葡萄中克菌丹殘留量的氣相色譜測定法

摘要：研究了葡萄中克菌丹殘留分析方法，即用丙酮：乙酸乙酯(體積比1：1)高速勻漿提??；提取物用弗羅里硅凈化，用帶ECD檢測器的氣相色譜儀進(jìn)行測定?？司さ淖畹蜋z出量為0.5×10^-12g，在植株、土壤和籽粒中的最低檢出濃度為0.01mg／kg，平均回收率在94.0％～95.3％之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.6％～7.3％，符合殘留分析要求。

關(guān)鍵詞：克菌丹殘留；葡萄；氣相色譜

中圖分類號：0657.7⁺1 文獻(xiàn)標(biāo)識號：A 文章編號：1001-4942(2010)07-0094-03

克菌丹為廣譜治療和保護(hù)性三氯甲硫基類殺菌劑，是苯二甲酰亞胺的衍生物，可防治蘋果、梨、葡萄、草莓等作物的多種病害，防治效果好、藥害小，其主要作用機(jī)理是阻斷病原真菌呼吸過程。國內(nèi)對蘋果和蔬菜中克菌丹殘留檢測方法研究較多。周欣等在2009年對葡萄中克菌丹殘留的檢測方法進(jìn)行了研究，采用分散液相微萃取的方法對樣品進(jìn)行提取，與本試驗(yàn)所采取的提取和凈化方法有較大差別。本試驗(yàn)根據(jù)農(nóng)藥殘留量實(shí)用檢測方法手冊，建立了一種快速、準(zhǔn)確、靈敏度高的氣相色譜方法，簡單易行，便于批量樣品的處理。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：Agilent 6890N，配ECD檢測器、自動進(jìn)樣器，美國安捷倫(Agilent)公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：Laborota 4000，德國海道爾夫公司；高速勻漿機(jī)：T25 Basic，德國IKA WORK INC；組織搗碎機(jī)：Combimax 600，德國博朗。

丙酮、乙酸乙酯、甲苯、石油醚、無水硫酸鈉、氯化鈉等為分析純；弗羅里硅土：層析用，100～200目，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氧化鋁：層析用，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；克菌丹標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥99.1％，德國Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 樣品前處理

1.2.1樣品制備 葡萄用組織搗碎機(jī)搗碎備用。

1.2.2 提取 稱取樣品25g，加入丙酮：乙酸乙酯(1：1)溶液100ml，高速勻漿1min，轉(zhuǎn)移到加有10g氯化鈉的具塞量筒中，搖勻，靜置30min后，準(zhǔn)確移取50ml上層浸提液，于35℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上減壓濃縮至近干，加入甲苯：丙酮(9：1)5ml，待凈化。

1.2.3 凈化 玻璃層析柱(柱內(nèi)徑1cm，長25cm)，自下而上依次填裝少許脫脂棉，1cm厚無水硫酸鈉，3g弗羅里硅土，2cm厚無水硫酸鈉。經(jīng)50ml石油醚預(yù)淋后，倒入待凈化液，再用60ml甲苯：丙酮(9：1)淋洗，收集淋洗液，濃縮，用甲苯：丙酮(9：1)定容至5ml，待測。

1.3 氣相色譜條件

色譜柱BPX608(25m×0.32mm×0.25m)；柱溫：180℃保持2min，20℃／min升至225℃，保持10min，40℃／min升至270℃，保持2min；進(jìn)樣口溫度280℃；檢測器溫度330℃；柱前壓：82.8kPa；進(jìn)樣量：5ml；分流進(jìn)樣；分流比：10：1；載氣：氮?dú)狻?/p>

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢測限

克菌丹在上述儀器條件下色譜圖見圖1。準(zhǔn)確稱取克菌丹標(biāo)準(zhǔn)品，用丙酮做溶劑配制系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程為：

Y=479341X－19009.r=0.9998

克菌丹的最低檢出量為0.5×10^-12g，最低檢出濃度為0.01mg／kg，相對保留時(shí)間為10.3min。

2.2 準(zhǔn)確度

在葡萄樣本中，分別選擇0.01、0.10、1.00mg／kg 3個(gè)克菌丹添加濃度進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)添加濃度進(jìn)行5次平行測定。結(jié)果顯示：樣品中克菌丹平均回收率在94.0％～95.3％之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.6％～7.3％之間，均在農(nóng)藥殘留檢測允許的范圍內(nèi)(見表1)。

2.3 精密度

2.3.1 日內(nèi)測定 同一操作者使用相同的前處理方法和設(shè)備，在短時(shí)間內(nèi)對相同葡萄樣本中的克菌丹含量進(jìn)行11次重復(fù)測定，樣本中添加濃度為0.1mg／kg。測定結(jié)果為0.099、0.098、0.110、0.098、0.097、0.100、0.100、0.098、0.100、0.096、0.099mg／kg，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.7％。

2.3.2 日間測定 同一操作者使用相同的前處理方法和設(shè)備，在不同時(shí)間內(nèi)對相同葡萄樣本中的克菌丹含量進(jìn)行5次重復(fù)測定，樣本中添加濃度為0.1mg／kg。測定結(jié)果為0.099、0.100、0.096、0.096、0.098mg／kg，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8％。

3 結(jié)論

本方法采用丙酮：乙酸乙酯(體積比1：1)對葡萄中的克菌丹高速勻漿提??；提取物用弗羅里硅土凈化；用帶ECD檢測器的氣相色譜儀進(jìn)行測定。對葡萄樣品進(jìn)行了3種添加濃度的回收率實(shí)驗(yàn)，添加濃度在0.01～1.00mg／kg范圍內(nèi)，平均回收率94.0％～95.3％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.6％～7.3％，均在農(nóng)藥殘留測定所允許的范圍內(nèi)?？司さ淖畹蜋z出量為0.5×10^-12g，在葡萄中的最低檢出濃度為0.01mg／kg，適合測定葡萄中不同濃度水平的克菌丹殘留。通過對樣品中克菌丹的日內(nèi)測定和日間測定，說明本方法具有較好的精密度。本方法對設(shè)備、試劑等條件要求低，操作簡單、快速，定量準(zhǔn)確，可有效地測定葡萄中克菌丹含量。