β-纖維蛋白原-448G/A 基因多態性與腦梗死的關系

廖遠高 胡海冰 楊期明

纖維蛋白原(Fibrinogen, Fg)在凝血、止血過程中起到重要的作用,近些年的研究結果表明高水平的Fg 是動脈血栓性疾病的獨立危險因子[1,2]。Fg 是由各兩條α、β、γ多肽鏈構成的對稱二聚體,這些多肽鏈分別由纖維蛋白原α鏈基因、纖維蛋白原β 鏈基因和纖維蛋白原γ鏈基因三個基因編碼,對于β-纖維蛋白原-448G/A 基因突變能否引起血漿Fg 水平的改變,能否導致腦梗死已經有學者進行了研究,但是數量不多且結果不一。

1 資料與方法

1.1 研究對象

腦梗死組(Cerebral infarction, CI)病例為2009年6 月～2009 年12 月在郴州市第一人民醫院神經內科住院患者,共81 例,其中男53 例,女28 例,平均年齡(57.99±10.56)歲,所有腦梗死病例均符合全國第四屆腦血管病會議的診斷標準, 并經頭部CT 或MRI 證實,而且入組時的病程小于7 d,同時該組病例排除有潛在的心源性栓子、嚴重肝腎功能不全、風濕免疫性疾病、腫瘤、近期感染及慢性炎癥患者。對照組(Control, Con)為同期健康體檢者,共76 例,其中男42 例,女34 例,平均年齡(54.70±11.37)歲,該組病例既往無血栓性疾病史,入組前1個月內無外傷、感染及藥物使用等,且C T 或MRI證實無顱內血栓性疾病。兩組病例性別、年齡基本匹配(P＞0.05)。

1.2 血漿Fg 濃度和生化指標的測定

清晨空腹抽取靜脈血3 ml 在郴州市第一人民醫院化驗室由CA-1500 全自動血凝儀分析完成。

1.3 β-纖維蛋白原-448G/A 基因多態性檢測

清晨空腹抽取靜脈血1 ml, 0.5 M EDTA 0.3 ml 抗凝,搖勻放入4 ℃冰箱備用,應用上海生工生物工程技術服務有限公司生產的UNIQ-10 柱式小劑量血液基因組抽提試劑盒抽提全血基因組DNA。

配制2%瓊脂糖凝膠, 取擴增產物5 μl 及Marker 進行電泳,設定電壓150 V,電流120 mA,時間40 min,在紫外燈光下觀察可見擴增片段大小為148 bp。

在0.5 ml EP 管中加限制性內切酶和擴增產物進行37 ℃12 h 的酶切反應。配制2%瓊脂糖凝膠,取酶切產物進行點用分析,設電壓150 V,電流120 mA,時間60 min,電泳后紫外燈光下觀察酶切結果,呈三種基因型,純合突變型A/A,為148 bp 條帶,雜合突變型G/A,包括30 bp、118 bp 和148 bp三個條帶,野生型G/G,包括30 bp 和118 bp 兩個條帶。

1.4 統計學處理

2 結 果

2.1 腦梗死組和對照組生化指標的比較

腦梗死組的甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL)水平高于對照組,差異有統計學意義(P＜0.05),兩組的谷丙轉氨酶(A LT)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、空腹血糖(fBS)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)水平差異無統計學意義(P＞0.05)(表1)。

2.2 腦梗死組與對照組血漿纖維蛋白原水平的比較

表1 腦梗死組和對照組生化指標的比較(±s)

表1 腦梗死組和對照組生化指標的比較(±s)

生化指標 腦梗死組 對照組 t P ALT(μ/L) 43.49±38.60 34.39±26.29 1.736 ＞0.05 BUN(mmol/L) 7.06±3.05 6.62±2.07 1.063 ＞0.05 Cr(μmol/L) 108.29±32.13 105.30±40.30 0.512 ＞0.05 fBS(mmol/ L) 5.48±1.46 5.13±0.87 1.838 ＞0.05 TG(mm ol/L) 1.26±0.70 1.13±0.52 1.326 ＞0.05 TC(mmol/ L) 4.62±1.02 4.29±0.76 2.308 ＜0.05 HDL-C(mmol/L) 1.12±0.31 1.17±0.26 -1.097 ＞0.05 LDL-C(mmol/ L) 2.52±0.59 2.23±0.52 3.272 ＜0.05

經Levene 檢驗,F=0.351,P=0.554,認為兩組方差齊性,經獨立樣本的t檢驗,得t=-3.473,P＜0.01,認為兩組血漿纖維蛋白原水平均值差異有統計學意義(表2)。

表2 2 組血漿纖維蛋白原水平的比較(±s)

表2 2 組血漿纖維蛋白原水平的比較(±s)

