組織因子在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系

劉振邦 曹杰 梁立源 梁笑

組織因子(tissue factor，TF)即我們熟悉的凝血Ⅲ因子，參與生理性凝血，是生理性凝血過(guò)程中的啟動(dòng)因子。正常情況下，組織因子不存在于循環(huán)中或不與循環(huán)血液接觸，只有當(dāng)血管壁的完整性遭到破壞時(shí)TF才暴露于循環(huán)血液，通過(guò)激活生理性凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而發(fā)揮止血功能，也在組織修復(fù)以及血栓形成等發(fā)揮重要作用。然而國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道，TF還參與惡性腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移，尤其與腫瘤的血管形成有密切關(guān)系［1～2］。在國(guó)內(nèi)，王鵬等［3］研究報(bào)道指出，TF 在多種腫瘤中常異常表達(dá)，可通過(guò)介導(dǎo)多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移等病理過(guò)程。本文運(yùn)用免疫組化SP法檢測(cè)TF在不同大腸組織中的表達(dá)情況，采用SPSS16.0軟件統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并探討TF在結(jié)直腸癌中的表達(dá)以及其表達(dá)的臨床病理意義。

1 材料和方法

1.1 一般資料 收集廣州市第一人民醫(yī)院病理科2009年2月至2009年8月結(jié)直腸癌手術(shù)后50例石蠟標(biāo)本，查閱病例資料，所有患者術(shù)前均未行放化療治療。其中男31例，女19例;年齡27～85歲，平均年齡約62.3歲，其中 ＜60歲者21例，≥60歲者則為29例;術(shù)后大體標(biāo)本腫瘤直徑＜4 cm有22例，≥4 cm則28例。腫瘤位于直腸者為33例，右半結(jié)腸者7例，左半結(jié)腸則有10例。高分化者7例，中分化為32例，而低分化則11例。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者27例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移則為23例。按TNM分期，Ⅰ～Ⅱ期有16例，而Ⅲ～Ⅳ期者為34例。侵潤(rùn)肌層或黏膜下者為20例，而侵潤(rùn)漿膜或漿膜外者為30例。

30例正常大腸組組織取用行PPH術(shù)后痔瘡黏膜石蠟標(biāo)本，35例結(jié)直腸腺瘤則為行腸鏡電切術(shù)后的石蠟標(biāo)本。標(biāo)本均能到廣州市第一人民醫(yī)院病理科選取。所有標(biāo)本均制成4 μm切片。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料及方法 鼠抗人TF多克隆抗體(稀釋濃度1∶200)購(gòu)自Santa Cruz Biotechnology公司。SP試劑盒購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，具體操作按試劑盒說(shuō)明，行免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)TF在大腸三種不同組織的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)中使用陽(yáng)性和陰性對(duì)照，陰性對(duì)照為PBS緩沖液代替一抗作。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 陽(yáng)性參照Fromowitz方法，以細(xì)胞質(zhì)著棕黃色為陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn);根據(jù)腫瘤細(xì)胞顯色的比例及染色強(qiáng)度。在高倍鏡下對(duì)細(xì)胞內(nèi)反應(yīng)如下評(píng)分：①無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;②陽(yáng)性范圍：＜5%為0分，5% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～70%為3分，＞70%為4分。兩項(xiàng)結(jié)果相加＜2分為陰性(-)，2～3分為弱陽(yáng)性(+)，4～5分為中度陽(yáng)性(++)，6～7分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用采用SPSS16.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05;當(dāng)n＜5時(shí)，采用Fisher精確檢驗(yàn)法檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TF在正常結(jié)直腸組織、結(jié)直腸腺瘤組織以及結(jié)直腸癌中的表達(dá)率情況 正常結(jié)直腸組織、結(jié)直腸腺瘤組織以及結(jié)直腸癌中TF的表達(dá)率分別為16.67%、25.71%和76.00%。見(jiàn)表1。

表1 TF在三種組織中的陽(yáng)性表達(dá)情況(例，%)

2.2 TF的表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理的關(guān)系 TF的表達(dá)水平與腫瘤直徑、年齡、性別、侵潤(rùn)深度無(wú)關(guān);與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及TNM分期有關(guān)。見(jiàn)表2。

表2 結(jié)直腸癌TF表達(dá)及其與各種臨床病理的關(guān)系

附圖 TF在結(jié)直腸癌中表達(dá)與在腺瘤中陰性表達(dá)(×200)

3 討論

組織因子(tissue factor，TF)是一個(gè)由263個(gè)氨基酸殘基組成的跨膜單鏈糖蛋白，分子量約為47kDa。其中氨基端219個(gè)氨基酸殘基位于細(xì)胞膜外，緊隨其后的23個(gè)氨基酸殘基則穿過(guò)細(xì)胞膜，其余21個(gè)氨基酸殘基位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。許多研究報(bào)道TF在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，如黑色素瘤、胰腺癌、乳腺癌等腫瘤［4～7］。Lykke J等［8］于 2003 年發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌患者TF明顯升高。周紅等［9］實(shí)驗(yàn)報(bào)道高轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌細(xì)胞株SW620在基因和蛋白水平均大量表達(dá)PAR2和TF，而PAR2和TF可增強(qiáng)細(xì)胞的增殖、遷移能力等。目前TF在參與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移等機(jī)制仍不清楚。但近年來(lái)研究表明，TF與腫瘤的血管生成有關(guān)。丁會(huì)民等［10］研究表明肝癌組織TF的表達(dá)與其微血管的異常增生呈正相關(guān)。周業(yè)江等［11］報(bào)道組織因子的胞質(zhì)區(qū)末端具有細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)功能，可能促進(jìn)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的轉(zhuǎn)錄和合成。張全愛(ài)等［12］研究表明TF抗體靶向性抑制腫瘤血管生成導(dǎo)致腫瘤壞死。

本實(shí)驗(yàn)可證實(shí)：TF不僅參與生理性凝血反應(yīng)，也參與腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移，并能影響其預(yù)后。本實(shí)驗(yàn)表1顯示：TF在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)(76.00%)和在正常結(jié)直腸組織(16.67%)與腺瘤組織(25.71%)中表達(dá)之間在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異(P=0.00)。表2顯示：TF在結(jié)直腸癌中的表達(dá)水平與患者的性別、年齡、腫瘤大小以及腫瘤侵潤(rùn)深度無(wú)明顯關(guān)系(P＞0.05)，而與腫瘤的分化程度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(P＜0.05)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示TF與結(jié)直腸癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，為結(jié)直腸癌蛋的治療提供新的靶向位點(diǎn)，也為判斷其預(yù)后可能提供新的指標(biāo)。但TF在結(jié)直腸發(fā)生、轉(zhuǎn)移等分子學(xué)機(jī)制上仍有待更深入的研究。

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