研究新疆哈薩克傳統(tǒng)藥柯孜木克顆粒對(duì)尿路感染的影響

【摘要】目的:研究柯孜木克顆粒的體內(nèi)外抗菌作用。方法:采用試管連續(xù)稀釋法和K-B法，通過(guò)測(cè)定最小抑菌濃度(MIC)，最小殺菌濃度(MBC)和抑菌圈直徑來(lái)觀察其體外抑菌效果，建立尿路感染動(dòng)物模型，觀察其體內(nèi)抗菌效果。結(jié)果:柯孜木克顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，變形桿菌，福氏痢疾桿菌在體外有較強(qiáng)的抑菌作用，對(duì)金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，變形桿菌，福氏痢疾桿菌在體外有殺菌作用，對(duì)金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，變形桿菌有抑菌圈，但對(duì)綠膿桿菌無(wú)效。對(duì)尿路感染有明顯的抑制作用，與對(duì)照組比較，有顯著性差異。結(jié)論:柯孜木克顆粒在體內(nèi)外都有較強(qiáng)的抑菌和殺菌作用。

【關(guān)鍵詞】柯孜木克顆粒;最小抑菌濃度;尿路感染

【中圖分類(lèi)號(hào)】R29【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1007-8517(2010)18-126-2

尿路感染是多種微生物在機(jī)體內(nèi)尿中生長(zhǎng)繁殖，并侵犯尿路粘膜或組織所引起的感染。根據(jù)國(guó)內(nèi)統(tǒng)計(jì)，尿路感染占泌尿系統(tǒng)疾病首位，約42.9%[1]。在致病菌的作用下，尿路內(nèi)大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥，病情反復(fù)，纏綿難愈，且大量抗生素的應(yīng)用往往效果不佳，其副作用亦給患者帶來(lái)了極大痛苦。

柯孜木克顆粒是新疆哈薩克民族傳統(tǒng)醫(yī)藥研究的驗(yàn)方，組方為黑果越菊、沙生蠟菊、木賊等藥材。據(jù)哈薩克醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)記載及哈醫(yī)臨床研究結(jié)果證實(shí):柯孜木克顆粒可用于尿道感染、膀胱炎、腎盂腎炎和腎病綜合癥、前列腺肥大、小便不暢等，也可用作全身強(qiáng)壯劑。我們的前期研究證明本方具有較好的抗炎、提高機(jī)體的免疫力、增加尿量等作用。在此基礎(chǔ)上我們進(jìn)一步研究了其體內(nèi)外抗菌作用，研究報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠60只，雌雄各半，體重170～

190g，由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科提供，許可證號(hào):SCXK(新)2003-OOO1。

1.1.2菌種金黃色葡萄球菌、(ATCC 25923)，大腸桿菌、(ATCC 25922)，變形桿菌、(ATCC 25921)，綠膿桿菌、(ATCC 27853)，福氏痢疾桿菌、(ATCC 51573)，購(gòu)自中國(guó)北京藥品生物制品檢驗(yàn)所。

1.1.3藥品與試劑柯孜木克顆粒(新藥制字Z20050112)由新疆阿勒泰地區(qū)哈醫(yī)醫(yī)院提供。三金片(國(guó)藥準(zhǔn)字Z45021645)是桂林三金藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品。

1.1.4儀器菌種培養(yǎng)基:本院微生物教研室提供。

1.2方法

1.2.1按試管連續(xù)稀釋法進(jìn)行[2]，每排第1管用無(wú)菌肉湯將柯孜木克顆粒作1:4稀釋?zhuān)缓笤賹?duì)倍稀釋?zhuān)抗?ml，每排最后1管加肉湯培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，三金片作為陽(yáng)性對(duì)照，然后在每排試管里各加經(jīng)1:1000稀釋6h培養(yǎng)菌液0.05ml，37℃孵箱內(nèi)培養(yǎng)24h后測(cè)定最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)。

