頂空氣相色譜法測定鹽酸倍他司汀原料藥中有機溶劑的殘留量

梁春慧，宋更申（1.河北醫科大學第三醫院藥劑科，石家莊市050051；.河北省藥品檢驗所，石家莊市050011）

鹽酸倍他司汀（Betahistine hydrochloride）是治療眩暈、不穩定心絞痛等心血管疾病的常用藥。鹽酸倍他司汀在合成過程中，使用了乙醇、異丙醇、二氯甲烷等3種有機溶劑，這些溶劑會對人體健康造成危害，控制其殘留量對保證藥品質量和用藥安全有重要意義。關于其殘留溶劑的研究，尚未見國內文獻報道。本文根據人用藥品注冊技術要求國際協調會（ICH）[1]的指導原則和《中國藥典》2005年版[2]的相關規定，并參考有關文獻[3]，采用頂空氣相色譜法，以水為溶解介質，同時測定上述3種溶劑的殘留量。結果表明，本方法簡單、準確、靈敏度高、重復性好，可用于該藥物中有機溶劑殘留量的測定。

1 儀器與試藥

6890型氣相色譜儀與7694E型頂空進樣器、B.02.01-SR1工作站（美國Agilent公司）；BP 211D型電子天平（德國Sartorius公司）。

鹽酸倍他司汀原料（國內S公司，批號：2009-05-028、2009-05-029、2009-05-030，含量分別為：99.1%、99.3%、99.2%）；乙醇、異丙醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺均為色譜純（美國Fisher公司）；試驗用水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為DB-624毛細管柱（60 m×530 μm×1 μm），柱溫：70℃；氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度：250℃；分流進樣，分流比：1∶1，進樣口溫度：180 ℃；載氣：氮氣，流速：3.0 mL·min－1；頂空進樣，平衡溫度：90 ℃，平衡時間：30 min；頂空瓶加壓時間：0.2 min；進樣時間：1 min；定量環體積：1 mL；定量環溫度：100℃；傳輸線溫度：110℃。

2.2 溶液的制備

對照品貯備液：精密稱取乙醇100 mg、異丙醇100 mg、二氯甲烷12 mg，置于同一100 mL容量瓶中，加50%的N，N-二甲基甲酰胺溶液50 mL使溶解，再用水稀釋至刻度，搖勻，即得。

對照品溶液：精密量取對照品貯備液5 mL，置于50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液5 mL，置于20 mL頂空進樣瓶中，密封，搖勻，即得。

供試品溶液：精密稱取本品約0.1 g，置于20 mL頂空進樣瓶中，精密加水5 mL，密封，振搖使溶解，即得。

2.3 系統適用性試驗

精密量取“2.2”項下的對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”

圖1 氣相色譜圖A.對照品溶液；B.供試品溶液；1.乙醇；2.異丙醇；3.二氯甲烷Fig 1 Gas chromatogramsA.reference substances solution；B.sample solution；1.alcohol；2.isopropyl alcohol；3.dichloromethane

圖1 結果表明，乙醇、異丙醇、二氯甲烷分離良好，理論板數均不低于10 000。鹽酸倍他司汀和水不干擾有機溶劑的測定。

2.4 標準曲線的制備

分別精密量取對照品貯備液10、10、5、5、5、2 mL分別置于10、25、25、50、100、100 mL容量瓶中，分別用水稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5 mL，置于20 mL頂空進樣瓶中，密封，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進行分析，以峰面積（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標，進行線性回歸，結果見表1。

表1 線性關系考察結果（n＝6）Tab 1 Results of linear ranges（n＝6）

2.5 精密度試驗

精密量取對照品溶液5 mL，置于20 mL頂空進樣瓶中，共6份，密封，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進行分析，計算乙醇、異丙醇、二氯甲烷的峰面積的RSD分別為1.1%、0.8%、1.3%。

2.6 重復性試驗

精密稱取本品（批號：2009-05-028）約0.1 g，置于20 mL頂空進樣瓶中，共6份，精密加水5 mL，密封，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進行分析，檢出本品中乙醇含量平均為0.04%，RSD＝1.5%，異丙醇平均含量為0.02%，RSD＝1.2%，二氯甲烷均未檢出。

2.7 回收率試驗

精密稱取已知各溶劑含量的樣品（批號：2009-05-028）0.1 g，置于20 mL頂空進樣瓶中，共9份，分別精密加入對照品貯備液0.40、0.50、0.60 mL，各3份，再分別用水稀釋至5.0 mL，密封，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進行分析，按外標法計算，乙醇、異丙醇、二氯甲烷的平均回收率分別為99.6%、99.4%、98.6%，RSD分別為0.1%、0.1%、0.3%，結果見表2。

2.8 穩定性試驗

精密量取“2.2”項下的供試品溶液（批號：2009-05-028），于室溫下放置0、1、2、4、8、12 h，分別按“2.1”項下的色譜條件進行分析。結果，樣品中乙醇在12 h內測定的峰面積的RSD＝1.3%，異丙醇在12 h內測定的峰面積的RSD＝1.0%，二氯甲烷均未檢出，表明本溶液在12 h內穩定。

表2 回收率試驗結果Tab 2 Results of recovery tests

2.9 檢出限與定量限

用逐步稀釋法進行測定，以信噪比約為3時計算檢出限，以信噪比約為10時計算定量限，結果乙醇、異丙醇、二氯甲烷的檢出限分別為1.89、1.11、0.49 μg·mL－1，定量限度分別為5.71、3.36、1.51 μg·mL－1。

2.10 樣品中有機溶劑殘留量的測定

取3批樣品，按“2.2”項下方法制備對照品溶液和供試品溶液，“2.1”項下的色譜條件進行分析，外標法計算3種溶劑的含量，結果樣品中乙醇含量均為0.04%，異丙醇均為0.02%，二氯甲烷均未檢出，符合《中國藥典》要求。

3 討論

筆者在預試驗中先后選擇了HP-1、HP-20M、DB-624等不同極性的色譜柱，以乙醇、異丙醇、二氯甲烷3種溶劑在DB-624上的峰形和分離度最佳。

試驗曾考察了不同的頂空溫度和頂空平衡時間對樣品測定的影響，結果表明，樣品在70、80、90℃的頂空溫度下均穩定，為了提高檢測靈敏度，本試驗選擇90℃作為頂空溫度；本品在30、40 min的頂空平衡時間內得到的峰面積基本一致，故選擇30 min作為頂空平衡時間。研究中發現頂空瓶中溶液的體積對色譜峰面積有較大影響，試驗分別考察了20 mL頂空瓶中溶液的體積分別為2、3、5、6 mL，以及10 mL頂空瓶中溶液的體積分別為1、2、3 mL時的結果，發現選擇20 mL頂空瓶中溶液的體積為5 mL時，各色譜峰的峰面積最大。有關最佳氣液平衡狀態還有待于進一步研究。

本方法3種有機溶劑的定量限為1.51～5.71 μg·mL－1，靈敏度完全可以滿足鹽酸倍他司汀原料藥中有機溶劑殘留量測定的需要。

[1]周海鈞主譯.藥品注冊的國際技術要求·質量部分[M].北京：人民衛生出版社，2000：343.

[2]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學工業出版社，2005：54～57.

[3]宋更申，姜建國，劉紅莉，等.頂空氣相色譜法測定美羅培南中有機溶劑的殘留量[J].中國藥房，2010，21（5）：447.