乳腺癌組織中Survivin及C-erB-2的表達及臨床相關性

黃 勇, 王 靜, 倫增軍

(山東省棗莊市立醫院, 山東 棗莊 277001)

乳腺癌是我國女性最常見的惡性腫瘤之一,目前其發病率呈上升趨勢,其病因尚不清楚,治療為以手術為主的綜合治療[1]。影響乳腺癌預后的因素很多,如乳腺腫瘤的大小、腋窩淋巴結是否受累、組織學分類、癌細胞的分化程度、年齡、絕經狀態及激素受體等,但組織形態學相同的乳腺癌,預后也有不同,說明其生物學特征不盡相同[2]。近年來從多種層面檢測乳腺癌細胞的生物學特征,了解腫瘤的惡性程度,指導術后合理治療及預后。Survivin及C-erB-2在多種腫瘤組織中的過度表達,也是乳腺癌中常用的基因標志物之一。我們檢測156例乳腺癌組織中Survivin及C-erB-2的表達,探討與病理分型、臨床分期、淋巴結轉移、腫瘤大小、組織學分級的關系?？偨YSurvivin及C-erB-2的表達情況及相互的關系,分析與乳腺癌生物學行為和預后的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料:選擇2001年1月至2006年12月在我院普外科乳腺癌實施手術患者156例,均有完整的臨床病理學資料,術前均無化療或放療?；颊呔鶠榕?年齡34-78歲,平均年齡56.7歲。腫瘤標本經10%甲醛固定,石蠟包埋,厚4μ m連續切片。按免疫組織化學SP法操作。據WHO組織學分級進行病理診斷和分級,浸潤性導管癌(112例)、浸潤性小葉癌(22例)、單純癌(12例)、其它10例(其中髓樣癌4例、導管內癌3例、腺癌2例、乳頭狀癌1例)。按Motting-Han分級法分級:根據細胞異型性低、中、高分為1、2、3度,其中腺體形成＞75%,＜10%為1和3度,居兩者之間者為2度。每個高倍視野下核分裂象平均＜1、1-2和＞2個(計數10個高倍視野計算平均值)分為1、2、3度,計分三項總和8-9度為Ⅲ級,6-7度為Ⅱ級,3-5度為Ⅰ級。按國際標準TNM 分期,Ⅰ期29例,Ⅱ期104例,Ⅲ期23例。全部患者均行乳癌改良根治術。146例獲得術后隨訪,隨訪率93.6%,隨訪時間為6-40個月。術后2年死亡者2例,分別為臨床Ⅱ和Ⅲ期。

1.2 試劑與方法:應用免疫組織化學SP方法檢測Survivin及C-erB-2的表達。石蠟切片經二甲苯脫蠟,梯度乙醇水化,檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復,滴加過氧化酶阻斷液室溫10min,磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗,滴加非免疫性動物血清室溫10min,滴加一抗即抗Survivin抗體(蒸餾水1∶100稀釋)、抗C-erB-2或抗PCNA,4℃冰箱孵育過夜,PBS沖洗,滴加生物素偶聯的二抗,室溫10min PBS沖洗,滴加鏈霉素親和素-過氧化物酶溶液,室溫10min,PBS沖洗,滴加DAB顯色,沖洗,蘇木素復染,封片。已知的Survivin及C-erB-2染色陽性的乳腺癌組織為陽性對照,以PBS代替一抗為陰性對照。光鏡下觀察,每片隨機觀察5個高倍視野,計數陽性細胞所占的百分數。

1.3 結果判斷:①乳腺癌組織Survivin表達的判斷:Survivin陽性表達為細胞質和細胞膜上呈棕黃色顆粒,著色細胞數＞10%為陽性;無著色細胞或著色細胞數≤10%為陰性。②乳腺癌組織C-erB-2表達的判斷:CerbB-2陽性表達為細胞漿和/或細胞膜著色呈棕黃色顆粒,著色細胞數＞10%為陽性;無著色細胞或著色細胞數≤10%為陰性。

1.4 復發轉移情況:計算Survivin和C-erB-2雙陽性患者復發轉移率。

1.5 統計學處理:應用SPSS10.0統計軟件進行統計分析;數據比較采用X2檢驗,P＜0.05有統計學意義。

2 結 果

乳腺癌組織中Survivin及C-erB-2陽性表達率分別為71.8%(112例)及64.7%(101例)。

2.1 Survivin及C-erB-2陽性表達與乳腺癌病理分型、腫瘤大小無關(P＞0.05),與組織學分級、臨床分期、淋巴結轉移數目相關,差別有統計學意義(P＜0.05)。見表1。Survivin及C-erB-2陽性表達隨著乳腺癌組織分化程度降低,淋巴結轉移數目增加,TNM分期增高而增強。

