ROC曲線評價甲胎蛋白異質體對原發性肝癌的診斷價值

曹 立 ，孫華寶，敖琴芳 ，梁 青 ，葉德強 ，呂定英，羅 芳

(南昌市第九醫院，1、檢驗科；2、質控科；3、感染科，江西 南昌 330002)

原發性肝癌(primary hepatic carcinoma，PHC)為全球第5大常見惡性腫瘤，我國肝癌的死亡居惡性腫瘤死亡率的第2位，占全世界肝癌死亡人數的45%。PHC病程發展快、預后差、死亡率高，及時準確的診斷和治療是提高生存率的關鍵，而早期PHC多無明顯的臨床癥狀和體征，且病灶直徑小于5cm，一般不易被發現。甲胎蛋白(AFP)是一種具有特征性的寡糖鏈蛋白，由于其癌胚性作為原發性肝癌(PHC)的輔助診斷及療效觀察指標應用多年，但臨床上仍有30～40%的PHC患者血清AFP含量在正常范圍內[1]。根據糖鏈類型不同的AFP與植物凝集素親和性不同的特性，可將其分為幾種不同類型的AFP異質體[2]。我們對150例肝病患者和25例健康體檢者進行了小扁豆凝集素親和性甲胎蛋白異質體和AFP等8種腫瘤腫瘤標志物檢測，采用ROC曲線以評價其對PHC的診斷價值。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 150例各型肝病患者均為2007年5月至2009年5月我院住院患者，臨床診斷均符合2000年第十次全國病毒性肝炎與肝病學術會議修訂的“病毒性肝炎防治方案”的標準[3]，男122例，女28例，年齡25～70歲。其中急性肝炎(AH)25例，慢性肝炎 (CHB)25例，肝硬化 (LC)25例，原發性肝癌(PHC)50例，重型肝炎(SH)25例，原發性肝癌患者均經病理學或影像學檢查證實。正常對照組(NC)25例，男17例，女8例，年齡20～66歲，均為同期我院體檢正常并排除其他慢性疾病的健康者作為對照。

1.2 試劑 AFP-L3試劑由北京熱景生物技術有限公司提供，AFP、CEA、SF、CA199 試劑盒為羅氏公司產品，GGT、ALP、AFU的試劑盒為維坊三維公司產品。

1.3 檢測方法

1.3.1 AFP、CEA、SF、CA199 檢測采用電化學發光免疫法，操作嚴格按說明書，使用儀器為羅氏E2010電化學發光儀。

1.3.2 AFP-L3的分離采用微量離心柱法，離心柱內裝有耦聯了小扁豆凝集素(LCA)的瓊脂糖，可以特異結合AFP-L3，當血清流過離心柱時，與LCA結合力強的甲胎蛋白異質體就結合于柱中，經過清洗洗去不結合的甲胎蛋白，再經過離心洗脫后獲得AFP-L3，其后檢測方法同AFP。

1.3.3 GGT、ALP、AFU檢測采用酶速率法，操作嚴格按說明書，使用儀器為OLYMPUS AU640全自動生化分析儀。

1.4 統計學處理 用SPSS 16.0軟件進行ROC分析及單因素方差分析，組間均數兩兩比較用S-N-K法；率的比較用χ2檢驗；用四格表法計算靈敏度(Se)、特異度(Sp)、Youden 指數、陽性預測值(PV+)、陰性預測值(PV-)、準確度(AC)特征參數。

2 結果

2.1 肝病組與正常對照組8種腫瘤標志物檢測結果，見表1。組間均數兩兩比較結果是AFP、AFPL3、CEA、AFU、GGT 指標，PHC 組與其它各組間差異有統計學意義；CA199指標，PHC組、SH組與NC組，PHC組與AH組、CHB組差異有統計學意義；SF指標，NC 組與 PHC、AH、CHB、LC、SH 組，PHC 組與CHB組間差異有統計學意義；ALP指標，PHC組與其它各組間差異有統計學意義，AH組與NC組間差異有統計學意義。

表1 肝病組與正常對照組8種腫瘤標志物檢測結果

2.2 8種腫瘤標志物ROC分析結果及特征參數中，AFP-L3 的 AUCROC最大，Youden 指數、PV-、AC最高；SF 的 AUCROC最小，Youden 指數、PV+最低；Se指標中GGT的最高，CEA最低，Sp指標中ALP-L3最高，CA199最低，AC指標中AFP-L3最高，AFU最低，見表2。

