S100A6在宮頸癌組織中的表達及其意義

[摘要] 目的 研究S100A6基因在不同宮頸病變組織中的表達情況，分析其與宮頸癌淋巴結轉移的關系。方法 應用熒光定量PCR技術定量分析宮頸良性病變13例、宮頸癌未合并淋巴結轉移和宮頸癌合并淋巴結轉移各25例的宮頸組織中S100A6基因的表達量。結果 S100A6基因在不同病變宮頸組織中均有表達，宮頸癌合并淋巴結轉移組中表達最高，宮頸癌未合并淋巴結轉移組表達次之，宮頸良性病變組最低。結論 S100A6基因在不同病變宮頸組織中表達均有差異，隨著宮頸病變程度及浸潤轉移表達增高，結合臨床可以作為評價宮頸癌轉移浸潤危險性的參考指標之一。

[關鍵詞] S100A6; 宮頸癌; 實時熒光定量RT-PCR; 淋巴結轉移

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)11-09-02

Expression and Role of S100A6 in Cervical Cancer

TAN Yuan YAO Desheng

Department of Women's Tumor，the Affiliated Tumor Hospital Guangxi Medical University，Nanning 530021，China

[Abstract] ObjectiveTo compare the expression of S100A6 gene in different cervical lesion tissues and analyze the relationship between the expression level and the lymph node metastasis of cervical cancer. MethodsWe analyzed the S100A6 expression level of 13 cases of benign cervical lesions，25 cases of cervical cancer without lymph node metastasis，25 cases of cervical cancer with lymph node metastasis by using real-time fluorescence quantitative RT-PCR. Results S100A6 gene showed its expression in different cervical lesion tissues，and the cervical cancer with lymph node metastasis group showed its highest expression level，the next was the cervical cancer without lymph node metastasis group and the lowest was the cervical benign lesion group. ConclusionThe expression of S100A6 gene in different cervical lesion tissues is different，and as the degree of cervical lesion，invasion and metastasis increases，its expression increases，which can be used as one of the indicators for the evaluation of the transfer of invasive cervical cancer risk.

[Key words]S100A6; Cervical cancer; Real-time fluorescence quantitative RT-PCR; Lymph node metastasis

淋巴結轉移是中晚期宮頸癌病人治療過程中非常棘手的問題，特別是腹主動脈旁及鎖骨上淋巴結轉移，手術無法切除干凈，放療達不到根治量，常規的靜脈化療藥物難以進入淋巴系統，靜脈化療對淋巴道轉移的療效不滿意，因此淋巴結轉移是影響預后的很重要的因素。淋巴結轉移是中晚期宮頸癌治療的關鍵，也是治療的難點和復發的原因。本實驗采用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術研究S100A6基因在不同病變宮頸組織中的表達，以分析其在宮頸癌發生、發展中的意義。

1 資料和方法

1.1 一般資料

收集廣西腫瘤防治研究所婦瘤科住院患者的宮頸組織，分為三組:宮頸良性病變組13例、宮頸癌未合并淋巴結轉移組和宮頸癌合并淋巴結轉移組各25例。各組宮頸組織均經腫瘤醫院病理科證實，組織離體后30min內放入液氮中保存備用。RNA提取采用美國Invitrogen公司的Trizol試劑。按說明書操作。RT-PCR試劑為Takara公司生產。PCR引物采用Primer 5軟件設計，S100A6上游引物5'-GGCTGATGGAAGACTTGGAC-3'，下游引物5'-CCTTGAGGGCTTCATTGTAGAT-3'擴增產物為105bp。采用GAPDH為內參照，其上游引物5'-GAAGGTGAA- GGTCGGAGT-3'，下游引物5'-GAAGATGGTGATGGGATTTC- 3'，擴增產物為225bp。上述引物由英駿生物工程公司合成。

1.2 方法

RT-PCR嚴格按照實驗操作說明書進行實驗。0.5～5μg 總RNA，1μL Oligo(dT)15，加Rnase free水至12μL，70℃反應5min，立即置于冰上冰浴5min，加入4μL 5×Reaction Buffer，2μL 10mMdNTPs，1μL RNA酶抑制劑(Rnasin inhabitar)37℃下反應5min，加1μL逆轉錄酶M-MLV，42℃反應60min，72℃10min，冰浴中5min，-20℃保存。多通道PCR儀(Thermo Fisher scienfic)上94℃預變性5min、94℃30s、57℃30s、72℃30s、72℃延伸10min。PCR擴增產物經2%瓊脂糖凝膠(溴已錠染色)，電泳80V 60min，凝膠成像系統觀察分析結果。

