乳酸恩諾沙星對實驗性雞大腸桿菌病及沙門氏菌病的藥效

唐一鳴，姜中其，方蘭勇，陳 儉

(1.浙江大學 農(nóng)業(yè)部動物疫病病原學與免疫控制重點開放實驗室，浙江 杭州 310029;2.浙江省畜牧獸醫(yī)局，浙江 杭州 310020)

恩諾沙星自1987年由德國拜爾公司研制成功并投入使用以來，已成為獸醫(yī)臨床上重要的喹諾酮類廣譜抗菌藥物。近年來，恩諾沙星的鹽類產(chǎn)品逐漸增多，常見的有鹽酸恩諾沙星、恩諾沙星鈉等，它們對大多數(shù)病原微生物均具有很好的抗菌活性，尤其是對大腸桿菌和沙門氏菌等革蘭氏陰性菌作用很強。恩諾沙星乳酸鹽對胃腸道刺激小，其在獸醫(yī)臨床上尚未正式推廣應用，國內(nèi)外關于該藥的研究報道很少［1］，臨床上又迫切需要新的抗菌藥物來防治雞大腸桿菌病和沙門氏菌病。鑒此，我們以雛雞為動物模型，開展了乳酸恩諾沙星對實驗性雞大腸桿菌病和沙門氏菌病的藥效試驗，旨在探索其在獸醫(yī)臨床的應用前景，并為合理應用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受試藥物

乳酸恩諾沙星可溶性粉，由新昌國邦化學工業(yè)有限公司提供，含乳酸恩諾沙星10%，批號:081001。

1.1.2 對照藥物

鹽酸環(huán)丙沙星可溶性粉，由新昌國邦化學工業(yè)有限公司提供，含鹽酸環(huán)丙沙星10%，批號:090320。

1.1.3 試驗動物

1日齡雛雞400只，從杭州市某大型雞場購入，在實驗條件下飼養(yǎng)3 d后供試。

1.1.4 菌種

雞源大腸桿菌C84051、雞源沙門氏菌C79-13，購自中國獸藥監(jiān)察所。

1.1.5 器材

微生物分離培養(yǎng)及鑒定器皿，鼠籠、雞舍及相關飼養(yǎng)設備等。

1.2 試驗方法

1.2.1 體外抑菌試驗

采用微量肉湯稀釋法，根據(jù)NCCLS標準測定［2］。精確稱取適量乳酸恩諾沙星和鹽酸環(huán)丙沙星，用滅菌蒸餾水分別配成一定濃度藥液，加入96孔板做2倍稀釋。分別接種雞源大腸桿菌C84051和雞源沙門氏菌C79-13于MH肉湯，37℃培養(yǎng)至對數(shù)生長期，調(diào)節(jié)菌懸液濁度至0.5麥氏標準，再以無菌肉湯稀釋100倍后，在含不同濃度藥物的板孔中加入100 μL。以上各步均要求無菌操作。最后，置96孔板于35℃孵育18～20 h，以肉眼觀察無菌生長的最低濃度孔為 MIC(μg·mL－1);置96孔板于35℃再孵育24 h，以肉眼觀察無菌生長的最低濃度孔為 MBC(μg·mL－1)。

1.2.2 體內(nèi)藥效試驗

從3日齡雞群中隨機抽取雛雞20只，逐羽取血進行細菌分離培養(yǎng)，并用抗大腸桿菌C84051和沙門氏菌C79-13標準血清對培養(yǎng)物作玻片凝集反應，確認試驗雞群無接種菌自然感染后，再通過預試驗確定正式試驗感染菌的適宜接種量。取健康雞330只，隨機均分成11組。除陰性對照組外，其余各組雞每只分別經(jīng)胸肌注射大腸桿菌C84051菌液0.25 mL(培養(yǎng)液含活菌數(shù)約5×109CFU·mL－1)或沙門氏菌C79-13菌液0.35 mL(培養(yǎng)液含活菌數(shù)為20×109CFU·mL－1)，接種后各藥物治療組分別給予乳酸恩諾沙星 75，125，175 mg·L－1及對照藥物鹽酸環(huán)丙沙星100 mg·L－1的飲水，連續(xù)用藥3 d，所用藥液均于當日新鮮配制。接種及給藥后觀察和記錄各組雛雞的發(fā)病情況、臨床變化及死亡等，連續(xù)觀察7 d，剖解死亡雞，觀察病理變化并從心、肝血采樣進行細菌分離培養(yǎng)及鑒定以確定死因，最后以雛雞的發(fā)病情況、臨床癥狀、死亡率以及增重等為指標，評判乳酸恩諾沙星對雛雞大腸桿菌病及沙門氏菌病的療效。

2 結(jié)果與分析

2.1 體外抑菌

乳酸恩諾沙星可溶性粉和對照藥物鹽酸環(huán)丙沙星對大腸桿菌C84051和沙門氏菌C79-13均產(chǎn)生明顯抑菌作用，表1結(jié)果表明，雞大腸桿菌C84051和沙門氏菌C79-13對乳酸恩諾沙星可溶性粉和對照藥物均敏感。

