黑樹莓莖尖組織培養(yǎng)研究

摘要：取春季黑樹莓的嫩枝條，以莖尖為外植體，Ms為基本培養(yǎng)基，添加植物激素6-BA、NAA、GA3篩選培養(yǎng)基，進行莖尖組織培養(yǎng)研究。試驗結果表明，誘導莖尖萌發(fā)的最佳培養(yǎng)基為Ms+0.5 mg／L 6－BA+O.05 me，／L NAA，萌發(fā)率高達90％；繼代培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為Ms+1.0 me，／L 6一BA+0.02 mg／L NAA+6.0mg/LGA；，繁殖系數(shù)達6.0-7.O；生根最佳培養(yǎng)基為Ms+0.5mg/L6一BA+0.1mg／LNAA，生根率為96％。

關鍵詞：黑樹莓；莖尖；組織培養(yǎng)

中圖分類號：$663.204.3 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942(2010)08-0008-03

樹莓(Rubus／daeus L)又名木莓，屬薔薇科懸鉤子屬，多年生漿果類小灌木植物。樹莓是近年來國內(nèi)外興起的第三代水果之一，具有較高的經(jīng)濟價值。其果實柔軟多汁，色澤宜人，營養(yǎng)豐富且齊全，果實內(nèi)含20多種氨基酸及多種維生素，尤其含有較高的超氧化物酶(sOD)和硒(具有抗癌防癌作用)，市場價值較高。樹莓適應性和抗寒性較強，易栽培，目前國內(nèi)的種植面積約2667hm2，專家預測種植樹莓具有很大的發(fā)展空間。近幾年，出現(xiàn)很多關于樹莓組培方面的報道。本試驗借鑒其它報道，對黑樹莓的組織培養(yǎng)技術進行進一步改良和完善。

1 材料與方法

1.1供試品種 采用“美國黑樹莓l號”，取春季新萌發(fā)的嫩枝條，剪取上端莖尖作為外植體。

1.2試驗方法 莖尖用洗潔精簡單漂洗一下，去除污泥，再在流水下沖洗1－2 h，沖洗后的莖尖進行消毒處理：在無菌工作臺上，先用70％的酒精對莖尖進行30 s的初步消毒，再用1‰的氯化汞進行再次消毒，消毒時間為5－8 min(視材料的老嫩程度而定)，無菌水沖洗5－6遍，剝?nèi)?-3層外圍葉片，接入啟動培養(yǎng)基中進行誘導培養(yǎng)。

1.3培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度為25℃，相對濕度為70％。使用日光燈(2000lx) 作光源，每天的光照時間為16h，黑暗培養(yǎng)8h。

1.4培養(yǎng)基

以MS作基本培養(yǎng)基，瓊脂濃度為6％。蔗糖含量30％0，在不同的培養(yǎng)階段添加不同濃度的植物激素6－BA、NAA、GAs，進行激素配比選擇。

2 結果與分析

2.1不同消毒方法對消毒效果的影響

使用次氯酸鈉和氯化汞兩種消毒劑進行消毒比較。兩種消毒處理之前，先用70％的酒精初步消毒，再用l：4(次氯酸鈉：水)比例的次氯酸鈉分別消毒10、15、20、25、30 min，以及用1％的氯化汞分別消毒3、5、8、lO、15 rain。試驗結果表明，使用次氯酸鈉消毒25 rain、氯化汞消毒5－8 min效果較好。兩種消毒劑之間比較，使用次氯酸鈉消毒不徹底，在后繼培養(yǎng)中出現(xiàn)較多污染；氯化汞在消毒5－8 min后，進行5－6遍無菌水沖洗，效果最好，污染率僅為5％。因此選用1％氯化汞消毒5－8 min作為最佳消毒方法使用。

2.2不同激素配比對莖尖誘導的影響

由表1看出，以MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6－BA和NAA，每個處理接種50個莖尖，比較莖尖在不同激素濃度下的萌發(fā)率。莖尖在MS+0.5 mg／L 6－BA+0.05 mg／LNAA培養(yǎng)基上萌發(fā)出小苗的數(shù)量多，并且長勢良好，萌發(fā)率高達90％，所以該培養(yǎng)基為最佳莖尖誘導培養(yǎng)基。

2.3繼代培養(yǎng)基的篩選

莖尖誘導出小苗后接種到繼代培養(yǎng)基上進行繁殖。在MS培養(yǎng)基上添加不同濃度的6－BA、NAA、GA3進行篩選。試驗結果(表2)顯示，6－BA濃度為O.5 mg／L時，小苗生長緩慢，呈黃綠色，植株矮小，基部基本未分化出小芽；濃度為1.5 mg／L時，小苗底部出現(xiàn)大量半透明愈傷組織，并且小苗長勢弱，顏色成淡綠色，節(jié)間長；只有在濃度為1.O mg／L時，小苗生長健壯，顏色濃綠，底部誘導出大量叢生芽。在6－BA濃度適宜的情況下，NAA和GA3濃度過高或過低均對小苗誘導不利，阻礙其生長。在設計的3個濃度中，0.02mg／LNAA為適宜濃度。培養(yǎng)基中添加GA3與6－BA配合使用，不僅對腋芽的生長和增殖有利，而且可以防止小苗出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。經(jīng)過篩選，MS+1.0 mg／L 6－BA+O.02 mg／L NAA+6.O mg／L GA3培養(yǎng)基組合最適宜小苗進行繼代繁殖，可誘導出大量叢生芽，增殖系數(shù)達到7.O，并且小苗生長健壯，為最佳繼代培養(yǎng)基。

2.4不同濃度6－BA和NAA對根誘導的影響 試驗發(fā)現(xiàn)，在6－BA濃度適宜的情況下，NAA濃度低時，誘導出根的數(shù)量少，根系短；濃度高時，根部出現(xiàn)愈傷組織，根多，但細而脆，成活率不高。由表3可以看出，培養(yǎng)基MS+O.5 mg／L 6－BA+0.1 mg／L NAA最適宜黑樹莓組培苗生根。

3 移栽及馴化

挑選生根好的瓶苗，打開瓶口放置l天，進行移栽前的馴化。移栽時，先取出瓶中的組培苗，在清水中把根部的培養(yǎng)基輕輕洗掉，然后移栽到含有營養(yǎng)土的蛭石中，蛭石和營養(yǎng)土的配比為3：2。移栽后，在育苗盤上方罩一層塑料薄膜，保溫保濕，相對濕度控制在75％左右，溫度控制在25'E，1周后，育苗盤中的小苗緩苗后即可揭掉薄膜。

4 小結

4.1 要想獲得質量好的組培苗，選材很重要，選取春季4—5月份的嫩枝條，取莖尖作外植體，莖尖的潔凈度高，易消毒，優(yōu)于莖段芽作外植體。

4.2生根是最終獲得優(yōu)質組培苗的關鍵一步，合適的激素是誘導生根的重點，生長素NAA和IBA相比較，兩者的有效成分相似，但[BA高溫滅菌后容易降解，降低了有效成分，容易導致試驗不準確，NAA可以隨培養(yǎng)基一起高溫滅菌，使用比較方便。

4.3本試驗結果表明，誘導黑樹莓莖尖萌發(fā)的最佳培養(yǎng)基為MS+O.5 mg／L 6一BA+O.05 mg／LNAA；繼代培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為MS+1.O mg／L6－BA+O.02mg／LNAA+6.Om／LGA3；生根最佳培養(yǎng)基為MS+0.5 mg／L 6一BA+O.1 mg／LNAA。