免疫透射比濁法對ASO及RF試劑的應用性能評價

鐘 蘭，蔡玉玲

（海南省人民醫院醫學檢驗部，海南 海口 570311）

為了解該試劑的質量是否達標、與羅氏診斷試劑比較如何，我們對德賽診斷系統（DiaSys）公司生產的ASO和RF液體雙試劑進行了應用性能評價。

1 材料與方法

1.1 儀器 OLYMPUS AU5400全自動生化分析儀，COBASC 501模塊化生化分析儀。

1.2 標本 均收集海南省人民醫院門診體檢40例病人新鮮血清，男27例，女13例，年齡12-67歲。

1.3 試劑 德賽診斷系統公司的ASO和RF定量試劑盒，試劑批號分別為60060322、60063016；羅氏診斷公司生產的ASO和RF定量試劑盒，試劑批號分別為627428-01、623168-01；特定蛋白校準品批號分別為 DiaSys(60061186)、羅氏(155449-01)。

1.4 檢測系統和實驗系統 使用COBAS C 501模塊化生化分析儀、羅氏診斷相關試劑和配套校準品組成的檢測系統；使用OLYMPUSAU5400全自動生化分析儀、德賽診斷系統公司相關試劑和配套校準品組成的實驗方法系統。

1.5 評估方法 測定過程及參數設置均按試劑盒說明進行。統計學處理采用SPSS10.0 for Windows軟件進行數據處理。

1.5.1 精密度評估 批內精密度：各取高、中、低值3個不同水平的ASO和RF樣品。在校準的當天每隔1 h測定一次，共20次，計算出均值、標準差和變異系數。批間精密度：單次校準后，每天一次測定高、中、低值3個不同水平的ASO和RF樣品，共20 d，計算出均值、標準差和變異系數。

1.5.2 線性分析 參照NCCLS文件EP6-P[1]各取一低值標本(ASO 25 IU/ml、RF 1.4 IU/ml)、高值標本(ASO 288.0 IU/ml、RF 296.9 IU/ml)等量混勻后制備中值標本(ASO 156.5 IU/ml、RF 149.1 IU/ml)中值標本再分別和低、高值標本等量混勻，各制備產生兩個水平標本(ASO 90.7 IU/ml、222.2 IU/ml；RF 75.2 IU/ml、223.0 IU/ml)。5個不同水平標本分別(ASO：25 IU/ml、90.7 IU/ml、156.5 IU/ml、222.2 IU/ml、288.0 IU/m；RF：1.4 IU/m、75.2 IU/m、149.1 IU/m、223 IU/m、288.0 IU/m)測定4次，參照NCCLS文件EP6-P[1]進行線性分析。

1.5.3 準確度評估 參照NCCLS文件EP9-A[2]使用病人新鮮血清對比實驗方法系統及檢測系統，評估實驗方法系統的準確性。按照生產廠商提供的測定試劑盒(校準品)、測定參數和測定方法在OLYMPUS AU5400全自動生化分析儀上進行校準，與羅氏診斷公司的同類試劑進行比對，觀察結果相關程度。(1)將40個病人樣本分5 d進行測定，每天測定8個樣本，每個樣本進行平行管測定。做雙份第2次測定時，標本順序全部倒過來。兩種方法都按此實驗。采集標本2 h內兩臺儀器對同批標本分別開始實驗。(2)根據EP9-A[2]要求評估篩選數據(篩除離群點)。(3)對實驗方法系統及比較方法系統結果進行相關性分析。

1.5.4 干擾實驗 混合血清分成兩份，一份加入1/10體積的含膽紅素684 μmol/L的高總膽紅素血清(ASO和RF分別為9 IU/ml和5 IU/ml)，一份不加，然后將兩標本按4:0、3:1、2:2、1:3、0：4比例混合成5個不同濃度的液體，每份標本重復測定10次，計算平均干擾值。用同樣方法加入含血紅蛋白為5 g/L的溶血物和甘油三酯為22.6 mmol/L的脂肪乳，重復測定10次，并計算各自的干擾值。干擾值=各組均值-未加干擾物相應的均值。按NCCLS EP07-A文件進行干擾試驗評價。

