清胰湯對急性壞死性胰腺炎大鼠腸黏膜機械屏障的保護作用

張興文 王湘英 肖彥 盧義展 李想

清胰湯對急性壞死性胰腺炎大鼠腸黏膜機械屏障的保護作用

張興文 王湘英 肖彥 盧義展 李想

重癥急性胰腺炎(SAP)發病機制除了胰酶激活學說，還有細菌及內毒素易位學說，其與腸屏障有關。針對SAP時如何保護腸黏膜屏障，減少腸道細菌易位和減輕內毒素血癥成為近年來研究的熱點[1-3]。清胰湯是中藥治療SAP的經典方之一，本試驗觀察清胰湯對大鼠急性壞死性胰腺炎(ANP)時小腸病理組織學和超微結構變化的影響，探討其保護腸黏膜屏障的機制。

一、材料和方法

1．動物分組：健康SD大鼠44只，雌雄不分，體重260～300 g，由湖南農業大學動物實驗中心提供。隨機(抽簽法)分為假手術組(12只)、ANP組(16只)、清胰湯組(16只)。采用胰被膜下注射5%牛磺膽酸鈉0.1 ml/100 g體重制備ANP模型。清胰湯組在制模后即刻及12 h后清胰湯灌胃各1 ml/100 g體重。清胰湯由柴胡15 g、黃芩10 g、黃連10 g、白芍15 g、木香10 g、生大黃15 g(后下)、芒硝10 g(沖)組成，制備成1∶1的成藥制劑85 ml,分裝后置4℃保存備用。假手術組僅翻動胰腺及十二指腸。ANP組和假手術組大鼠等容積生理鹽水灌胃。

2．觀察指標：制模后24 h取距回盲部約5 cm處的小腸，行常規病理檢查，按Chiu等[4]的6級評分標準評分(表1)；取4只假手術組大鼠，6只ANP組大鼠及6只清胰湯組大鼠距回盲部約6 cm處小腸組織，電鏡觀察小腸黏膜超微結構的改變。

二、結果

1．小腸組織學改變： ANP組大鼠腸黏膜絨毛水腫,有黏膜上皮細胞脫落,部分出現潰瘍,固有層出血，上皮下間隙增寬，較多炎性細胞浸潤，且逐漸向腸壁外層擴散(圖1a)；清胰湯組大鼠腸黏膜絨毛輕度水腫,少量黏膜上皮細胞脫落,絨毛受損較輕，大部分炎性細胞浸潤僅在固有層(圖1b)；假手術組大鼠小腸黏膜基本完整，輕度毛細血管淤血和極少量炎性細胞浸潤(圖1c)。ANP組、清胰湯組和假手術組大鼠小腸組織損傷評分分別為8.50±2.25、6.38±1.67和1.92±1.08，ANP組明顯高于假手術組(P<0.01)，清胰湯組明顯低于ANP組(P<0.01)，但仍高于假手術組(P<0.01)。

2．小腸超微結構改變：ANP組小腸黏膜上皮大量微絨毛脫落、斷裂、排列不整齊，細胞間連接松弛, 細胞界限不清，線粒體腫脹明顯，部分嵴溶解消失，較大空泡形成，細胞核內異染色質邊集、腫脹或核固縮，存在較多細胞壞死、凋亡(圖2a)；清胰湯組大部分大鼠小腸絨毛排列欠整齊,倒塌，腸黏膜上皮細胞間緊密連接結構模糊，線粒體稍腫脹，部分嵴斷裂，有細胞核染色質集聚于核膜周邊，部分細胞核固縮，以細胞凋亡為主，少數為細胞壞死(圖2b)；假手術組小腸絨毛完整，排列整齊,表面光滑，上皮細胞間的緊密連接完整(圖2c)。

表1 Chiu′小腸組織損傷評價標準

圖1ANP組(a)、清胰湯組(b)和假手術組(c)大鼠小腸組織病理學改變(HE ×100)

圖2ANP組(a)、清胰湯組(b)和假手術組(c)大鼠小腸黏膜上皮細胞超微結構改變(×5000)

討論腸屏障[5]是指腸道能防止腸腔內的有害物質如細菌和毒素穿過腸黏膜進入體內其他組織器官和血液循環的結構和功能的總和。腸屏障由腸機械屏障、微生物屏障、免疫屏障以及化學屏障等共同構成。機械屏障是指腸黏膜上皮細胞層的完整性及上皮細胞間的緊密連接,是保持腸屏障功能的主要因素。本實驗結果顯示，ANP組大鼠小腸病理學評分較假手術組大鼠明顯升高(P<0.01)，提示ANP大鼠存在嚴重的腸黏膜損傷，機械屏障受到嚴重破壞。清胰湯干預后大鼠小腸組織病理學評分較ANP組顯著降低，但仍較假手術組大鼠明顯升高，提示清胰湯在一定程度改善了ANP大鼠小腸黏膜組織損傷程度，保護了ANP大鼠的腸機械屏障，但不能完全阻斷ANP對腸機械屏障的損傷。電鏡超微結構顯示假手術組小腸機械屏障是完整的，但ANP組大鼠小腸黏膜上皮細胞間連接、細胞界限、微絨毛受損較假手術組嚴重，細胞壞死、凋亡均較多；清胰湯組大鼠腸黏膜細胞學變化較假ANP組減輕，細胞主要表現為凋亡。一般認為，細胞壞死是在種種不利因素的影響下，由于細胞的正常代謝活動受損或中斷引起的細胞損傷和病理性的死亡，而凋亡是一種利他性、生理性細胞死亡，即局部、個別的死亡有利于整體或種群的存活。腸黏膜超微結構的變化也說明清胰湯對ANP大鼠腸黏膜機械屏障有保護作用。清胰湯是治療SAP患者的經典方劑，已在臨床廣泛應用[5-7]。清胰湯具有“清熱解毒、疏肝理氣、活血化瘀和通里攻下”的功效。清胰湯改善ANP大鼠腸機械屏障的作用可能與以下因素有關：(1)清胰湯“通里攻下”功效可刺激腸蠕動，排除積糞，具有減少腸道中細菌含量的“去污”效應，并減少腸腔脹氣。(2)清胰湯“清熱解毒”功效可抑制細菌的繁殖，保持腸道菌群的微生態平衡，減少內毒素、細菌吸收入血，具有降低機體中的細菌、內毒素水平，減少機體內各種炎性因子產生、激活、釋放等作用。(3)清胰湯“活血化瘀”的功效可改善腸黏膜的血流灌注，緩解其缺血、缺氧狀態，有利于腸黏膜損傷的修復。當然清胰湯對腸黏膜機械屏障保護是通過多途徑、多靶點發揮作用，更多機制有待進一步去揭示。

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[5] 陳水茹,高麗云,王國美．清胰湯治療重癥急性胰腺炎并發胃腸麻痹的臨床觀察.現代中西醫結合雜志,2007,16：576-578．

[6] 魏睦新，李建軍，汪幼學，等．急性胰腺炎大鼠清胰湯治療的腸動力作用機制．世界華人消化雜志，2004,12：1369-1372.

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2009-10-09)

(本文編輯：屠振興)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.04.024

湖南省科學技術廳課題資金資助項目(2008FJ3059)

410005 長沙，湖南省人民醫院急診科(張興文、李想)，肝膽胰外科(王湘英、肖彥、盧義展)