抗HBV特異性主動免疫療法聯合拉米夫定治療慢性乙型肝炎療效與HLA-A2、病毒載量的相關性

楊麗敏,王守云,劉 坤,陳寒冬,趙培麗,劉志民

(河北省秦皇島市第三醫院中西醫肝病科,河北秦皇島,066001)

作者應用抗HBV特異性主動免疫療法聯合拉米夫定治療e抗原陽性慢性乙型肝炎(CHB)取得了很好的療效[1],本文旨在探討抗HBV特異性主動免疫療法聯合拉米夫定治療e抗原陽性慢性乙型肝炎(CHB)療效與HLA-A2、病毒載量的關系以指導臨床用藥。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2006年1月～2007年1月于我院門診就診治療并隨訪的60例e抗原陽性的慢性乙型肝炎患者,全部病例診斷符合2000年《病毒性肝炎防治方案》[2]及2005年我國《慢性乙型肝炎防治指南》[3],并且符合下述條件:①血清HBsAg陽性 、HBeAg陽性 、HBcAb陽性、HBVDNA 載量1≥1×103拷貝/mL;②治療前ALT反復升高至少2周以上未用過降酶藥物,且ALT水平在1～2×ULN(正常高限值),并排除酒精、肝臟毒性藥物等原因引起者;③年齡20～50歲,性別不限;④排除妊娠、對重組乙肝疫苗及拉米夫定有過敏史及其他嚴重疾病者。60例患者分為HLAA2陽性和HLA-A2陰性兩組,各30例,以病毒載量分為兩組:HBVDNA>1.0×105為高滴度組25例、HBVDNA≤1.0×105為低滴度組 35例,2組年齡、性別、病程均無明顯差異,具有可比性。男36例、女 24例,年齡 20～45歲,平均 34.32歲,HBsAg陽性2～27年。

1.2 治療方法

2組均采用抗HBV主動免疫療法協作組專用藥品:重組乙型肝炎疫苗20 μ g×2(華北制藥金坦生物技術股份有限公司生產)、重組人粒細胞刺激因子75ug和重組人白介素-2(125Ala)20萬IU(北京雙鷺藥業股份有限公司生產),三角肌皮下注射,每月1次,同時予以拉米夫定(葛蘭素史克中國制藥有限公司生產)100/d口服,治療12月,隨訪12月,觀察肝功能、HBV-M 、HBVDNA定量等。兩組病例治療期間不用其它免疫調節劑及護肝藥。

1.3 觀察指標及方法

1.3.1 ELISA 方法 檢測 HBsAg、HBsAb、HBeAg 、HBeAb、HBcAb 水平:治療前 、治療期間每3～6個月、治療結束及隨訪 6、12個月,采用ELISA 方 法 檢 測:HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb,試劑由北京萬泰生物有限公司生產;乙肝病毒核酸擴增(PCR)熒光定量法檢測HBVDNA定量值(參考值 <1.0歲103拷貝/mL),試劑由杭州博口科技有限公司生產,儀器型號為BA7600;采用日立7180全自動生化分析儀檢測肝功能(主要測 ALT、AST、TBIL、ALB、GLO),試劑由北京首醫生物科技有限公司生產。

1.3.2 PCR法檢測HLA-A2水平:具體方法如下:①HBV患者血液基因組DNA模版的提取:選用北京西波醫學技術有限責任公司提供血液/組織基因組DNA提取試劑盒。用該試劑盒依據標準操作步驟提取人血液基因組DNA模板,經紫外分光光度計檢測純度應符合標準(經驗值:1.60≤OD260:OD280≤2.00)。②HLA-A2基因組群的篩查與結果鑒定、HLA-A2及內參基因引物(北京西波醫學技術有限責任公司提供)為內參引物1對:上游引物A,下游引物B,擴增片段長度 330 bp。HLA-A2基因引物(2對):一對為上游引物P 1、下游引物P2,擴增片段長度457 bp;另一對為上游引物P3、下游引物P4,擴增片段長度813 bp。

1.4 療效判定標準[3]

完全應答:治療后ALT恢復正常,HBVDNA檢測不到和HBeAg血清學轉換;部分應答:介于完全應答與部分應答之間,如治療后出現生化學應答(ALT復常)并有病毒學應答(HBVDNA載量下降2個㏒值以上或檢測不到)和/或血清學應答(HBeAg陰性或HBeAg血清學轉換、HBeAb陽性);無應答:未達到以上應答者。

2 結 果

2.1 60例患者HLA-A2結果與治療應答效果

60例患者治療結束時完全應答1例、部分應答40例,總有效率68.33%(41/60)。隨訪12個月時完全應答2例、部分應答 41例,總有效率71.67%(43/60)。統計治療結束時和隨訪12個月時的應答效果,治療后HLA-A2陽性應答效果與HLA-A2陰性比較差異有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 HLA-A2與療效的關系(n)

2.2 60例患者血清病毒載量水平與治療應答效果

統計治療結束時和隨訪12個月時的應答效果,結果顯示治療后低滴度組應答效果與高滴度組比較差異有統計學意義(P<0.05),見表2。

表2 病毒載量與療效的關系(n)

3 討 論

在ALT輕微升高的慢性乙型肝炎患者,免疫反應的攻擊造成的肝損傷是隱匿且長期慢性的,它會最終導致肝臟更為嚴重與長久的損傷[4]。基于此作者曾應用拉米夫定聯合抗HBV特異性主動免疫療法治療慢性乙型肝炎60例取得了很好的效果[1]。國內外研究表明,治療前血清HBV載量水平是影響治療效果的重要因素之一[5-6]。在多途徑清除HBV免疫應答中MHC-1限制特異性CTL反應起關鍵作用,特異性CTL對HBV特異性抗原發生免疫應答時其表位多屬于HLAA2限制性。我們在應用拉米夫定聯合抗HBV特異性主動免疫療法治療慢性乙型肝炎過程中,觀察到HLA-A2陽性組完全應答率、部分應答率高于HLA-A2陰性組,兩組比較有顯著差異(P<0.05),同時觀察了病毒載量與療效的關系表明:完全應答率、部分應答率與病毒載量有明顯的相關性,病毒載量高的一組與比病毒載量低的一組比較有顯著差異(P<0.05),因此,在治療前檢測HBVDNA水平及HLA-A2對于預測療效具有指導意義,為病例的選擇提供了依據,對進行個體化治療,優化治療方案起著重要的作用,從而可以減少盲目用藥,減輕患者的經濟負擔。

[1]王守云,彭勛,王玉華,等.抗乙型肝炎病毒特異性主動免疫療法聯合拉米夫定治療慢性乙型肝炎臨床療效觀察[J].中國綜合臨床,2009,25:463.

[2]中華醫學會傳染病與寄生蟲學分會,肝病學分會.病毒性肝炎防治方案[J].中華肝臟病雜志,2000,8:324.

[3]中華醫學會肝病學分會,感染病學會.慢性乙型肝炎防治指南[J].中華肝臟病雜志,2005,13:881.

[4]蘇盛.慢性HBV感染治療新策略:個體化療法的理論與臨床[M].北京:北京大學醫學出版社,2006:5.

[5]張復春,吳婉芬,董慧卿,等.定量聚合酶鏈反應檢測血清中HBVDNA及其臨床應用[J].中華傳染病雜志,1997,15:24.

[6]Perrillo RP,Lai CL,Liaw YF,et al.Predictors of HbeAg loss afterlamivudine treatment for chronic hepatitis B[J].Hepatology,2002,36:186.