1.5.5 試劑的穩定性 將開啟的ASO和RF(R1、R2)工作試劑置于2℃-8℃AU5400全自動生化分析儀試劑箱中，每2 d在AU5400上各測定空白吸光度和200 IU/ml ASO、125 IU/ml RF的標準品吸光度，連續測定15次，觀察吸光度的變化。

2 結果

2.1 精密度 免疫透射比濁法在全自動生化分析儀中定量測定血清ASO和RF都有良好的精密度(批內、批間變異系數均小于5%)。見表1、表2。

表1 免疫透射比濁法測定血清ASO和RF的批內精密度

表2 免疫透射比濁法測定血清ASO和RF的批間精密度

2.2 線性分析 評價線性至少需要5個不同稀釋度的分析物和做至少兩次重復的測量。ASO測定的線性回歸分析方程為：y=0.9741x+0.020，r=0.995；RF的線性回歸分析方程為y=0.9741x+0.020，r=0.987。表明ASO在288.0 IU/ml濃度、RF在296.9 IU/ml濃度以內線性關系良好。

2.3 準確性 使用DiaSys試劑為主的實驗方法系統與使用羅氏診斷試劑為主的檢測系統分別對40份無明顯溶血、黃疸或脂血的新鮮血清樣品進行兩項目測定，結果兩法ASO的r2=0.95(y=1.25x-33)，兩法RF的r2=0.94(y=0.77x-5.43)，說明Diasy試劑為主的實驗方法系統與羅氏診斷試劑為主的檢測系統結果相關性較好，即相關度較高。

2.4 干擾試驗 當樣品中膽紅素≤684 μmol/L、血紅蛋白濃度≤5 g/L、甘油三酯濃度≤22.6 mmol/L時，ASO和RF結果未受到干擾。

2.5 試劑的穩定性 經以上“1.5.5”項試驗觀察，30 d內試劑空白吸光度和標準品吸光度保持不變，ASO的試劑空白吸光度為0.0003，標準品吸光度為0.1947；RF的試劑空白吸光度為0.0002，標準品吸光度為0.0608。

3 討論

ASO是實驗室常用的項目，ASO可為鏈球菌感染診斷和監控下列疾病提供有用的信息：扁桃體炎、耳炎、丹毒、猩紅熱、風濕熱、腎小球腎炎[3]。ASO可在感染后1-3周檢測出來，且在3-6周達到峰值。RF是一類自身抗體，包括所有類型的免疫球蛋白，它們是抗菌素變性或聚合IgG分子FC片段的抗體，診斷所檢測的RF主要是IgM類RF，用來檢出各種類風濕疾病，檢測RF可為鑒別診斷風濕疾病提供重要的信息。

免疫透射比濁法在全自動生化分析儀中定量測定血清ASO和RF都有良好的精密度(批內、批間變異系數均小于5%)；定量檢測具有滿意的線性響應(ASO r=0.995，RF r=0.987)，線性驗證顯示 ASO(25-288 IU/ml)、RF(1.4-296.9 IU/ml)中線性良好。DiaSys公司生產的ASO、RF試劑與羅氏診斷同類試劑相關性較好，相關系數r2分別為0.95和0.94。當樣品中膽紅素≤684 μmol/L、血紅蛋白濃度≤5 g/L、甘油三酯濃度≤22.6 mmol/L時，ASO和RF結果未受到干擾；試劑保存時間長。綜上結果，采用免疫透射比濁法在全自動生化分析儀中定量測定血清ASO及RF所用的德賽診斷系統公司生產的試劑穩定，線性范圍寬，抗干擾能力強，具有良好的精密度與準確性，應用性能良好，評估合格。

[1]NCCLS.EP6-A:Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:A statistical approach;Approved guideline．Wayne PA．2003:NCCLS．

[2]NCCLS.EP9-A2:Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline—Second Edition Wayne PA.2002:NCCLS.

[3]Steven DL.lnvasive Group A streptococcus infections[J].Clin lnfect Dis,1992,14:2-11.