不同單酶制劑混合檢測(cè)對(duì)比研究

湯海鷗 高秀華 黃 輝

復(fù)合酶制劑以綜合各種單酶于一體為優(yōu)勢(shì)已經(jīng)在飼料中得到廣泛應(yīng)用，而且在畜牧業(yè)生產(chǎn)中起到了重要的作用，并起到了非常明顯的效果。復(fù)合酶多以單株菌種發(fā)酵再以互補(bǔ)復(fù)配的方式進(jìn)行生產(chǎn)，因其含有單酶品種多，在進(jìn)行酶制劑檢測(cè)的過(guò)程中各單酶之間可能存在的干擾一直妨礙著復(fù)合酶制劑活性的準(zhǔn)確測(cè)定，例如酸性蛋白酶是否會(huì)影響其他酶制劑活性的表達(dá)等[1]。鑒于此，本試驗(yàn)以各種單酶為研究對(duì)象用不同方式進(jìn)行混合，再進(jìn)行測(cè)定酶活，以研究復(fù)合酶檢測(cè)過(guò)程中存在的問(wèn)題和正確的測(cè)定方法，為商品復(fù)合酶制劑產(chǎn)品的酶活測(cè)定和質(zhì)量控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試木聚糖酶、纖維素酶、淀粉酶和酸性蛋白酶樣品由北京挑戰(zhàn)生物技術(shù)有限公司提供，試驗(yàn)中以測(cè)定的酶活實(shí)際值為準(zhǔn)。

1.2 木聚糖酶活力測(cè)定方法

1.2.1 酶活定義

樣品在溫度37℃、pH值5.5的條件下，1 min內(nèi)從燕麥木聚糖（濃度為1%）中產(chǎn)生了1 μmol木糖所需的酶量，為一個(gè)木聚糖酶活性單位（U）。

1.2.2 底物（1%燕麥木聚糖）配置

稱取1.00 g燕麥木聚糖，用80 ml左右的磷酸氫二鈉－檸檬酸緩沖液溶解，于70℃下磁力攪拌半小時(shí)，冷涼后用醋酸調(diào)至pH值5.5，轉(zhuǎn)入容量瓶中，用緩沖液定容至100 ml。離心機(jī)4 000 r/min離心10 min后取上清液備用。4℃避光保存，有效期為3 d。

1.2.3 DNS試劑配置

稱取3,5-二硝基水楊酸3.15 g，加水500 ml，水浴至45℃，逐步加入100 ml 0.05 mol/l氫氧化鈉溶液，不斷攪拌，直到溶液清澈透明，再逐步加入四水酒石酸鉀鈉91.0 g、苯酚2.50 g和無(wú)水亞硫酸鈉2.50 g，補(bǔ)加水300 ml，攪拌，溶解后停止加熱冷卻至室溫，用水定容至1 000 ml。……