豬弓形蟲病血清流行病學調查與分析

劉靖清，張 亮，袁 濤

（1.鹽城市畜牧獸醫局，江蘇鹽城 224002；2.中農威特生物科技股份有限公司，甘肅蘭州 730046）

豬弓形蟲病血清流行病學調查與分析

劉靖清1，張 亮2，袁 濤2

（1.鹽城市畜牧獸醫局，江蘇鹽城 224002；2.中農威特生物科技股份有限公司，甘肅蘭州 730046）

弓形蟲病是龔第弓形蟲引起的一種人和多種動物共患寄生蟲病。豬肉被認為是引起人感染弓形蟲病的主要傳染源，鑒于弓形蟲病對養殖業造成巨大經濟損失以及先天性弓形蟲病對優生優育的重要影響和獲得性弓形蟲病對免疫功能低下病人的嚴重危害。應將該病的診、治、防工作作為研究重點。

弓形蟲這一病原體于1908年由Nicolle和Manceaux在北非突尼斯的嚙齒類梳趾鼠體內發現，并正式命名。幾乎同時，Splendole亦于1908年在巴西一個實驗室的家兔體內發現了弓形蟲。自此以后，陸續在世界各地的人和動物中發現弓形蟲病。我國于20世紀50年代首先在福建的貓、兔等動物體發現了本病病原體，但直至1977年后才陸續在上海、北京等地發現過去所謂的“無名高熱”是由弓形蟲引起的，并引起普遍的重視。弓形蟲病宿主種類十分廣泛，和動物感染率都很高。據國外報道，人群的平均感染率25%～50%，有人推算全世約1/4的人感染弓形蟲。在免疫缺陷和免疫抑制病人合并感染弓形蟲可導致腦炎發生。豬暴發弓形蟲病時，可使整個豬場發病，死亡率高達60%以上。其它家畜如牛、羊、馬、犬和實驗動物等也都能感染弓形蟲。因此本病給人類健康和畜牧發展帶來很大危害和威脅。目前各省市各種動物均有本病的存在。其特征表現為高熱稽留，呼吸困難，皮膚發紺，流產，便秘或腹瀉。臨床可見急性、亞急性和慢性三種病型，嚴重的可引起死亡。是目前危害養殖業的一種重要的寄生蟲性疾病，磺胺類藥物對弓形蟲有很好的療效，臨床上常用的磺胺六甲氧嘧啶、磺胺五甲氧嘧啶、復合磺胺嘧啶鈉、強化長效抗菌劑、甲氧芐胺嘧啶（TMP）和磺胺甲氧吡嗪（SMP2）等都是很好的治療藥物。用藥時要注意“用早藥、療程足”的治療方針，病情控制后應繼續治療1～2 d，效果較好。

一、材料和方法

（一）材料

1.抗原。弓形蟲間接血凝實驗凍干抗原，中國農業科學院蘭州獸醫研究所生產，批號為20070718。用于檢測人和動物血清或濾紙干血滴中的弓形蟲抗體，效價不低于1∶1024。用前按標定毫升數用滅菌蒸餾水稀釋搖勻，1 500～2 000 r/min離心5～10 min，棄去上清液，加等量稀釋液（PDS與兔血清）搖勻，置4℃左右24 h后使用。稀釋后作為診斷液，4℃左右保存，10 d內效價不變。

2.標準陽性和陰性血清。弓形蟲標準陽性血清（效價不低于1∶1024），中國農業科學院蘭州獸醫研究所生產，批號為20070718。弓形蟲標準陰性血清，中國農業科學院蘭州獸醫研究所生產，批號為20070718。

3.被檢血清。采自甘肅省11地區的定點屠宰場、養殖場、散養戶等動物的血清534份。成年豬從耳靜脈采血，每頭動物采血3～5 ml。37℃靜置0.5～1 h后（或2 000 r/min離心5 min）分離血清約1.5 m1，置-20℃備用。

4.稀釋液。稀釋液，中國農業科學院蘭州獸醫研究所生產，批號為20070718。

自配稀釋液。先配制含0.1%迭氮鈉的pH7.2, 0.15 mol/L磷酸鹽緩沖液（PBS），稱取磷酸氫二鈉19.34 g、磷酸二氫鉀2.86 g、氯化鈉4.25 g、迭氮鈉1.00 g，雙蒸餾水或無離子水溶解并加至1 000 ml，過濾后分裝，10磅15 min高壓滅菌。取含0.1%迭氮鈉的PBS 98 ml、56℃滅活30 min的健康兔血清2 ml，混合，無菌分裝，4℃保存備用。

5.病豬與病料。武威市某豬場飼養發病豬群；無菌采取病死豬肺門淋巴結、肺、肝、脾等臟器組織。

6.主要試劑。

（1）瑞氏染液。市售的瑞氏染色粉0.2 g，加無水中性甲醇100 ml，溶解后移入棕色小口試劑瓶中，加塞，置室溫下，每日搖動45 min，一周后可用。

（2）姬氏染液。取市售姬氏染色粉0.5 g，中性純甘油25.0 ml，無水中性甲醇25.0 ml。先將姬氏染色粉置研缽中，加少量甘油充分研磨，再加再磨，直到甘油全部加完為止，將其倒入100 ml的小口試劑瓶中，在研缽中加少量的甲醇以沖洗甘油染液，沖洗液仍傾入上述瓶中，再加再洗再傾入，直到25 ml甲醇全部用完為止。塞緊瓶塞，充分搖勻，而后將瓶置于65℃溫箱中24 h或室溫3～5 d，并不斷搖動，即為原液。取原液2.0 ml，加到中性蒸餾水100 ml中，即為染液。

