HPLC法測定注射用復方甘草酸苷中甘草酸單苷的含量

王冬梅

注射用復方甘草酸苷主要用于治療慢性肝炎，改善肝功能異常。注射用復方甘草酸苷主要由甘草酸單銨鹽、甘氨酸和L-鹽酸半胱氨酸三種成分組成。本文以HPLC法測定注射用復方甘草酸苷中甘草酸單銨的含量，檢測方法靈敏，結果準確，適用于甘草酸單苷的含量測定。

1 儀器與試藥

高效液相系統（Waters 2695泵，Waters 2996二極管陣列檢測器，Waters Empower色譜工作站）；乙腈為色譜純。樣品來源：江蘇揚州中寶藥業有限公司；樣品批號：20030729、2003073、20030731。參比樣品來源：日本米諾發源制藥株式會社（進口注冊證號：H20030185），參比樣品批號：00344。甘草酸單銨對照品：成都圣諾科技發展有限公司，HPLC純度99.5%。

圖 1 甘草酸苷峰面積與其濃度的線性關系圖

表 1 甘草酸苷回收率試驗結果

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18，5 μ，4.6×250 mm，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，檢測波長254 nm，流動相：乙腈-0.01 mol/L 磷酸溶液（38∶62），流速 1.0 ml/min，在室溫下操作，理論板數按甘草酸苷計算應不低于2000。

2.2 供試品溶液的制備 精密稱取本品10 mg，用5 ml注射用水溶解，置25 ml量瓶中，加流動相至刻度，制成甘草酸苷400 μg/ml的溶液，作為供試品溶液。

2.3 對照品溶液的制備 甘草酸單銨對照品適量，用注射用水溶解，加流動相制成甘草酸單銨530 μg/ml（相當甘草酸苷 400 μg）的對照溶液。

2.4 線性關系考察 精密量取甘草酸單銨對照品54.6 mg（相當于甘草酸苷對照品41.2 mg），置50 ml量瓶中，用水定容至刻度， 分別取 4.0、4.5、5.0、5.5、6.0 ml置 10 ml量瓶中，用流動相稀釋至10 ml，使每1 ml中含甘草酸苷329.6 μg、370.8 μg、412.0 μg、453.2 g、494.4 μg 的溶液。 分別取 10 μl注入液相色譜儀，記錄各溶液的主峰面積，并以進樣濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，回歸方程：A=1 0036C-23912（n=5，r=0.9998）。 甘草酸苷在 329.6～494.4μg/ml，峰面積與其濃度呈良好線性關系，其線性關系見圖1。

2.5 重復性試驗 取線性測定中濃度為412.0 μg/ml樣品，連續進樣 6次，測得峰面積分別為 4 094 830、4 089 490、4 093 948、4 093 766、4 089 363、4 091 630， 平均 值為 4 092 171，RSD 0.06%。結果表明，測定方法的重復性很好。

2.6 穩定性試驗 取線性測定中濃度為412.0 μg/ml樣品，分別于 0、4、8、12、24 h 進樣，記錄峰面積，分別為 4 085 787、

2.7 回收率試驗 按高、中、低三個濃度梯度，精密稱取甘草酸單銨對照品約10.6、13.25、15.9 mg（相當于甘草酸苷8、10、12 mg）各3份，置25 ml量瓶中，另按處方比例加入其它組分，加水稀釋至刻度，搖勻，備用。另取甘草酸單銨對照品13.4 mg（約相當于甘草酸苷10 mg），置25 ml量瓶中，加氨試液0.2 ml和水少許溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液，照甘草酸苷測定項下操作，計算回收率，結果見表1，可見該法的回收率符合方法學要求。

2.8 甘草酸苷的含量測定 精密稱取本品10 mg，用5 ml注射用水溶解，置25 ml量瓶中，加流動相至刻度，制成甘草酸苷400 μg/ml溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液2.5 ml置10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，制成甘草酸苷100 μg/ml溶液，作為預試液。取預試液10 μl注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分峰峰高約為滿量程的80%～90%，再取供試品溶液10 μl，注入液相色譜議，記錄色譜圖。4085592、4078651、4089232、4083496，平均值為 4084552，RSD 0.10%。此樣品于24 h內進行測定，RSD%為0.10%，說明樣品在24 h內相對穩定。另取甘草酸苷對照品，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。依本法測定三批樣品，結果為，其標示量（%）分別為20030729，101.10；20030730，103.29；20030731，100.02。 其參比樣品為103.19。

3 討論

注射用復方甘草酸苷為甘草酸單銨鹽、鹽酸半胱氨酸、甘氨酸制成的注射用粉劑，主要用于治療慢性肝炎，改善肝功能異常，也可用于治療濕疹、皮膚炎，蕁麻疹，目前廣泛地應用于臨床。本文所討論的用高效液相色譜法對注射用復方甘草酸苷中甘草酸單苷含量進行測定方法的準確度和精密度良好，專屬性強，能有效控制樣品中甘草酸單銨的含量符合含量測定的方法學要求，適用于本品的測定。