氣相色譜法測定培美曲塞二鈉中有機溶劑殘留量

趙硯榮，徐 嫻

(江蘇奧賽康藥業有限公司，南京 211112)

培美曲塞二鈉（pemetrexed disodium）是一種多靶位葉酸拮抗劑，可同時阻斷胸苷酸合酶（TS）、二氫葉酸還原酶（DHFR）和甘氨酰胺核苷酸轉甲酰酶（GARFT）這3種不同的對癌細胞的生存至關重要的酶靶標，從而阻斷腫瘤DNA復制、細胞分裂所需的酶，抑制了腫瘤的生長[1-2]。由于該原料藥在制備過程中使用了有機溶劑二氯甲烷、四氫呋喃和N，N-二甲基甲酰胺，依據人用藥品注冊技術規范國際協調會（ICH）提出的殘留溶劑指導原則，所用溶劑均被列為藥品必須限制的第二、三類有機溶劑[3]，因此為保證藥品質量和用藥安全，對該原料藥進行有機溶劑殘留量檢測就顯得尤為重要。本實驗采用毛細管氣相色譜法[4-6]，對培美曲塞二鈉中有機溶劑殘留量分析進行了系統性的研究、確認，所建立的方法簡單、靈敏、重現性好、準確度高。可用于實際生產中的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津GC-14C型氣相色譜儀（配FID檢測器，化學工作站）。

1.2 試藥

培美曲塞二鈉 （批號：090201，090202，090903，090204，江蘇奧賽康藥業有限公司）。二氯甲烷、四氫呋喃和N，N-二甲基甲酰胺均為分析純（南京化學試劑廠）；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：OV-101 毛細管色譜柱（30 m×0.53 mm，1.0 μm），內涂100%聚二甲基聚硅氧烷。柱溫：50℃；保持5 min后，以30℃/min速度升至 150℃，保持 3 min；進樣口溫度：180℃；檢測室（FID）溫度：200℃；載氣：N2；流速：1.0 ml/min；分流比為1∶50；進樣體積：1 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液的制備 精密稱取二氯甲烷0.024 g、四氫呋喃 0.0288 g、N，N-二甲基甲酰胺 0.0352 g置 50 ml量瓶中，加純化水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液0.5 ml，置10 ml量瓶中，加純化水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取培美曲塞二鈉40 mg，精密稱定，置5 ml具塞試管中，加純化水1 ml，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 色譜峰定性試驗

分別精密吸取二氯甲烷、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺各 1 μl，按“2.1”項下的色譜條件進樣，記錄色譜圖。 二氯甲烷峰的保留時間為0.918 min，四氫呋喃峰的保留時間為1.295 min，N，N-二甲基甲酰胺峰的保留時間為3.583 min，結果見圖1。

表1 線性關系試驗結果Tab.1 Standard curves of three kinds of organic solvents

2.4 線性關系考察

取二氯甲烷、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺，分別精密稱定，置同一只100 ml量瓶中，用純化水制成標準貯備液，其質量濃度分別為0.253、0.406、0.376 mg/ml。精密量取標準貯備液 0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 ml分別置于 25 ml量瓶中，用純化水稀釋至刻度，搖勻，得對照品系列標準溶液。精密量取系列標準溶液各1 μl，分別進樣分析，以峰面積（A）對相應溶液中各組分質量濃度（C）作線性回歸，結果見表1。

2.5 檢測限測定

取二氯甲烷、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺分別加水稀釋，按“2.1”項下的色譜條件進樣。信噪比S/N=3時計算檢測限，分別為 0.4、0.4、1.7 μg/ml。

2.6 精密度試驗

精密吸取線性關系考察項下中間濃度的溶液，重復進樣6次，以各溶劑峰面積計算，RSD分別為2.01%、2.98%和3.14%，結果表明該法精密度良好。

2.7 重復性試驗

取二氯甲烷、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺和培美曲塞二鈉（批號：090201）適量，按“2.2”項下方法制備混合對照品溶液和6份供試品溶液，分別進樣分析。結果3種有機溶劑均未檢出。

2.8 穩定性試驗

取回收率試驗項下序號為1的測試溶液，放置1 d后，按“2.1”項下的色譜條件進樣分析，檢測結果不變，表明被測物的穩定性良好。

2.9 回收率試驗

取已知溶劑殘留量的培美曲塞二鈉（批號：090201）40 mg，精密稱定，置5 ml具塞試管中，共6份，精密添加1 ml二氯甲烷、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺質量濃度分別為20.24、32.48、30.08 μg/ml的混合標準溶液，振搖使溶解，搖勻。 按“2.1”項下色譜條件進樣分析，計算回收率，見表2。結果表明該法準確性良好。

表2 回收率測定結果（n=6）Tab.2 Results of the recoveries （n=6）

2.10 樣品測定

取對照品溶液和供試品溶液進樣測定，按外標法以峰面積定量計算。3批培美曲塞二鈉樣品（批號：090202、090203、090204）中3種有機溶劑均未檢出。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

由于原料藥在水中易溶，故選擇水作為溶劑。分析時采用程序升溫，在保證各溶劑分離良好的情況下，提高分析效率。結果表明用水作溶劑，譜圖簡單，干擾峰少，6 min內完成整個分析，快速簡便。

3.2 系統耐用性

在實驗過程中，曾選用Agilent DB-5毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），內涂 5%苯基甲基聚硅氧烷，其他按“2.1”項下色譜條件進行測定，各溶劑峰除保留時間略有改變，其他沒有影響。結果表明采用的檢測條件適用于不同型號的非極性氣相柱。出于價格因素，推薦首選OV-101毛細管色譜柱。

[1]Hutson TE,Vukelja S,Atienza D,et al.PhaseⅠstudy of a 3-drug regimen of gemcitabine/cisplatin/pemetrexed in patients with metastatic transitional cell carcinoma of the urothelium[J].Investigational New Drugs,2008,26(2):151-158.

[2]Robert D,Hailun L,Matthew M,et al.Phase 2 trial of pemetrexed disodium and gemcitabine in advanced urothelial cancer[J].Cancer,2008,112(15):2671-2675.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].二部.北京:化學工業出版社,2005:附錄Ⅷ P.

[4]Liu DH,Zhang CY,Mao ZM.Determination of Residual Organic Solvents in Tiotropium Bromide by GC[J].Chinese Journal of Pharmaceuticals,2009,40(3):207-208.

[5]周岐勛,李健和,徐幸民.高效液相色譜法測定鹽酸甲氯芬酯分散片含量及有關物質[J].中國當代醫藥,2009,16(4):73-76.

[6]關強,王云龍,杜遵義.高效液相色譜法測定延胡索藥材中延胡索乙素的含量[J].中國當代醫藥,2009,16(4):78-79.