HPLC-ELSD法測定甘露醇注射液中甘露醇的含量

張建業(yè) 馮向東 河南省南陽市食品藥品檢驗所（473061）

HPLC-ELSD法測定甘露醇注射液中甘露醇的含量

張建業(yè) 馮向東 河南省南陽市食品藥品檢驗所（473061）

目的 建立甘露醇注射液中甘露醇的含量測定方法。方法 采用HPLC法，使用氨基柱，流動相為乙腈-水(83：17 )；ELSD漂移管溫度70℃；氮氣流速2.0L/min；柱溫30℃。結果 甘露醇與相鄰峰得到很好分離，進樣量在1.008～6.048μg時線性關系良好，回歸方程為Y=1.6206X+4.13；r=0.9992；平均加樣回收率：99.24%，RSD 為2.01%。結論 本法結果準確，便于操作，可作為甘露醇注射液的質量控制方法之一。

HPLC-ELSD；甘露醇注射液；甘露醇

甘露醇注射液是一種常用的滲透性脫水藥，因其起效快，作用持久，用后無明顯“反跳現象”，為治療腦水腫的首選藥，臨床使用量較大。2005年版《中國藥典》收載的該品種含量測定方法是氧化還原滴定法，2010年版中國藥典采用示差折光高效液相色譜法測該制劑的含量，色譜柱采用強陽離子交換柱，因示差折光檢測器目前還不普及，所以限制了該方法的應用。本文參考文獻[1]，用高效液相色譜法，采用氨基柱，配合蒸發(fā)光散射檢測器，對甘露醇注射液中甘露醇進行了測定，結果較滿意。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀，Waters 2424 蒸發(fā)光散射檢測器；Empower Two色譜管理軟件；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純；甘露醇對照品、山梨醇對照品購自中檢所（批號100534-200301、100555-200306），甘露醇由市場購得（河南華利藥業(yè)有限公司 規(guī)格250ml:50g）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Thermo 氨基柱（4.6mm×200mm粒徑5μm）；流動相為乙腈-水(83:17 )；流速1.0ml/min；柱溫30℃；ELSD漂移管溫度70℃；氮氣流速2.0L/min；進樣量15μl，甘露醇峰理論塔板數不低于4000。

2.2 供試品溶液制備 精密量取本品1ml，移至100ml容量瓶中，流動相加至刻度，搖勻，精密量取5ml移至50ml容量瓶中，流動相加至刻度，搖勻。0.45μm濾膜濾過，即得0.2 mg/ml供試品溶液。

2.3 對照品溶液制備 精密稱取經五氧化二磷減壓干燥24h的甘露醇對照品20.16mg，山梨醇對照品18.63mg，分別置100ml容量瓶中容量瓶中，分別加流動相至刻度，即得每1ml中含0.2016mg的甘露醇對照品溶液及每1ml中含0.1863mg的山梨醇對照品溶液。

3 方法學考察

3.1 分離度及線性關系 取上述兩種對照品溶液等量混合，按上文的色譜條件進樣20μl，測定，結果甘露醇與山梨醇分離度大于2.0，符合藥典要求。色譜圖見圖1。

分別取甘露醇對照品溶液5、10、15、20、25、30μl進樣，按上文的條件與方法進樣測定，以對照品進樣量的自然對數（lnX）為橫坐標，以峰面積的自然對數（lnY）為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程為Y=1.6206X+4.13；r=0.9992；線性范圍為；1.008～6.048μg 。

3.2 精密度試驗 取甘露醇對照品溶液，按2.1項下重復進樣5次，測定峰面積的RSD為1.46%，結果表明精密度良好。

3.3 穩(wěn)定性試驗 取同一批樣品溶液，室溫下放置，按2.1項下測定方法和條件，分別于0、2、4、8h測峰面積，結果表明在8h內具有良好穩(wěn)定性，RSD為2.31%。

3.4 重復性試驗 取同一批樣品（批號090004）6份，按2.2項下制成供試品溶液，按2.1項下分別測定。計算含量，平均含量98.2%，RSD為1.86%。

3.5 回收率試驗 取已知含量的供試品（批號090004）溶液6份，每份2ml，移至5ml容量瓶中，分別精密加入甘露醇對照品液2ml，流動相加至刻度，按2.1項下分別測定。計算回收率，結果回收率99.24%，RSD為2.01%。結果見表1。

表1 甘露醇加樣回收率試驗結果

3.6 樣品含量測定 取由市場購得的樣品3批，按2.2項下制成供試品溶液，分別精密吸取甘露醇對照品溶液20μl，供試品溶液20μl，注入高效液相色譜儀，按2.1項下測定，外標法計算含量，結果批號090004、090013、090011的甘露醇含量分別為標示量的98.2%、97.6%、98.7%。色譜圖見圖2。

4 討論

4.1 色譜柱的選擇 甘露醇屬極性化合物，若用C18柱分離，色譜峰幾乎不被色譜柱保留，很快被洗脫下來，所以不能采用常規(guī)的反相色譜柱分離測定。氨基柱為中等極性色譜柱，其鍵和相的氨基可與甘露醇選擇性作用，可以用來分離雜質，在本實驗色譜條件下，分離效果良好。

HPLC-ELSD Determination of Mannitol in Mannitol Injection

Zhang Jianye Feng Xiangdong , ( Nan yang Institute for Food and Drug Contral , Nan yang 473061 , China)

Objective To establish the method of determining mannitol in mannitol injection . Methods HPLC-ELSD was used to determine mannitol in mannitol injection. The chromatographic analysis were carried on a NH2 column , The mobile phase composition was acetonitrile- water (83:17) at 30℃.；Drift tube temperature: 70℃，gas flow rate: 2.0L/min. Results Mannitol and the adjacent peaks are well separated. The calibration curves was linear in the ranges of 1.008～6.048μg.and regressive equations was Y=1.6206X+4.13. r=0.9992. Average recoveries was 99.24%. Conclusion The method is simple and rapid and with satisfactory results，It is suitable for quality control of mannitol injection.

HPLC-ELSD；Mannitol Injection；Mannitol

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.18.176

1672-2779（2010）-18-0241-02