1.2.2采用K-B法，經(jīng)1:1000稀釋6h培養(yǎng)菌液涂布于培養(yǎng)基的表面，柯孜木克顆粒用無(wú)菌蒸餾水作1:4稀釋(250mg/ml)后，用無(wú)菌滴管滴到管碟內(nèi)，陰性對(duì)照組用生理鹽水陽(yáng)性對(duì)照組為三金片，37℃孵箱內(nèi)培養(yǎng)74h，然后觀察對(duì)固體培養(yǎng)基抑菌圈直徑。

1.2.3感染動(dòng)物模型的建立[3]取體重170～190g的60只wistar大鼠，雌雄各半，大鼠禁水觀察12h備用，用1%的戊巴比妥納麻醉，下腹部剪去毛，用碘酊和乙醇分別消毒后，用棉線活扣結(jié)扎尿道口，在下腹部正中切開(kāi)1.5cm切口，用4、5號(hào)小針頭抽取大腸菌液(將復(fù)蘇后菌種再次轉(zhuǎn)種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37℃孵育18h后再用麥?zhǔn)媳葷岱ㄕ{(diào)整濃度為3×106cfu/ml菌液)0.75ml緩慢注入膀胱，縫合切口，6h后松解尿道口棉線，恢復(fù)正常飲食、飲水。假手術(shù)組手術(shù)中不注入大腸桿菌，注入生理鹽水，手術(shù)過(guò)程同上，活扣結(jié)扎尿道口6h后松解，恢復(fù)正常飲食供水。

1.2.4分組及給藥將造模大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，即假手術(shù)組(輔料)、模型組(輔料)、三金片治療組(3.675g/kg)，柯孜木克顆粒高劑量組(1.6g/kg)、中劑量組(0.8g/kg)、低劑量組(0.4g/kg)，造模10d后，用藥組開(kāi)始給藥，用藥組連續(xù)灌胃給藥15d，每日1次。給藥25d后，給予相應(yīng)處理做尿分析，尿培養(yǎng)，大鼠腎臟帶菌剖面百分率測(cè)定等指標(biāo)地檢查。即給藥25d后，切開(kāi)大鼠腹腔用無(wú)菌的真空采血管取尿液，分別作尿液分析和尿培養(yǎng)。尿液分析結(jié)果記錄:白細(xì)胞>+或有膿球者均記為陽(yáng)性，少許或無(wú)白細(xì)胞記為陰性。尿培養(yǎng)結(jié)果記錄:細(xì)菌計(jì)數(shù)>10萬(wàn)記為陽(yáng)性，細(xì)菌計(jì)數(shù)<5千記為陰性。將已處死的大鼠，在無(wú)菌條件下取雙側(cè)腎臟，縱切后將剖面蓋印于平皿瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)18h后，記錄有活菌存在的腎剖面數(shù)，求出各組大鼠腎臟帶菌剖面百分率。

2結(jié)果

2.1體外抗菌活性MIC和MBC的測(cè)定

表1實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，柯孜木克顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度比三金片的最小抑菌濃度大一倍，對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度比三金片的最小抑菌濃度小四倍，對(duì)變形桿菌和福氏痢疾桿菌的最小抑菌濃度與三金片的相等，但是在1000mg/ml濃度以下對(duì)綠膿桿菌沒(méi)有抑菌作用。

表2實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明柯孜木克顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌和變形桿菌的最小殺菌濃度比三金片的最小殺菌濃度大一倍，三金片在1000mg/ml濃度下對(duì)大腸桿菌沒(méi)有殺菌作用，柯孜木克顆粒濃度500mg/ml時(shí)就有殺菌作用，柯孜木克顆粒和三金片對(duì)福氏痢疾桿菌的殺菌濃度一樣1000mg/ml，但是柯孜木克顆粒在1000mg/ml濃度以下對(duì)綠膿桿菌沒(méi)有殺菌作用。