注:與對照組比較,t=-3.478, *P ＜0.01

組別 纖維蛋白原(g/ L)腦梗死組 4.435 1±0.995 59*對照組 3.866 7±1.051 73

2.3 β-纖維蛋白原-448G/A 基因型及A 等位基因分布

根據FGB-448G/A 基因頻率,按Hardy-Weinberg 平衡定律對研究總人群進行了平衡檢驗(P＞0.05),說明本研究總人群基因頻率能代表群體的基因分布。腦梗死組A/A 基因型及A 等位基因頻率均低于對照組,但差異均無統計學意義(P＞0.05)(表3)。

表3 β-纖維蛋白原-448G/A 基因型分布與各等位基因頻率的比較(例, %)

3 討 論

Spada RS 等研究認為血漿Fg 增高是缺血性心腦血管疾病發生和發展的一個獨立危險因素[4],Bots 等在歐洲的一項腦卒中發病率與危險因素病例對照研究中發現腦卒中的發病率隨著血漿Fg 水平的升高而增加[5]。Napolin 等發現腦梗死患者血漿Fg 增高與腦卒中神經功能缺損評分量表的卒中嚴重程度及腦梗死的復發相關[6]。本研究發現腦硬死患者血漿Fg 濃度明顯高于對照組,差異有統計學意義,與國內外研究結果一致,進一步表明血漿Fg 濃度增高是腦梗死發生的危險因素之一。Velcheva 等的研究表明高血漿Fg 濃度可增加血粘度,并導致血壓升高,并間接激活凝血因子[7],這可能是高濃度Fg 增加腦梗死的原因。

Fg 是由兩組完全對稱的分子構成,每一組分子包含3 條多肽鏈,其核心鏈纖維蛋白原β 鏈的mRNA 的合成被認為是整個分子合成的限速步驟[8]。其編碼基因有10 余個突變位點,β-448G/A 為主要突變之一。Zhai 等研究發現A-455 基因突變可能是肺動脈栓塞癥發病的危險因素[9]。Yuan 等研究了FGB 基因的多個位點突變,發現僅Bcl-1 G/A 突變與腦梗死有關[10]。但是到目前為止有關FGB-448G/A 基因多態性與腦梗死的相關性研究仍然沒有明確的結論。

本研究發現β-纖維蛋白原-448G/A 基因多態性有三種基因型:野生突變型(G/G)、雜合突變型(G/A)和純合突變型(A/A)。腦梗死組的G/G 型、G/A 型、A/A 型的頻 率分別為60%、38%、2%,暴露于已突變A 等位基因的頻率為20.4%;與對照組的差異無統計學意義,表明FGB 基因在448 位點發生的突變與腦梗死沒有明顯關系。推測其原因,可能β-纖維蛋白原G448A 突變是與多種其他原因協同作用影響腦梗死發生的,故而更大樣本、更多基因位點的研究成為必要。

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3 傅 毅,魏 新,倪培華,等.缺血性腦卒中與血漿纖維蛋白原的相關性分析.中華內科雜志,2005,44(12):914-917.

4 Spada RS, Toscano G, Chiaren AZAS, et al.Ischemic stroke and fib-rinogen in the elderly.Arch Gemntol Gefiatr Suppl, 2004, 2(9):403-406.

5 Bots ML, E lw ood PC, Salonen JT, et al.Level of fibrinogen and risk of fatal and non-fatal stroke.E UROSTROKE:a collaborative study among research centres in Europe.Journal of Epidemiology and Community H ealth, 2002, 56(Suppl 1):114-118.

6 Di Napolin, Papa F, Bocol V.Prognostic influence of increased greactive prote in and fibrinogen level in ischemic stroke.Stroke,2001, 32(1):133-136.

7 Irena Velcheva, Nadia Antonova, E katerina Titianova, et al.H emotheologieal paraeters in correlation w ith the risk factors for earotid atheroselerosis.Clinical H emotheology and Mieroeireulation, 2006, 35(1-2):195-198.

8 Roy SN, Mukhopadhy ay G.Regulation of fibrinogen assembly:transfection of H ep G2 cells w ith B beta Cdna specifically enhances synthesis of the three component chains of fibrinogen.J Bio Chem, 1990, 265(11):6389-6393.

9 Zhai ZG, Wang C, Yang YH, et al.Study on the relationship between polymorphisms of susceptible genes in coagulation pathw ay related to pulmonary thromboembolism in C hinese Han population.Zhonghua Liu Xing Bing Xue Za Zhi JT, 2006, 27(2):165-169.

10 Yuan XD, Wang SJ, Xu YR, et al.Relationship betw een m ultilocus fibrinogen polymorphisms and fibrinogen concentration,molecular reactivity and cerebral infarction.Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi, 2009, 30(9):582-587.