表1 Survivin、C-erB-2及PCNA表達與腫瘤大小、病理分型、組織學分級、臨床分期及淋巴結轉移的關系(n)

2.2 乳腺癌中Survivin和C-erB-2的表達呈正相關(P＜0.05,r=0.63),見表2。

表2 Survivin和C-erB-2的表達的關系(n)

2.3 Survivin和C-erB-2雙陽性患者復發轉移率高于雙陰性患者(P＜0.05),見表3。

表3 Survivin和C-erB-2的雙陽性表達與患者復發轉移的關系(n)

3 討 論

細胞凋亡是機體重要的病理生理過程,諸多因素參與,凋亡的異常抑制與惡性腫瘤的發生、進展以及耐藥性的產生密切相關[3,4]。IAP(inhibitor of apoptosis proteins,凋亡抑制蛋白)在凋亡的負性調控中起重要作用[5]。Survivin是IAP家族新成員,其正常情況下僅表達于胚胎組織,可再表達于多種惡性轉化細胞株和惡性腫瘤組織[6]。Survivin不僅抑制細胞凋亡,還參與有絲分裂的調節。Survivin可直接抑制Caspase-3和Caspase-7的活性,阻止細胞凋亡,與細胞增殖、分裂和細胞周期控制密切相關,Survivin可作為某些癌的預后和復發的標志,與癌的發生、轉移有一定的關系[7]。本研究表明乳腺癌組織中Survivin陽性表達率為71.8%,其表達隨癌組織分化程度降低,淋巴結轉移數目增加,TNM分期增高而增強。提示Survivin在乳腺癌早期即起作用并持續于浸潤轉移過程中,其表達可作為乳腺癌組織分化及預后的重要指標。

C-erB-2癌基因又稱neu或HER-2在胎盤、胚胎上皮組織及許多腫瘤細胞中呈高表達,而在正常組織中為陰性或微量表達。其過度表達在致瘤轉化和腫瘤發生中起關鍵作用。研究表明HER-2陽性可作為乳腺癌的一個獨立的預后指標。其過表達的乳腺癌表現為病情進展迅速、局部復發的危險性高、化療緩解期短,無病生存期和總生存期縮短[8]。本研究顯示乳腺癌組織中C-erbB-2陽性表達率為64.7%,其表達隨著癌組織分化程度降低,淋巴結轉移數目增加,TNM分期增高而增強。研究還發現Survivin和C-erB-2的表達呈正相關,提示乳腺癌的發生、發展、轉移過程中兩基因具有協同作用。Survivin和C-erB-2的表達既有不同的生物學意義,又有相關性,Survivin陽性組中C-erB-2陽性率明顯高于Survivin陰性組。凋亡抑制基因Survivin和原癌基因C-erbB-2可能在乳腺癌的發生、發展過程中起重要作用,Survivin可阻止腫瘤細胞的凋亡,而C-erB-2過度表達可刺激腫瘤細胞惡性生長 ,乳腺癌組織中兩者異常表達具有協同作用。聯合檢測乳腺癌組織中Survivin和C-erB-2表達有重要的意義。Survivin和C-erB-2高表達者應加強術后的鞏固性治療和隨訪。

乳腺癌治療是以手術為主的綜合治療,術式有多種,總的趨勢不外保守和擴大兩方面。保守手術的代表術式是乳房局部切除術和全乳切除術,術后需輔助放化療。如何選擇合適的早期癌患者行保守手術以獲得較好的治療效果,還未得出結論。本研究提示活檢證實乳腺癌,若Survivin和C-erB-2表達均呈陽性,宜行根治手術,加強術后的鞏固性治療和隨訪。擬行保乳患者,建議穿刺行Survivin和C-erB-2檢測,若均陽性表達不宜行保乳手術。

[1]吳在德,主編.外科學[M].第5版.北京:人民衛生出版社,2001.350-362.

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[8]浦勇順,周金良,王芳.p53和C-erB-2過度表達與乳腺癌預后的關系[J].上海醫科大學學報,2001,21:170-172.