表2 8種腫瘤標志物ROC分析結果及特征參數

2.3 PHC組8種腫瘤標志物的ROC曲線，見圖1。

圖1 PHC組8種腫瘤標志物的ROC曲線

2.4 PHC組不同AFP濃度患者AFP-L3的檢測結果，見表3。

3 討論

受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)是一種以信息檢出理論為基礎，廣泛應用的數理統計方法，ROC曲線描述了診斷試驗區分患者與非患者的固有能力，不受患病率的影響，綜合了靈敏度、特異度兩個指標，而且考慮了所有可能的診斷界值的影響，因而能更客觀全面地評價診斷試驗的準確性，可用于診斷臨界點的正確選擇，對臨床實驗室工作尤為重要[4]。本研究結果顯示，用于鑒別診斷PHC腫瘤標志物中，AUC≥O.7的指標有AFP、AFP-L3、CA199、CEA、AFU、GGT、ALP，表明其有一定的準確性，可作為預測PHC的單項指標[5-7]。

表3 不同AFP濃度AFP-L3測定結果

3.1 AFP-L3在8種原發性肝癌標志物中診斷價值

1970年Purves[8]等首次應用淀粉凝膠電泳分離人AFP異質體，因AFP分子存在異質性，尤其是糖鏈的差異較大，導致一些PHC患者AFP檢測陰性或持續低濃度陽性。在本研究中PHC組AFP-L3百分比均數為 (18.2±10.1)顯著高于非PHC肝病組(6.7±3.2)(P=0.00)，也顯著高于慢性肝炎組(5.8±2.2)(P=0.00)與肝硬化組(8.2±3.6)(P=0.00)；慢性肝炎組、肝硬化組及PHC組AFP-L3的陽性率分別為0%、12%、76%，差異有統計學意義(P＜0.01)，從表 2可見，AFP-L3的 AUCROC最大， 其 Sp、Youden指數、PV-、AC也最大，AFP-L3檢測提高了PHC診斷檢出率和正確率，在8種PHC標志物中單項診斷價值最高。

3.2 AFP-L3在PHC診斷中早期預警作用

據文獻報道，AFP-L3陽性對PHC正確預警率達94%[9]，而且與影像學相比較,AFP-L3在早期PHC的診斷可提前3～28個月[10]。本研究中，在臨床診斷、B超診斷均為陰性，AFP-L3為陽性的13例患者中，3～18個月后11例被診斷為肝癌。可見，在影像學檢查尚未發現肝癌特征性占位性病變時，對AFP低濃度陽性病例進行AFP-L3檢測可以早期預警肝癌發生。

3.3 AFP-L3在低濃度AFP陽性良、惡性肝病的鑒別作用

AFP、AFP-L3對PHC的敏感性分別為84%和76%，差異無統計學意義(F=1.0，P=0.317)，由表 3可見，AFP＜400ng/ml時，AFP-L3 陽性率為 30%，AFP＞400ng/ml時，AFP-L3陽性率為100%，兩者差異有統計學意義(F=31.52，P=0.00)，而不同AFP濃度患者的AFP-L3濃度差異無統計學意義 (P＞0.05)，AFPL3與AFP濃度無相關性。因此,AFP-L3更適用于AFP低濃度陽性良、惡性肝病的鑒別診斷，與鄭穎[11]等報道一致，適合向臨床廣泛推廣。

我國是肝炎病毒感染較重的國家之一，尤其HBV、HCV感染與PHC的發生關系密切。在高危人群中，早期監測和發現PHC，可贏得手術治療時間，提高生存率。但因PHC細胞生物學特性具有復雜性及多態性，不同時期的癌細胞在生長速率、表面受體、免疫特性、浸潤性、轉移性、對藥物毒性方面均可能不同。臨床上現有的PHC標志物眾多，尚無單一標志物能夠診斷所有PHC，隨著生物科學技術的不斷發展，正確合理使用血清標志物，有很大臨床價值，每一種血清腫瘤標志物在診斷價值上都有其獨特的優勢，也有它的局限性。因此，聯合檢測幾種血清PHC血清標志物可以優勢互補，提高診斷效率，這也是近年原發性肝癌實驗診斷的發展趨勢。

[1]湯釗猷.現代腫瘤學[M].第2版,上海:上海醫科大學出版社,2001:553.

[2]Philip JJ,Stephen H,Phil M,et al.Germ cell tumors express a specific alpha-fetoprotein variant detectable by isoelectric focusing[J].Cancer,1995,75(7):1663-1668.

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[11]鄭 穎,單曉潔,任茗睿,等.微量離心柱法檢測甲胎蛋白異質體對原發性肝癌診斷的意義[J].浙汀實用醫學,2009,14(1):3-4.