HPLC法測(cè)定木豆葉中牡荊苷的含量

廣州市藥品檢驗(yàn)所三分所（510700）肖佳尚

木豆葉為豆科植物木豆Cajanus cajan(L.)Millsp.的干燥葉，具有清熱解毒、消腫止痛功效，用于小兒水痘、癰腫瘡癤[1]。木豆葉主要含以牡荊苷為主的黃酮類等有效成分[2]。本試驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定木豆葉中牡荊苷的含量，以控制其藥材的質(zhì)量，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（HP1050），紫外檢測(cè)器；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純；牡荊苷對(duì)照品（購(gòu)自Zigma公司，經(jīng)面積歸一化法處理含量為92.6%）；木豆葉藥材購(gòu)自廣州致信藥業(yè)中藥飲片廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Nucleodur C18Gravity（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相采用梯度洗脫：0min時(shí)甲醇-1%冰醋酸（30:70）；20min時(shí)甲醇-1%冰醋酸（40:60）；流速：1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：339nm；在上述條件下牡荊苷與其他成分分離度良好。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取牡荊苷對(duì)照品2.92mg，置100ml量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度。

2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取上述對(duì)照品溶液4、8、12、16、20μl注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定，測(cè)定結(jié)果以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y＝2404.628X－44.552，r=0.9999，線性范圍為0.108～0.541μg。

2.4 供試品溶液的制備 取本品粉末2.5g，精密稱定，精密加入50%甲醇25ml，超聲處理30 min，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.5 精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，峰面積積分值的RSD為0.52%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 對(duì)同一供試品溶液每隔2h測(cè)定一次，結(jié)果牡荊苷在12h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同批樣品5份，按含量測(cè)定項(xiàng)平行試驗(yàn)，測(cè)得樣品中牡荊苷的含量平均為0.315mg/g，RSD為2.74%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品約1.25g，精密加入牡荊苷對(duì)照品溶液（0.0792mg/ml）5ml，按供試品溶液的制備及樣品測(cè)定項(xiàng)操作，結(jié)果見(jiàn)附表1。

2.9 樣品測(cè)定 精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)附表2。

附表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

附表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(mg/g，n=2)

3 討論

牡荊苷的50%甲醇液經(jīng)紫外掃描在268nm和339nm波長(zhǎng)處有最大吸收，339nm波長(zhǎng)的響應(yīng)值大于268nm，故選擇339nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。試驗(yàn)用甲醇和50%甲醇超聲提取效果好。經(jīng)超聲處理20、30、40、50min試驗(yàn)，結(jié)果超聲30min即可提取完全，提取時(shí)間選擇30min。經(jīng)試驗(yàn)，采用本文的梯度洗脫可將牡荊苷與其他黃酮類成分較好地分離。