表1 乳酸恩諾沙星和鹽酸環(huán)丙沙星對雞大腸桿菌C84051和沙門氏菌C79-13的抗菌作用

2.2 體內(nèi)藥效

2.2.1 對大腸桿菌病的療效

陽性對照組雛雞在經(jīng)胸肌注射接種大腸桿菌C84051后約5 h開始，雞只陸續(xù)出現(xiàn)不同程度的臨床發(fā)病癥狀，主要表現(xiàn)為精神萎靡，臥地沉睡或呆立反應遲鈍，食欲減退甚至廢絕以及排白色、黃綠色稀糞等，發(fā)病率100%。各給藥組雛雞在感染當天有輕微發(fā)病癥狀，主要是精神稍差，食欲較感染前略有下降，但給藥后2 d開始癥狀明顯改善，并很快消失。

表2可見，各給藥組雛雞的死亡率顯著低于陽性對照組。剖檢死亡雞只，急性死亡雞未見明顯病變，病程較長的可見滲出性纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊增厚、有滲出物等病變。分離培養(yǎng)死亡雞的心、肝血，用標準抗血清對分離菌進行玻片凝集反應呈陽性，表明雛雞死亡是由大腸桿菌C84051感染引起敗血癥所致。接種細菌后7 d內(nèi)乳酸恩諾沙星 (75，125，175 mg·L－1)組雛雞的相對增重率顯著高于鹽酸環(huán)丙沙星 100 mg·L－1藥物對照組，另外，與陰性對照組相比，乳酸恩諾沙星(125，175 mg·L－1)組雛雞的相對增重率無顯著性差異。

2.2.2 對沙門氏菌病的療效

陽性對照組雛雞在經(jīng)胸肌注射接種沙門氏菌C79-13后約5 h開始，雞只陸續(xù)出現(xiàn)不同程度的的臨床發(fā)病癥狀，主要表現(xiàn)為精神萎靡，扎堆，呆伏不動，縮頸閉眼，反應遲鈍，食欲減退或廢絕，呼吸困難，排白色稀糞等，發(fā)病率100%，在接種后9 h開始死亡，死亡高峰集中在感染后24 h內(nèi)。各給藥組雛雞在感染當天有輕微發(fā)病癥狀，主要是精神稍差，食欲較感染前略有下降，但給藥后2 d開始癥狀明顯改善，并很快消失。

表2 雛雞的死亡率和相對增重率

由表3可見，各給藥組雛雞死亡率顯著低于陽性對照組。剖檢死亡雞只，急性死亡雞未見明顯病變，病程較長的可見出血性肺炎，內(nèi)臟器官充血，嗉囊空虛，肝腫大脆弱，心臟壞死性結(jié)節(jié)等病理變化。分離培養(yǎng)死亡雞的心、肝血，用標準抗血清對分離菌進行玻片凝集反應為陽性，表明雛雞死亡是由沙門氏菌C79-13感染引起敗血癥所致。接種細菌后7 d內(nèi)乳酸恩諾沙星試驗組雛雞的相對增重率分別顯 著 (75mg·L－1)或 極 顯 著 (125，175 mg·L－1)高于鹽酸環(huán)丙沙星對照組;另外，與陰性對照組相比，乳酸恩諾沙星175 mg·L－1組雛雞的相對增重率無顯著性差異。

表3 各組別雛雞的死亡率和相對增重率

3 小結(jié)及討論

大腸桿菌病和沙門氏菌病，是目前危害養(yǎng)雞業(yè)最常見的細菌性疫病［3］，經(jīng)濟損失很大。近年來，雞大腸桿菌和雞沙門氏菌對抗菌藥的耐藥性逐漸增強［4－6］，除了合理應用現(xiàn)有藥物［7－9］，有必要著力開發(fā)新藥來防治大腸桿菌及沙門氏菌病。

恩諾沙星是第一個動物專用的第3代喹諾酮類藥物，其對G+和G－細菌的抗菌作用與環(huán)丙沙星相似［10］。20多年來，恩諾沙星在獸醫(yī)臨床上廣泛用于治療畜禽細菌性疾病和支原體感染，對大腸桿菌和沙門氏菌的 MIC平均值為0.008～0.75 μg·mL－1，其藥理學特點已有詳盡闡述［11－12］，然而恩諾沙星在水中的溶解度極低［10］，故在生產(chǎn)實踐中其鹽類應用更廣［1，13－14］。但迄今尚未有乳酸恩諾沙星治療雞大腸桿菌病和沙門氏菌病的報道，而乳酸鹽相對較溫和，對胃腸刺激性小［15］。本試驗所用的恩諾沙星乳酸鹽為白色粉末，無臭，易溶于水。體內(nèi)藥效結(jié)果顯示，在較大劑量強毒攻擊下，乳酸恩諾沙星對受大腸桿菌及沙門氏菌感染雛雞有良好保護作用，保護率均為100%，雛雞相對增重率略低于陰性對照組，但高于藥物對照組。

綜上所述，認為乳酸恩諾沙星能有效地控制雛雞大腸桿菌病及沙門氏菌病，迅速緩解發(fā)病癥狀，降低發(fā)病雞群的死亡率，并保持良好的增重速度，混飲的有效濃度為75～175 mg·L－1，連續(xù)用藥3 d，在臨床上應有良好的應用前景。

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