腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體在卵巢上皮癌中的表達

李 艷,董自江

(江蘇省連云港市第一人民醫院婦產科,江蘇連云港,222002)

卵巢癌位于女性生殖系統三大惡性腫瘤之首,死亡率最高,嚴重威脅婦女生命。近年來,為癌癥患者尋求新的化療藥物靶點、提高化療療效已成為研究熱點。腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)是腫瘤壞死因子(TNF)超家族新成員,有廣譜的抗瘤作用,且對正常組織細胞無毒性[1],因此有望應用于腫瘤基因治療。Lancaster等[2]檢測了109例晚期卵巢患者的 TRAIL表達,研究發現TRAIL高表達患者的生存率更長。本文研究了不同臨床分期及組織病理分級卵巢癌組織中T RAIL的表達,探討其在抑制卵巢癌細胞增殖中的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗對象

35份卵巢癌標本均來自2006年5月～2009年7月本院收治的卵巢癌患者,平均年齡(39.91±8.59)歲(23～52歲),其中漿液性囊腺癌23例、黏液性囊腺癌12例;高分化15例,中分化9例,低分化11例;根據第7版婦產科學2000年FIGO分期:Ⅰ期10例,Ⅱ期14例,Ⅲ期11例。同時選取卵巢良性腫瘤組織12份,因其他原因切除的正常卵巢組織12份。均為絕經前婦女,前半年無激素使用史、化療史,排除內分泌系統疾病,診斷均經組織病理檢查證實。

1.2 實驗方法

試劑采用兔抗人蛋白多克隆抗體TRAIL(Cell Sciense公司),SP試劑盒(福州邁新生物技術有限公司)。所有標本按常規石蠟切片,切成2μ m的連續切片,脫蠟水化,按免疫組化SP法進行染色。Ⅰ抗是兔抗人蛋白多克隆抗體TRAIL(1:100稀釋),在4℃的條件下孵育24 h;Ⅱ抗是生物素化羊抗鼠或兔IgG,室溫下孵育40 min,DAB顯色孵育5 min,常規脫水 中性樹膠封片、拍照。實驗中將已知的 TRAIL陽性切片為陽性對照,用PBS緩沖液代替Ⅰ抗作為陰性對照。

1.3 結果觀察及圖象分析

免疫組化染色示陽性反應在細胞質和細胞膜,細胞核不著色。無棕黃色為(-);淡棕黃色為(+);棕黃色為();棕褐色為( )。同樣物鏡下觀察陽性細胞數,無陽性細胞數為(-);陽性細胞數≤10%為(+);陽性細胞數11%～50%為( );陽性細胞數>50%為( )。用生物圖象分析軟件對兩組數據進行分析,在20倍物鏡下每組隨機選取視野59個,分別測定每個視野的平均吸光度(A)。

1.5 統計學方法

用SPSS 11.0統計學軟件,對多個樣本均數的比較采用方差分析,率的比較用χ2檢驗,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 TRAIL在各組表達的陽性率比較

TRAIL免疫反應的強度在正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織、不同臨床分期卵巢癌依次減弱,著色也變淡,陽性率也依次降低,經統計學連續校正χ2檢驗,差異均有統計學意義(P<0.05)(表1)。

表1 TRAIL在不同臨床分期卵巢上皮性腫瘤中的表達

2.2 TRAIL在各組平均吸光度比較

TRAIL表達的平均吸光度按正常卵巢組織、卵巢良性腫瘤組織、不同組織病理分期卵巢癌的順序依次遞減,各組間的差異均具有統計學意義(P<0.05),但是正常卵巢組織與良性卵巢組織之間的差異無統計學意義(P>0.05);高、中分化間差異無統計學意義(P>0.05);卵巢癌其他組間差異均有統計學意義(P<0.05)(表2)。

