幾種布魯氏菌病診斷方法的比較

摘要:布魯氏菌病的診斷通常采用細菌學和免疫學方法，盡管細菌學方法是最直接的方法，但培養布魯氏菌需要較長時間。隨著免疫學技術的不斷成熟和發展，出現了免疫電泳、補體結合試驗、反向間接血凝、酶聯免疫吸附試驗及放射免疫分析方法等布病的診斷方法，使布魯氏菌病能夠早期診斷。但這些方法也存在假陽性和假陰性等問題。PCR技術提供了其他技術無法比擬的細菌檢測手段，具有敏感、快速、準確的優點。PCR方法為布魯氏菌病的早期診斷開辟了一條新途徑。

關鍵詞:布魯氏菌病;檢測方法;人畜共患病

中圖分類號:S855.1文獻標識碼:B文章編號:1007-273X(2010)11-0032-02

布魯氏菌病(Brucellosis，簡稱布病)又稱地中海弛張熱，馬耳他熱，波浪熱或波狀熱，是由布魯氏菌(Brucella，簡稱布氏菌)侵入機體，引起傳染變態反應的人畜共患傳染病。布魯氏菌感染后主要造成動物生殖系統的損害。在雌性動物中，導致流產，繁殖生育能力下降;在雄性動物中，導致睪丸炎和附睪炎，并常常發展為不育癥。布魯氏菌為兼性細胞內寄生菌，持續性感染是常見的，病原體通過生殖系統和乳腺分泌液排出體外。人是終末宿主，常表現為持續性感染，間歇性流感樣癥狀，稱為“波浪熱”。臨床特點為長期發熱、多汗、關節痛及肝脾腫大等。

我國對布病的研究起步比較晚，20世紀50年代中期才開始對布病進行有計劃有組織地調查研究。我國科技工作者經過幾十年的努力，查清了布病在國內的分布，并且認識到布病在我國不但有，而且相當的嚴重。國內外學者研究了許多診斷方法，用于布病檢測。現將各種診斷方法介紹如下。

1病原學診斷

從可疑病人、病畜、野生動物或其他物品中分離到布氏菌，即可診斷為布病或帶菌。但分離培養要求條件高，菌生長緩慢，增加感染機會，不宜推廣。

2血清學技術

自Wright和Smith建立試管凝集反應后，血清學檢測技術得到快速的發展和改進，包括各種凝集反應、沉淀反應、補體結合反應、試紙試驗、標記抗體技術以及20世紀70年代發展起來的高靈敏度的酶聯免疫吸附試驗等。

2.1凝集反應

(1)平板凝集試驗(PAT)。在20世紀初，PAT是畜間檢疫和人群中流行病學快速初篩的一種簡易的檢測方法。特異性較高，但某些理化因素如pH值、溫度等，都可引起抗原懸液凝集，而出現非特異性反應。

(2)琥紅平板凝集試驗(RBPT)。20世紀70年代，研制出酸性緩沖玻片抗原。它主要特點是活化IgG，具有較高的特異性和敏感性，能去掉血清中非特異性凝集素，結果可靠，方法簡便易行，成本低廉，尤其適用于布病的大面積檢疫及流行病學調查。但不能鑒別人工免疫和自然感染。

(3)試管凝集反應(SAT)。SAT是我國布病診斷的法定正式試驗，檢測IgM敏感性較高，操作簡便，判定容易，具有較高的診斷價值，但不能區分人工免疫和自然感染。

(4)巰基化物處理血清后的凝集試驗。半胱氨酸是含巰基化合物，它含有硫氫基(HS)成分，該化學基團能使大分子IgM抗體雙硫鍵破壞，失去凝集活性。但它不能使小分子的IgG抗體分解，故應用半胱氨酸處理后的血清反應，主要是IgG抗體活性。

(5)乳清法診斷奶牛布病。乳清法診斷奶牛布

病，不僅可檢出臨床性布病牛，而且能檢出慢性和隱性經過布病牛，還可用作鑒別布病的人工免疫和自然感染的手段。

(6)抗球蛋白試驗。抗球蛋白試驗適用于抗體過剩、出現前帶現象者、存在單價抗體而看不到凝集及有不完全抗體者，可用于布病的早期診斷及慢性布病的診斷。

(7)膠體金技術。軍事醫學科學院用免疫膠體金標記布氏桿菌抗原制作免疫膠體金試紙，來檢測病畜血清中的抗體，其特異性達95%以上，且快速靈敏，為布氏桿菌的快速檢測開辟了較美好的前景。

2.2沉淀反應

(1)全乳環狀試驗及瓊脂擴散試驗(GDT)。用已知全乳環狀抗原檢測待檢乳樣中的未知抗體，可作為定性或半定量試驗。

(2)免疫電泳技術。包括免疫電泳、醋酸纖維膜免疫電泳、聚丙烯酰胺免疫電泳、對流免疫電泳、火箭電泳及抗原—抗體交叉免疫電泳等。由于影響因素較多，又需要電泳設備，不便于大面積推廣應用。

(3)補體結合試驗(CFT)。CFT法被OIE認證為布病的確診性試驗。此法被認為是目前血清學試驗中最為準確的技術之一，并得到廣泛應用。但其實驗條件復雜苛刻，不便向基層推廣，不宜在現場進行。

(4)標記抗體技術。包括間接ELISA、競爭性

ELISA、雙抗原夾心酶聯免疫試驗、斑點ELISA、免疫熒光抗體試驗等。標記抗體技術具有良好的特異性，較高的敏感性。因操作步驟繁瑣，不適于大量檢疫。

3討論

(1)目前還沒有一種單一方法能適用于任何情況下的布病檢疫，各種診斷技術也不能相互取代。

(2)細菌學檢測雖然是最直接的檢測方法，但費時、費力，增加了試驗的危險性。不適于推廣應用。

(3)現行的《動物布魯氏菌病診斷技術》(GB/T18646-2002)規定的4種血清學診斷技術中，大規模檢疫時，可以用琥紅平板凝集試驗作篩選。試管凝集試驗可以用于早期診斷。

(4)PCR技術敏感、特異、快速，可做為布病的一個重要診斷工具，具有很廣闊的前景。PCR應用于布氏桿菌種型的鑒定研究、布氏桿菌的種型鑒定，對于判斷預測疫情動態、研究流行特點、探索掌握流行規律以及制定合理有效的防治對策具有重要意義。