葡萄中克菌丹殘留量的氣相色譜測定法

摘要：研究了葡萄中克菌丹殘留分析方法，即用丙酮：乙酸乙酯(體積比1：1)高速勻漿提取；提取物用弗羅里硅凈化，用帶ECD檢測器的氣相色譜儀進行測定。克菌丹的最低檢出量為0.5×10^-12g，在植株、土壤和籽粒中的最低檢出濃度為0.01mg／kg，平均回收率在94.0％～95.3％之間，相對標準偏差為2.6％～7.3％，符合殘留分析要求。

關鍵詞：克菌丹殘留；葡萄；氣相色譜

中圖分類號：0657.7⁺1 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942(2010)07-0094-03

克菌丹為廣譜治療和保護性三氯甲硫基類殺菌劑，是苯二甲酰亞胺的衍生物，可防治蘋果、梨、葡萄、草莓等作物的多種病害，防治效果好、藥害小，其主要作用機理是阻斷病原真菌呼吸過程。國內對蘋果和蔬菜中克菌丹殘留檢測方法研究較多。周欣等在2009年對葡萄中克菌丹殘留的檢測方法進行了研究，采用分散液相微萃取的方法對樣品進行提取，與本試驗所采取的提取和凈化方法有較大差別。本試驗根據農藥殘留量實用檢測方法手冊，建立了一種快速、準確、靈敏度高的氣相色譜方法，簡單易行，便于批量樣品的處理。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：Agilent 6890N，配ECD檢測器、自動進樣器，美國安捷倫(Agilent)公司；旋轉蒸發器：Laborota 4000，德國海道爾夫公司；高速勻漿機：T25 Basic，德國IKA WORK INC；組織搗碎機：Combimax 600，德國博朗。

丙酮、乙酸乙酯、甲苯、石油醚、無水硫酸鈉、氯化鈉等為分析純；弗羅里硅土：層析用，100～200目，國藥集團化學試劑有限公司；氧化鋁：層析用，國藥集團化學試劑有限公司；克菌丹標準品，純度≥99.1％，德國Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 樣品前處理

1.2.1樣品制備 葡萄用組織搗碎機搗碎備用。

1.2.2 提取 稱取樣品25g，加入丙酮：乙酸乙酯(1：1)溶液100ml，高速勻漿1min，轉移到加有10g氯化鈉的具塞量筒中，搖勻，靜置30min后，準確移取50ml上層浸提液，于35℃旋轉蒸發器上減壓濃縮至近干，加入甲苯：丙酮(9：1)5ml，待凈化。

1.2.3 凈化 玻璃層析柱(柱內徑1cm，長25cm)，自下而上依次填裝少許脫脂棉，1cm厚無水硫酸鈉，3g弗羅里硅土，2cm厚無水硫酸鈉。經50ml石油醚預淋后，倒入待凈化液，再用60ml甲苯：丙酮(9：1)淋洗，收集淋洗液，濃縮，用甲苯：丙酮(9：1)定容至5ml，待測。

1.3 氣相色譜條件

色譜柱BPX608(25m×0.32mm×0.25m)；柱溫：180℃保持2min，20℃／min升至225℃，保持10min，40℃／min升至270℃，保持2min；進樣口溫度280℃；檢測器溫度330℃；柱前壓：82.8kPa；進樣量：5ml；分流進樣；分流比：10：1；載氣：氮氣。

2 結果與分析

2.1 標準曲線和檢測限

克菌丹在上述儀器條件下色譜圖見圖1。準確稱取克菌丹標準品，用丙酮做溶劑配制系列濃度的標準溶液，以峰面積為縱坐標，質量濃度為橫坐標做標準曲線。標準曲線的方程為：

Y=479341X－19009.r=0.9998

克菌丹的最低檢出量為0.5×10^-12g，最低檢出濃度為0.01mg／kg，相對保留時間為10.3min。

2.2 準確度

在葡萄樣本中，分別選擇0.01、0.10、1.00mg／kg 3個克菌丹添加濃度進行回收率實驗，每個添加濃度進行5次平行測定。結果顯示：樣品中克菌丹平均回收率在94.0％～95.3％之間，相對標準偏差在2.6％～7.3％之間，均在農藥殘留檢測允許的范圍內(見表1)。

2.3 精密度

2.3.1 日內測定 同一操作者使用相同的前處理方法和設備，在短時間內對相同葡萄樣本中的克菌丹含量進行11次重復測定，樣本中添加濃度為0.1mg／kg。測定結果為0.099、0.098、0.110、0.098、0.097、0.100、0.100、0.098、0.100、0.096、0.099mg／kg，相對標準偏差為3.7％。

2.3.2 日間測定 同一操作者使用相同的前處理方法和設備，在不同時間內對相同葡萄樣本中的克菌丹含量進行5次重復測定，樣本中添加濃度為0.1mg／kg。測定結果為0.099、0.100、0.096、0.096、0.098mg／kg，相對標準偏差為1.8％。

3 結論

本方法采用丙酮：乙酸乙酯(體積比1：1)對葡萄中的克菌丹高速勻漿提取；提取物用弗羅里硅土凈化；用帶ECD檢測器的氣相色譜儀進行測定。對葡萄樣品進行了3種添加濃度的回收率實驗，添加濃度在0.01～1.00mg／kg范圍內，平均回收率94.0％～95.3％，相對標準偏差為2.6％～7.3％，均在農藥殘留測定所允許的范圍內。克菌丹的最低檢出量為0.5×10^-12g，在葡萄中的最低檢出濃度為0.01mg／kg，適合測定葡萄中不同濃度水平的克菌丹殘留。通過對樣品中克菌丹的日內測定和日間測定，說明本方法具有較好的精密度。本方法對設備、試劑等條件要求低，操作簡單、快速，定量準確，可有效地測定葡萄中克菌丹含量。