表2 TRAIL在不同組織病理分級卵巢上皮性腫瘤中的表達

3 討 論

TRAIL是近年新發現的一種凋亡誘導配體,共5個受體,包括 T RAILR1(DR4)、T RAILR2(DR5)、TRAILR3(DCR1)、TRAILR4(DCR2)和OPG[3]。DR4、DR5是死亡受體,在各種腫瘤細胞及正常細胞均有不同程度的表達;DCR1、DCR2、OPG是誘騙受體,只在正常組織中表達,在腫瘤組織中不表達。在正常組織中,DCR1、DCR2通過與死亡受體競爭結合TRAIL,而使正常組織逃逸TRAIL的殺傷作用。因此,TRAIL能夠選擇性有效地誘導腫瘤細胞凋亡而未發現明顯的不良反應[4-5]。TRAIL通過與死亡受體特異性結合,激活caspase級聯反應,傳遞和放大凋亡信號,從而誘導靶細胞發生凋亡。對卵巢癌細胞的研究提示,存在兩種以上的TRAIL信號傳導途徑[6],細胞FLICE抑制蛋白的表達[7]、IL-8[8]等也影響TRAIL的功能。王曉云等[9]通過轉染T RAIL的內皮祖細胞作用于卵巢癌動物模型,發現對移植瘤具有抑制作用,為卵巢癌靶向治療應用于臨床提供了有力的支持。

本實驗采用免疫組化技術,在卵巢上皮性癌組織中檢測到T RAIL。實驗結果表明T RAIL表達的陽性率在Ⅰ期卵巢癌最高,Ⅱ期次之,Ⅲ期最低,提示隨著癌組織臨床分期的不同 TRAIL的表達有一定變化,卵巢癌臨床分期越高,陽性率越低;反之,陽性率越高。而且TRAIL在正常卵巢組織和卵巢良性組織的表達也不同,在良性腫瘤中陽性率降低。同時本研究利用計算機圖像分析技術對TRAIL在不同組織病理分級卵巢癌組織中的表達進行半定量分析。結果發現:TRAIL在卵巢癌中的表達按病理分級呈遞減趨勢,腫瘤分級越高,表達越高,平均吸光度越大;反之,腫瘤分級越低,表達越低,平均吸光度越小。本實驗表明,TRAIL參與了抑制卵巢癌細胞的增殖過程,而且可能參與了卵巢上皮癌的腫瘤細胞凋亡的分子機制,若是能使生物療法同化學療法二者共同結合使用,可降低化療藥物的不良反應,提高卵巢癌患者的5年生存率,為卵巢癌的基因治療提供了可靠的理論依據。

[1]賈筱琴,王正兵,陳兵,等.重組TRAIL抑制7402肝癌細胞生長的實驗研究[J].實用臨床醫藥雜志,2004,8(6):22.

[2]Lancaster JM,Sayer R,Blanchette C,et al.High expression of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand is associated with favorable ovarian cancer survival[J].Clin Cancer Res,2003,9(2):762.

[3]祝瑾,李寧川,程宏.TRAIL誘導白血病細胞凋亡的分子機制研究[J].實用臨床醫藥雜志,2004,8(3):35.

[4]王紅霞.腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體及其在婦科腫瘤中的研究進展[J].遼寧醫學院學報,2010,31(2):180.

[5]林靜瓔,歐陽學農.腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體研究進展[J].福建醫藥雜志,2009,31(3):88.

[6]浦踐一,魏曉璇,沈揚.人多發性骨髓瘤細胞株RPMI8226和U266對TRAIL耐藥的機制探討[J].山東醫藥,2010,50(31):63.

[7]Horak P,Pils D,Kaider A,et al.Perturbation of the tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand cascade in ovarian cancer:overexpression of FLIPL and deregulation of the functional receptors DR4 and DR5[J].Clin Cancer Res,2005,11(24):8585.

[8]Abdollahi T,Robertson NM,Abdollahi A,Litwack G.Inhibition of TRAIL-induced apoptosis by IL-8 is mediated by the p38-MAPK pathway in OVCAR3 cells[J].Apoptosis,2005,10(6):1383.

[9]王曉云,李家棟,陳乾美,等.標記 TRAILR地高辛探針及原位雜交檢測喉癌組織M rna[J].貴陽醫學院學報,2007,32(1):19.