2 結果

2.1 宮頸癌及良性病變組織總RNA抽提結果

總RNA的OD260/0D280值均在1.8～2.1，含量在50～100μg。

2.2 不同病變宮頸組織S100A6基因的表達

S100A6基因mRNA經RT-PCR擴增后，長度為105bp，在宮頸癌合并淋巴結轉移組織中表達量明顯增高。見圖1，表1。

3 討論

S100A6在宮頸癌中的研究也比較少，S100A6在細胞信號轉導過程中發揮重要作用。盡管對其性質以及結構等方面有了一定的了解，但不夠全面，在以后的研究中有待進一步拓展，特別是在細胞增殖、凋亡，腫瘤發生、浸潤和轉移等過程中的生物學作用機制，與S100蛋白家族中其他成員的關聯和相互協同作用等方面。S100A6又稱為鈣周期蛋白(Calcyclin，Cacy)，主要存在于胞質、胞膜以及核被膜上，包括核膜的內表面。S100A6在多數上皮腫瘤如黑色素瘤、肝癌、結直腸腫瘤等許多腫瘤中高表達，所以，推測S100A6的異常表達與腫瘤細胞的增殖和分化密切相關。同時它多聚集于腫瘤邊緣，也可能與腫瘤侵襲遷移有關[1]。S100A6在細胞核中的高表達與胰腺癌的預后呈負相關[2]。細胞水平實驗，揭示S100A6在胰腺癌組織及其分泌的胰液中S100A6 mRNA高表達;RNAi阻遏S100A6的翻譯后，胰腺癌細胞株CFPAC-1的增殖被抑制[3]。Weterman發現S100A6在黑色素瘤中的表達高于痣細胞痣(Nevocellular nevi)。且其在裸鼠體內移植的高轉移黑色素瘤中的表達高于低轉移黑色素瘤[4]。Maelandsmo也有類似研究結果:S100A6的高表達與黑色素瘤細胞的轉移能力呈正相關，并與患者存活期相關，低表達者存活時間長于高表達者[5]。

迄今對S100A6基因在宮頸癌中表達和臨床意義的研究均較少，且一般采用的是S-P免疫組化的方法，在蛋白的水平上分析該基因與腫瘤浸潤轉移的關系。本研究運用實時熒光定量技術進行宮頸癌組織中S100A6定量檢測，在轉錄水平上分析該基因與宮頸癌浸潤和惡性程度的關系。表達量上分析，三組標本兩兩之間具有明顯的差異，而且從宮頸良性病變組到宮頸癌未合并淋巴結轉移組直至宮頸癌合并淋巴結轉移組，宮頸組織中S100A基因表達量呈明顯上升趨勢。由此可見，S100A6基因與宮頸病變的惡性程度和淋巴結轉移相關，表達量的上調與淋巴結轉移是相關的。

[參考文獻]

[1] Ilg EC，Sehafer BW，Heizmann CW. Expression pattern of S100 calcium-binding proteins in human tumors[J]. Int J Cancer，1996，68(3):325- 332.

[2] Vimalachandran D，Greenhalf W，Thompson C，et al. High an-clear S100A6(Caleyelin) is significantly associated with poor survivalin pancreatic cancer patients[J]. Cancer Res，2005，65(8):3218-3225.

[3] Kenoki Ohuehida，Kazuhiro Mizumoto，Nami Ishikawa，et al. Therole of S100A6 in pancreatic cancer development and its clinlic implication as a diagnostic marker and therapeutic target[J]. Clin Cancer Res，2005，11(21):7785-7793.

[4] Weterman MA，Stoopen GM，van Muijen GN，et al. Expressio of ealeyelin in human melanoma cell lines correlates with metastatic behavior in nude mice[J]. Cancer Res，1992，52(5):1291-1296.

[5] Maelandsmo GM，Florenes VA，Mellingsaeter T，et al. Diferential expression patterns of S100A2，S100A4 and S100A6 during progression of human m alignant melanoma[J]. Int J Cancer，1997，74:464-469.

(收稿日期:2010-03-05)