HPLC法測定十滴水中五種活性成分的含量

陳廣通，李玉琴，黃金華，汪冬庚，王新楊

（南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇南通 226001）

十滴水為常用中成藥，是《中國藥典》2005年版一部收載品種，主要由大黃、樟腦、干姜等7味中藥組成，具有健胃，祛暑的功效。主要用于由中暑引起的頭昏、惡心、腹痛、腸胃不適[1]。方中大黃性苦、寒，具有瀉熱通腸、涼血解毒的作用，在方中起主要療效，蒽醌類衍生物是大黃的主要活性成分[2-7]。目前，對于十滴水中單體的含量測定有少量的文獻報道[7-9]，但同時測定多個成分的含量未見文獻報道。本研究采用HPLC法同時測定大黃中5種活性成分蘆薈大黃素（1）、大黃酸（2）、大黃素（3）、大黃酚（4）和大黃素甲醚（5）的含量，為該制劑的質(zhì)量控制和臨床應(yīng)用提供參考。

1 儀器與試藥

島津LC-20AD高效液相色譜儀，SPD-20A型紫外檢測器（日本Shimadzu公司）；KQ-250VDB型雙頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AUW120D型電子天平（日本Shimadzu公司）；蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號分別為110795-200605、110757-200206、110756-200110、110796-200615、110758-200610，含量均≥99.8%）。十滴水（無錫華澳藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：080302；廣西廣明藥業(yè)有限公司，批號：090502；廣西慧寶源制藥有限公司，批號：090602）；乙腈、甲醇和磷酸為色譜純，水為自制重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液配制

2.1.1 對照品貯備液的制備 分別精密稱取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品 10.51、10.54、4.19、4.63和4.36 mg，分別置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，得各對照品貯備液。再分別精密吸取各對照品貯備液1、2、10、5、10 ml置同一蒸發(fā)皿中，蒸干后，殘渣用甲醇溶解，并定容于5 ml量瓶中，混勻，得對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制備 精密吸取十滴水25 ml，置60℃水浴中蒸干，殘渣加10%的鹽酸30 ml溶解后，用氯仿60 ml分3次萃取，合并萃取液，回收氯仿，殘渣用甲醇溶解并定容至10 ml量瓶中，混勻后即得。

2.2 色譜條件

色譜柱 Shimadzu VP-ODS柱 （4.6 mm×250 mm，5 nm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脫程序為：1～10 min 52%乙腈；1～25 min 82%乙腈；25～30 min 90%乙腈；30～35 min 90%乙腈。柱溫：30℃；流速：1.0 ml/min；檢測波長：254 nm。對照品、供試品和陰性對照溶液色譜圖見圖1。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密吸取上述對照品混合溶液 1、4、8、12、20 μl，依次注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積Y對進樣量X（μg）進行線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 回歸方程及線性范圍Tab.1 Linearity range and regression equation

2.4 精密度試驗

取同一對照品溶液，重復(fù)進樣6次，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD分別為0.83%、1.06%、0.96%、0.86%和0.89%。結(jié)果表明本法精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗

精密吸取十滴水（批號080302）25 ml，共 6份，按上述方法測定蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚含量的RSD分別為1.03%、1.52%、1.73%、0.97%和1.35%。結(jié)果表明本法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取供試品（批號：080302）溶液，分別在配制后 0、2、8、16、20、24 h進樣測定，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD分別為0.89%、1.37%、1.84%、1.14%和1.27%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗

精密稱取已知含量的十滴水（批號：080302）25 ml，共5份，精密加入對照品適量，按供試品溶液制備方法處理，計算各成分的平均加樣回收率，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗Tab.2 Results of recovery test

2.8 樣品含量測定

取3個廠家的十滴水樣品，按“2.1”項下方法，每個廠家平行制備3份供試品溶液，按上述色譜條件測定，由外標法計算其含量，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果（n=3）Tab.3 Content determination results of samples(n=3)

3 討論

《中國藥典》2005年版對本品中大黃的鑒別是采用薄層色譜法，利用大黃對照藥材、大黃素和大黃酚對照品進行定性鑒別，未規(guī)定蒽醌類成分含量的測定方法及含量范圍。測定該方中大黃蒽醌類成分的含量將更有利于制劑的質(zhì)量控制，本試驗采用乙腈-0.1%磷酸梯度洗脫，分析時間短，5種成分分離完全。

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