九江地區(qū)丙型肝炎病毒基因分型

桂亞萍，鄭 惠，沃 琤，孔令和

(九江市第三人民醫(yī)院，江西 九江 332000)

九江地區(qū)丙型肝炎病毒基因分型

桂亞萍，鄭 惠，沃 琤，孔令和

(九江市第三人民醫(yī)院，江西 九江 332000)

丙型肝炎病毒；反向點雜交；基因分型

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是引起輸血后非甲非乙型肝炎的主要病原分子。HCV是小的有包膜的單股正鏈RNA病毒，屬黃病毒科丙型肝炎病毒屬，顆粒大致呈球形，直徑約50nm，基因全長約9400個核苷酸。由于RNA復(fù)制酶的低保真性和缺乏校正功能，使HCV呈高度異質(zhì)性。根據(jù)HCV的核苷酸序列的差異，可將HCV分成1～6型及不同亞型(以a，b，c等表示)[1]。HCV的基因型及基因亞型的分布具有一定的區(qū)域性，不同的基因型及基因亞型所致肝病的嚴重程度以及對干擾素的治療反應(yīng)及用藥療程都不同[2，3]。因此，有必要在治療前先給予HCV的基因分型檢測，根據(jù)檢測的結(jié)果制定治療方案和療程。本研究旨在了解九江地區(qū)HVCRNA陽性感染者的基因分型分布，以指導(dǎo)臨床治療及預(yù)后的判斷。

1 材料與方法

1.1 一般資料 試驗組為江西省九江市第三人民醫(yī)院院門診及住院患者，HCV-RNA均＞5.0×104拷貝/m l共55例，其中男41例，女14例，有輸血史43例，年齡22～65歲(平均年齡42歲)。對照組10例，為健康體檢者血清標(biāo)本。

1.2 試劑HCV-RNA核酸擴增(PCR)熒光定量檢測試劑盒、丙型肝炎病毒基因分型反向點雜交(PCR-RDB)檢測試劑盒：均由中山大學(xué)達安基因股份有限公司提供。自備試劑：氯仿、異丙醇、75%乙醇。

1.3 儀器 美國ABI-7300熒光定量PCR擴增儀，美國ABI2720型PCR定性擴增儀，美國BECKMAN COULTER 64R型低溫高速離心機，DKZ-2型電熱恒溫振蕩水槽，BENQ 5000S掃描儀等。

1.4 方法

1.4.1 HCV-RNA-PCR熒光定量檢測 嚴格按照HCV-RNA核酸擴增(PCR)熒光定量檢測試劑盒使用說明書進行操作，(1)RNA提取；(2)逆轉(zhuǎn)錄；(3)PCR擴增及熒光定量檢測；(4)對HCV-RNA含量≥5×104拷貝/ml的陽性標(biāo)本進行基因分型檢測。

1.4.2 HCVRNA基因分型檢測 按照丙型肝炎病毒基因分型反向點雜交檢測嚴格按說明書進行操作：(1)RNA提取與逆轉(zhuǎn)錄；(2)PCR擴增；(3)擴增產(chǎn)物進行，反向點雜交與顯色。

2 結(jié)果

HCV基因分型反向點雜交檢測結(jié)果；對55例HCV-RNA含量≥5.0×104拷貝/m l的標(biāo)本及10例健康體檢者進行基因分型反向點雜交檢測。熒光定量PCR檢測HCV-RNA陽性的55例標(biāo)本其不同基因分型具體檢測結(jié)果見表1。

表1 HCV基因分型結(jié)果

3 討論

HCV基因型別的分布與地域有很大關(guān)系。HCV1b和2a基因型在我國較為常見。其中以1b型為主，某些地區(qū)有1a、2b和3b型報道，6a型主要見于香港和澳門地區(qū)，在南方邊境省份也可見基因6型[1]。本文檢測55例HCV–RNA≥104拷貝/ml陽性標(biāo)本結(jié)果顯示HCV1b型35例占63.6%，2a型6例占10.9%，6a型12例占21.8%,另檢出兩例3b型。結(jié)果顯示九江地區(qū)丙型肝炎基因型以1b為主，6a次之，并有少數(shù)的2a和3b型。

本文利用PCR反向點雜交法，檢測熒光定量PCR HCV-RNA陽性的標(biāo)本符合率為100%。10例健康體檢者對照者血清HCV-RNA熒光定量及PCR HCV-RNA點反雜交檢測結(jié)果均為陰性，陰性符合率為100%。說明PCR反向點雜交法檢測HCV-RNA基因型結(jié)果可靠。具有準確性好、靈敏度高、特異性強的特點,而且簡便、快速，不需熒光標(biāo)記和專用的熒光掃描儀。

HCV是一種全球性傳染的、給人類健康帶來極大威脅的病原體，是引起人類慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要病原之一[4]。HCV基因分型對于流行病學(xué)調(diào)查和臨床診斷、治療方案的選擇和預(yù)后的判斷以及丙型肝炎發(fā)病機制的研究都有重要意義。國內(nèi)外研究表明，HCV不同的基因型對肝臟損傷的程度不同，1b型對肝臟的損傷要比其他型嚴重得多[5]。HCV對干擾素的應(yīng)答率也不同，Kandi等[6]報道HCV1b型感染多為慢性活動性肝炎，易進展至肝硬化甚至肝癌，對干擾素治療應(yīng)答率低療程要足夠長，2a型等比1b型對干擾素敏感。綜上所述，HCV基因型與肝病的嚴重程度有著密切關(guān)系，并且影響著干擾素的抗病毒治療的療效，HCV基因分型檢測可為臨床診斷和治療提供重要的依據(jù)，因此，對慢性丙型肝炎患者在抗病毒治療前有必要先進行基因分型的檢測，以指導(dǎo)臨床醫(yī)師制定用藥療程方案及預(yù)測療效。

[1]丙型肝炎防治指南.中華醫(yī)學(xué)會肝病分會、中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會,2004:3.

[2]唐小平,吳婉芬,袁小珍.丙型肝炎病毒基因分型及其與疾病程度、感染途徑和干擾素療效的關(guān)系 [J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志, 1999,22:8-11.

[3]蘇英豪.丙型肝炎病毒基因分型及其意義[J].國外醫(yī)學(xué)微生物學(xué)分冊,1999,17:92-95.

[4]莊 輝.重視丙型肝炎的研究[J].中華肝臟病雜志,2004,12(2):65.

[5]蔣偉倫,顧士民,胡蕓文,等.上海地區(qū)丙型肝炎病毒基因分型的研究[J].中華肝臟病雜志,1999,7:115.

[6]Kandi K,Kako M,Okamoto H.HCV genotypes in chronic hepatitis C and response[J].Lancet,1992,339:1543.

R373.2,R512.6+3,Q754

B

1674-1129(2010)05-0514-01

10.3969/j.issn.1674-1129.2010.05.042