊中蛇床子素的含量[J].海峽藥學，2007，19（9）：59-60.

[8] 周靜安，徐玲笑.HPLC法測定金歸洗液中蛇床子素的含量[J].中國藥品標準，2006，7（2）：15-17.