用高效液相色譜法測定食品中脫氫乙酸

文/徐 紅 郭曉霖

脫氫乙酸及其鈉鹽是食品中常用的防腐劑，具有良好的防腐效果。對霉菌和酵母抑制能力強，目前廣泛用于食品加工行業，尤其是糕點、果汁和醬菜。試驗表明，脫氫乙酸對人體健康有一定的影響，有可能導致腎結石等問題。

GB/T5009.121-2003中介紹了用氣相色譜法測定脫氧乙酸的測定方法。該方法在樣品的前處理中，樣品酸化后，用乙醚提取萃取結束后用無水硫酸鈉脫水30分鐘，樣品濃縮后，用丙酮定容。其前處理、凈化、分離過程復雜、繁瑣、冗長，容易造成樣品中測定成分損失，凈化不徹底，且采用試劑毒性大等問題，從而影響測定的安全性和準確度。筆者參照各類文獻資料根據脫氫乙酸在食品中的作用原理，將樣品提取凈化，用高效液相色譜法測其含量，經反復實踐證明是切實可行的。

1.測定方法

1.1 試劑

除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682-2008規定的一級水。

(1)甲醇色譜純。

(2)乙酸銨溶液：0.02mol／L。稱取1.54g乙酸銨，用水溶解、定容至1L。

（3）2%氫氧化鈉溶液。

（4）脫氫乙酸標準儲備液：1mg/mL。準確稱取100mg脫氫乙酸標準品，用2%的氫氧化鈉溶解，用水定容至100mL，配成1mg/mL的標準儲備液，4℃保存。

1.2 儀器

高效液相色譜儀（帶紫外檢測器）。

1.3 分析步驟

（1）樣品處理

準確稱取混合的樣品2.00克～5.00克，置于容量瓶中，加入水10毫升（視樣品狀況，若需沉淀蛋白可加入3毫升22%乙酸鋅和10.6%亞鐵氰化鉀，震蕩，充分沉淀蛋白），用NaoH溶液調PH值至7～8，加水至刻度，超聲提取10分鐘（視樣品狀況，若需脫脂，此時加入正己烷10毫升，重復兩次脫脂）取適量至于離心管中，4000r/min離心10min，取清液經濾膜（0.45um）過濾，用高效液相色譜測定。

（2）高效液相色譜儀參考條件

a、色譜柱：C18柱，5μm， 4.6mmх250mm或相當者。

b、流動相：甲醇：0.02mol/L乙酸銨溶液（10：90）。

c、流速：1ml／min。

d、進樣量：10μl。

e、柱溫：40℃。

f、檢測器：紫外檢測器、293nm波長， 根據保留時間定性外標峰面積定量。

（3）結果計算

X:樣品中脫氫乙酸的含量g／kg。

A:進樣體積中脫氫乙酸的含量mg。

V:樣品稀釋液總體積ml。

V1:進樣體積ml。

M: 樣品質量g。

2.結果與討論

按照以上測定方法對六組果汁進行加標回收實驗見下表：

加標回收率在90.00%～101.1%，平均回收率為95.3%。

實驗證明采用該方法測定食品中脫氫乙酸，樣品前處理采用水萃取，沉淀蛋白等簡單凈化技術，且采用高效液相反相，整個實驗操作相對簡單且準確度高，效率高，此法切實可行。