（3）血瓊脂培養基。將滅菌的營養瓊脂加熱融化，冷至45℃～50℃，加入無菌鮮血達5%（即每100 ml營養瓊脂中加入鮮血5～6 ml），分裝于試管中，擺成斜面，或傾注于平皿，待凝固后，置37℃培養1～2 d，有污染者廢棄，無菌者保存于冰箱備用。

（4）無菌鮮血。無菌手術法采取健康動物（通常是綿羊或家兔）血液，加入盛有無菌5%檸檬酸鈉溶液的容器中（血與5%檸檬酸鈉的比例約為9∶1），混勻，置冰箱中保存。

（5）青霉素、鏈霉素。購自華北制藥廠。

7.主要儀器。微量移液器（25μ l,75 μ l, 1 000 μ l），微量血凝反應板（96孔），隔水式恒溫培養箱，溫度范圍5℃～60℃，離心機4 000 r/min，超生波清洗器，微量攪拌器。

（二）方法

1.弓形蟲病的血清學調查。采用弓形蟲病間接血凝試驗，對采自甘肅省11個地區的豬血清樣品進行檢測。取V型微量反應板，按以下步驟操作。

⑴加稀釋液。用移液器將稀釋液加入96孔V型反應板上，每孔0.075 ml。定性檢查時，每個樣品加4孔，定量則加8孔。每塊板上均應設陽、陰性血清對照，對照均加8孔。

⑵加待檢血清和陰、陽性對照血清，并作梯度稀釋。第一孔加相應血清0.025 ml，混勻后取0.025 ml加入第二孔中，混勻后取0.025 ml加入第三孔中，以此類推。定性檢查時稀釋至第3孔后，取0.025 ml棄去，第4孔為稀釋液對照；定量檢查與對照均稀釋至第7孔后，取0.025 ml棄去，第8孔為稀釋液對照。

⑶加診斷液。每孔加診斷液0.025 ml，加完后將反應板置微型振蕩器上震蕩1～2 min，直到診斷液中的血球分布均勻。取下反應板，蓋上一塊玻璃板或干凈紙，以防落入灰塵，置22～37℃，2～3 h后觀察結果。

表1 甘肅省各地區豬弓形蟲感染情況

表2 不同月齡豬弓形蟲感染情況

表3 不同地區豬抗體滴度分布

⑷結果判定。陽性對照血清滴度不低于1∶1024（第5孔），陰性對照血清除第1孔允許存在前滯現象（＋），其余各孔均為（-），稀釋液對照為（-）。依據判定標準對被檢血清進行判定。(++++）：100%紅細胞在孔底呈均質的膜樣凝集，邊緣整齊、致密（因動力關系，膜樣凝集的紅細胞有的出現下滑現象）；（+++）：75%紅細胞在孔底呈膜樣凝集，不凝集的紅細胞在孔底中央集中成很小的圓點；(++）：50%的紅細胞在孔底呈稀疏的凝集，不凝集的紅細胞在孔底中央集中成較大的圓點；(+）：25%的紅細胞在孔底凝集，其余不凝集的紅細胞在孔底中央集中成大的圓點；(-）：所有的紅細胞均不凝集，并集中于孔底中央呈規則的最大的圓點。以被檢血清抗體滴度達到或超過1:64判為陽性，判(++）為陽性終點。

二、結果

（一）豬弓形蟲感染情況通過間接血凝試驗調查了534頭家畜血清抗體陽性55頭（個），平均陽性率為10.29%.

（二）不同地區豬弓形蟲感染情況通過間接血凝試驗調查了11個地區的534頭豬弓形蟲感染情況，結果見表1。其中，血清抗體陽性55頭，平均陽性率為10.29%。

（三）不同月齡的豬感染情況通過間接血凝試驗分別對武威地區6～13個月齡豬弓形蟲感染情況進行調查，結果見表2。其中，抗體陽性37頭，平均陽性率11.07%。

（四）抗體滴度分布弓形蟲血清抗體陽性的家畜中，豬抗體滴度最高達1∶1024。在55份陽性血清中，1∶64的有35份，占63.63%，1∶ 256的有16份，占29.09%，1∶1024有4份，占7.27%不同地區豬的抗體滴度分布情況見表3。

三、結論

1．調查表明，各地豬均有弓形蟲感染，平均陽性率為10.29%

2．調查的55份陽性血清中，1∶256有 16份， 占 29.09%，1∶1024有4份，占7.27%，所以屬急性感染者20份，占36.36%。

3.從豬弓形蟲陽性檢出率為10.29%來看，目前豬弓形蟲病還比較嚴重，同時，確診武威地區某養豬場育肥豬患有弓形蟲病。

4.農戶散養、個體飼養場以及小規模飼養場的豬弓形蟲陽性率明顯高于大規模飼養場，這主要與衛生條件、飼養水平、管理方式有關。不同月齡豬的弓形蟲感染率沒有明顯的差異，也沒有嚴格的季節性，但秋冬季和早春發病率高，可能與此時動物機體抵抗力較低有關。養豬場除了要做好滅鼠、驅貓工作外，還應防范飼料污染，特別是從農戶收購飼料原料的場，要了解原料與貓的接觸情況，以防止通過污染飼料渠道感染弓形蟲。

（略）