肝硬化并發(fā)自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎患者中性粒細(xì)胞吞噬功能的研究

郭春輝，翁錫定

（江陰市人民醫(yī)院感染科，江蘇 江陰 214400）

自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎(Spontaneous bacterial peritonitis，SBP)是肝硬化合并腹水患者常見的嚴(yán)重并發(fā)癥[1]，而中性粒細(xì)胞（Poly-morphonuclear leukocytes，PMNs）的吞噬作用可能是防御腹水感染的主要屏障。為此，我們采用酵母吞噬法檢測50例失代償期肝硬化患者PMNs的吞噬功能水平，以探討肝硬化合并SBP免疫狀況。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取本院2008年3月至2010年3月住院的失代償期肝硬化患者50例，其中男36例，女14例，年齡最大65歲，最小32歲，平均48歲。所有病例均符合2000年西安會(huì)議制定的《病毒性肝炎防治方案》診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，且經(jīng)腹部超音波確定均有腹水產(chǎn)生，其中合并SBP23例。SBP診斷依據(jù)：(1)典型的腹膜炎癥狀、體征，如發(fā)熱、腹痛、反跳痛及腹肌緊張等腹膜刺激征；(2)腹水常規(guī)檢查PMNs＞0.25×109/L；(3)腹水細(xì)菌培養(yǎng)陽性。具備上述標(biāo)準(zhǔn)中的兩項(xiàng)或兩項(xiàng)以上者，并排除結(jié)核性、癌性腹水即可診斷。正常人組30例，其中男22例，女8例，年齡最大62歲，最小30歲，平均47歲。均為我院體檢中心經(jīng)健康體檢合格的健康人。所有受檢者在取血前均未使用激素或免疫抑制劑等藥物。

1.2 方法

1.2.1 PMNs吞噬功能檢測 酵母吞噬法的主要過程是：①先將酵母菌置于37℃，培養(yǎng)18-24 h，然后用Hanks平衡鹽水溶液洗滌兩次，再計(jì)算酵母菌數(shù)，涂片后作姬母薩染色，測定其活力；②抽血2.5 ml置于無菌肝素抗凝管內(nèi)，測定白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)；③取0.2 ml酵母菌Hanks平衡鹽水溶液加到0.8 ml肝素抗凝全血中(使酵母菌數(shù)與中性粒細(xì)胞數(shù)之比為2：1，置37℃下孵育1 h)，吸取自然沉淀的白細(xì)胞層涂片，姬母薩染色。④計(jì)數(shù)200個(gè)PMNs中吞噬的酵母菌數(shù)(包括死菌與活菌)，活菌染成藍(lán)色，死菌不著色或中心和(或)兩端出現(xiàn)不著色區(qū)。

1.2.2 判定標(biāo)準(zhǔn) (1)吞噬百分率：每100個(gè)PMNs中吞噬有酵母菌的中性粒細(xì)胞數(shù)；(2)吞噬指數(shù)：每100個(gè)PMNs吞噬的酵母菌數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

從表1可見，失代償期肝硬化組PMNs吞噬百分率和吞噬指數(shù)分別為（20±6）%、（23±3）%，正常人組分別為（39±8）%、（43±1）%，失代償期肝硬化患者PMNs吞噬功能顯著低于正常人（P＜0.01)。此外，肝硬化患者中SBP組PMNs吞噬百分率和吞噬指數(shù)分別為（17±4）%、（19±5）%，明顯低于非SBP組[23±8)%、（27±2）%，P＜0.01]，提示肝硬化合并SBP患者中性粒細(xì)胞吞噬功能水平明顯減退。

表1 正常人和失代償期肝硬化患者中性粒細(xì)胞吞噬功能水平比較

3 討論

盡管在肝硬化并發(fā)SBP發(fā)病機(jī)制方面，國內(nèi)外許多學(xué)者做了積極的研究，但是對其機(jī)制仍不十分清楚，目前認(rèn)為自發(fā)性菌血癥加上易感染的腹水”是形成自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎的原因。自發(fā)性菌血癥發(fā)生基礎(chǔ)是腸道細(xì)菌分布異常及肝硬化獨(dú)特的血液動(dòng)力學(xué)改變，更為重要的是肝硬化患者機(jī)體防御能力下降，主要見以下兩類改變：其一是肝硬化患者單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)功能低下[3]，加之肝內(nèi)血液分流，很多血液通過解剖性或功能性肝內(nèi)短路進(jìn)行循環(huán)，使位于肝竇的單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)不能發(fā)揮吞噬血液內(nèi)細(xì)菌的作用。其二是PMNs數(shù)量及功能異常。Aref等[4]通過檢測PMNs凋亡證明，肝硬化患者PMNs壽命縮短，加之肝硬化時(shí)由于脾機(jī)能亢進(jìn)和骨髓造血功能受抑制，致使其外周血PMNs數(shù)量減少。功能異常最常見的變化是PMNs趨化性顯著降低[5]，本組研究發(fā)現(xiàn)失代償期肝硬化患者PMNs吞噬功能顯著低于正常人，此與Nakamura等[6]報(bào)告的結(jié)果相一致。由此筆者認(rèn)為可能因?yàn)閱魏?巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的吞噬作用下降，細(xì)菌不能被清除，而在血循環(huán)中持續(xù)存在，最終可以定植于腹水，導(dǎo)致SBP發(fā)生。

此外，我們亦發(fā)現(xiàn)肝硬化患者中SBP組PMNs吞噬百分率和吞噬指數(shù)較非SBP組降低更顯著，雖然其PMNs絕對數(shù)或相對數(shù)增高，因此，與PMNs數(shù)量相比，中性粒細(xì)胞吞噬功能更準(zhǔn)確反映PMNs狀態(tài)。結(jié)合臨床發(fā)現(xiàn)PMNs吞噬功能降低程度常標(biāo)志著患者已發(fā)生感染，或易于發(fā)生感染，且預(yù)后不良。據(jù)此分析，PMNs吞噬功能下降可作為肝硬化合并自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎臨床早期預(yù)警指標(biāo)。

[1]汪長生,楊 進(jìn),孫 都,等.乙肝肝硬化并發(fā)自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎危險(xiǎn)因素分析[J].臨床內(nèi)科雜志,2010,27(1):31-33.

[2]中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲學(xué)分會(huì)及肝病分會(huì).病毒性肝炎防治方案[J].中華肝臟病雜志,2000,8(6):324-329.

[3]丁明權(quán).肝硬化合并自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎診治進(jìn)展[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志,2008,25(8):1006-1007.

[4]Aref SE,Mahmoud LA,El Retie MF,et al.Assessment of neutrophil apoptosis ex vivo in hepatosplenic patients with neutropenia pre and post splenectomy[J].Hematology,2003,8(4):265-272.

[5]何浩明,田小平.肝硬化患者中性粒細(xì)胞趨化性測定[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1999,24(3):192.

[6]Nakamura I,Ochiai K,Imawari M.Phagocytic function of neutrophils of patients with decompensated liver cirrhosis is restored by oral supplementation of branched-chain amino acids[J].Hepatol Res,2004,29(4):207-211.