培養基對抗生素效價測定的影響

王美珍

云南省紅河州食品藥品檢驗所,云南 蒙自 661100

1 標準品、實驗用菌液的制備

標準品：慶大霉素,批號 130326-200314,規格 638u/mg,中國藥品生物制品檢定所。

實驗用菌液的制備：實驗菌,短小芽孢桿菌 (Bacillus pumilus,63202號)芽孢懸液。取短小芽孢桿菌 (63202)工作用菌種普通瓊脂斜面培養物,加滅菌生理鹽水 3-4毫升將菌苔洗下,制成懸液,用吸管將此懸液接種至盛有培養基 I號 (pH7.8-8.0)大試管斜面內,在 37℃培養 7天。取菌苔涂片,革蘭氏染色鏡檢,應有芽孢 85%以上,用滅菌水將芽孢洗下,制成芽孢懸液,合并至滅菌大試管內,在 70℃水浴加熱 30分鐘,將芽孢懸液移至滅菌離心管內,rmp1500,離心 20分鐘。同法離心沉淀,共操作 3次。將菌懸液移至滅菌試管內,再置 70℃水浴加熱 30分鐘。4-8℃保存,可使用 6-12個月。

2 培養基、供試樣品

培養基供試樣品名稱 批號 生產廠家 樣品名稱 規格 批號 生產廠家抗生素檢定培養基I(pH7.8-8.0) 080414 北京三藥科技開發公司硫酸慶大霉素片 4萬單位/片 20080103 廣東臺城制藥有限公司硫酸慶大霉素片 4萬單位/片 20080601 大同云崗制藥有限公司抗生素檢定培養基I(pH7.8-8.0) 070824 中國進出口商品檢驗技術研究所硫酸慶大霉素顆粒 10mg/袋 080302 河北華威得菲爾藥業有限公司硫酸慶大霉素顆粒 10mg/袋 0801001 華北制藥集團制劑有限公司

3 實驗結果

培養基測定結果樣品名稱硫酸慶大霉素片 (廣東臺城制藥有限公司) 硫酸慶大霉素片 (大同云崗制藥有限公司)試品間 回歸 偏離平行 測定效價 平均可信限率 試品間 回歸 偏離平行 測定效價 平均可信限率北京三藥科技開發公司 P＞0.05 P＜0.01 P＞0.05 108.7% 5.2% P＞0.05 P＜0.01 P＞0.05 98.7% 3.8%中國進出口商品檢驗技術研究所P＞0.05 P＜0.01 P＞0.05 102.2% 5.0% P＞0.05 P＜0.01 P＞0.05 91.4% 4.5%北京三藥科技開發公司 P＜0.01 P＜0.01 P＞0.05 91.1% 4.3%P＜0.01 P＞0.05 P＞0.05 P＜0.01 P＜0.01 P＜0.01 P＞0.05 P＞0.05 P＞0.05 86.8%85.7%83.0%4.2%5.6%4.6%中國進出口商品檢驗技術研究所P＞0.05 P＜0.01 P＞0.05 99.2% 4.7% P＞0.05 P＜0.01 P＞0.05 101.7% 5.1%

4 討論

從以上四個樣品的檢測結果可以看出,使用相同培養基對同一個樣品進行多次測定時,測得結果之差大約為1-5%,而使用不同廠家的培養基,測得結果之差 ＞5%。培養基的性質不同對抑菌圈清晰度及實驗結果的精確度影響較大。在抗生素微生物檢定法的整個試驗中,從標準品、供試品的取樣到培養基、緩沖液配制及實驗菌種的制備各個環節均不容忽視。在日常工作中我們常常會碰到抑菌圈破裂、呈卵圓形、橢圓形甚至無圈等不正常情況。通過從多方面分析原因,有時重新選擇另一個批號或者廠家的培養基就能得到滿意的實驗結果。另外,配制培養基及緩沖液的純化水也很重要,因為各地水質酸度不一,按照藥典規定配制的培養基及緩沖液的 pH值也不相同,這就需要我們對配制好的培養基及緩沖液的 pH值進行校對。在氨基糖苷類抗生素的檢測中,培養基及緩沖液的 pH值對抑菌圈的形成影響很大,酸度越高得到的抑菌圈就越小。所以對檢測效價在合格與不合格邊緣的抗生素藥品,應再換另一個廠家或批號的培養基進行再次試驗,根據兩次結果進行比較,從而得到比較準確的測定數據。

[1]國家藥典委員會.抗生素微生物檢定法 《中國藥典》2005年版二部附錄ⅪA：79-84.

[2]張治錟.抗生素藥品效價的微生物檢定─管碟法 《抗生素藥品檢驗》1987,12-21,59-65.

[3]桑國衛,等.抗生素微生物檢定法 《中國藥品檢驗標準操作規范》2000,376-377.