2.2對(duì)固體培養(yǎng)基抑菌圈直徑的影響表3結(jié)果表明，柯孜木克顆粒和陽(yáng)性對(duì)照三金片對(duì)福氏痢疾桿菌，綠膿桿菌沒(méi)有產(chǎn)生抑菌圈，但是柯孜木克顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，變形桿菌產(chǎn)生的抑菌圈直徑比三金片的大。

2.3對(duì)尿路感染大鼠尿液分析的影響

表4結(jié)果表明，柯孜木克顆粒高劑量組、中劑量組，與模型組和三金片組比較，明顯減少尿路感染大鼠尿液中的白細(xì)胞的含量。

(尿液分析結(jié)果記錄:白細(xì)胞>+或有膿球者均記為陽(yáng)性，少許或無(wú)白細(xì)胞記為陰性)

2.4對(duì)尿路感染大鼠尿培養(yǎng)的影響

表5結(jié)果表明，柯孜木克顆粒高劑量組、中劑量組對(duì)泌尿道感染細(xì)菌有明顯的對(duì)抗作用。

(尿培養(yǎng)結(jié)果記錄:細(xì)菌計(jì)數(shù)>10萬(wàn)記為陽(yáng)性，細(xì)菌計(jì)數(shù)<5千記為陰性)

2.5對(duì)尿路感染大鼠腎臟帶菌剖面百分率測(cè)定

由表6結(jié)果表明，柯孜木克顆粒各劑量組小鼠帶菌腎剖面百分率均低于模型組，高、中、低劑量組與腎感染模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

3討論

近年尿路感染作為多發(fā)病癥，眾多醫(yī)者在臨床上亦不斷探求有效的治療法則和方藥，形成了很多新的觀點(diǎn)。抗生素面世大大提高了尿路感染治愈率，改善患者預(yù)后，但尿路感染長(zhǎng)期用抗生素及磺胺類(lèi)藥物治療不但降低人體的免疫力，還易引起菌群失調(diào)。因此探討中醫(yī)藥對(duì)尿路感染的治療有其意義所在，

尿路感染是各種病源菌在尿路繁殖而引起炎癥反應(yīng)。在感染的細(xì)菌中最常見(jiàn)的致病菌是大腸桿菌，占急性感染的80-90%，其次是福氏痢疾桿菌、變異桿菌、克雷白氏桿菌、葡萄球菌等。

柯孜木克顆粒是新疆哈薩克民族傳統(tǒng)醫(yī)藥研究的驗(yàn)方，組方為黑果越菊、沙生蠟菊、木賊等藥材。據(jù)哈薩克醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)記載及哈醫(yī)臨床研究結(jié)果證實(shí):柯孜木克顆粒具有清熱利濕，利氣疏導(dǎo)通淋作用，用于尿道感染，膀胱炎，腎盂腎炎和腎病綜合癥，前列腺肥大，小便不暢等，也可用作全身強(qiáng)壯劑。我們的前期研究證明本方具有較好的抗炎，提高機(jī)體的免疫力和增加尿量等作用。

本研究體外抗菌實(shí)驗(yàn)表明，柯孜木克顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，變形桿菌，福氏痢疾桿菌有較強(qiáng)的抑菌和殺菌作用，但對(duì)綠膿桿菌無(wú)效。對(duì)金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，變形桿菌有抑菌圈，但對(duì)福氏痢疾桿菌和綠膿桿菌沒(méi)有產(chǎn)生抑菌圈。與陽(yáng)性對(duì)照組比較有較好的體外抑菌和殺菌作用。

為研究體內(nèi)抗菌作用，我們制備了大腸桿菌逆行性慢性尿路感染動(dòng)物模型，結(jié)果表明柯孜木克顆粒能清除尿液和腎臟內(nèi)的細(xì)菌，對(duì)慢性尿路感染有對(duì)抗作用。

我們研究結(jié)果表明，柯孜木克顆粒在體內(nèi)外都有較強(qiáng)的抑菌和殺菌作用，是治療尿路感染的理想藥物，但其作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

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