血清Livin水平與胃癌臨床分期的關系探討

[摘要] 目的 探討血清Livin水平與胃癌臨床分期的關系。方法用ELISA法檢測36例術前胃癌患者和5例健康人血清Livin水平。結果胃癌患者血清中Livin陽性表達率為52.8%(19/36)，正常健康人血清中未見陽性。Livin在低分化腺癌中陽性率為69.6%(16/23)，與高、中分化腺癌23.1%(3/13)相比有顯著性差異;伴有淋巴結轉移者陽性率為68.0%(17/25)，無淋巴結轉移者陽性率為18.2%(2/11)，兩者有顯著性差異;伴有漿膜層浸潤者陽性率為70%(14/20)，無漿膜層浸潤者陽性率為31.3%(5/16)，兩者比較有顯著性差異。TNM分期Ⅲ期的胃癌患者Livin陽性率為91.7%(11/12)，顯著高于Ⅰ、Ⅱ期者33.3%(8/24)。Livin基因表達與胃癌組織的分化程度、臨床分期及淋巴結轉移呈正相關。結論血清Livin水平與胃癌的分期和病理組織學類型有關，為術前評估胃癌的TNM分期和淋巴結轉移提供可靠依據。

[關鍵詞]胃癌; 腫瘤分期; 血清; Livin

[中圖分類號] R735.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)11-50-02

Relationship between Serum Livin Level and Clinical Staging of Gastric Cancer

ZHENG Zhaoli LIU Zuhong CHEN Youjia

Department of Clinical Laboratory，Jieyang City People’s Hospital，Jieyang 522000，China

[Abstract] ObjectiveTo discuss the relationship between serum Livin level and clinical staging of gastric cancer.MethodsThe preoperative serum Livin level was detected in 36 cases of gastric cancer and 5 cases of normal subjects by ELISA. ResultsThe positive rate of the serum Livin level was 52.8%(19/36)in gastric cancer，and that was negative in normal subjects. The Livin positive rate was 68%(17/25)in the cases with lymph node metastasis and it was 18.2%(2/11)in the cases without lymph node metastasis，with a significant difference between the two. The Livin positive rate was 70%(14/20)in the cases with serosal invasion and it was 31.3%(5/16)in the cases without serosal invasion，with a significant difference between the two. The Livin positive rate was 91.7%(11/12)at gastric cancer TNM stageⅢ，significant higher than the stages Ⅰand Ⅱ(33.3% 8/24). The Livin expression was positively correlated with gastric cancer tissue differentiation，clinical staging and lymph node metastasis. ConclusionThe serum Livin level is related to gastric cancer staging and histological types，which provides a reliable basis for the preoperative evaluation of gastric cancer TNM staging and lymph node metastasis.

[Key words]Gastric cancer; Tumor differentiation; Serum; Livin

胃癌是最常見的消化道腫瘤，其死亡率在我國各種惡性腫瘤死亡率中位于肺癌、肝癌之后排在第3位[1];也是本地區較常見的惡性腫瘤，臨床就診時大多屬中晚期，化療緩解率較低。Livin是凋亡蛋白抑制因子(IAP)家族的同源序列篩選克隆出的一種新型的有較強的抗凋亡功能的IAP家族成員，有抑制細胞凋亡的作用，是一類重要的抗細胞凋亡因子，與腫瘤的發生發展關系密切[2，3]。我們應用ELISA法檢測36例胃癌患者和5名健康人的血清Livin濃度，探討胃癌患者術前血清Livin表達與胃癌臨床分期的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院腫瘤科2008年3月～2009年7月行胃癌手術的病例，挑選術前未接受化療的36例胃癌患者(均經病理檢查證實)，采集患者術前血清2mL;其中男性23例，女性13例，年齡45～73歲。根據1997年UICC分期標準，T1～T2期15例，T3期21例;高、中分化腺癌13例，低分化腺癌23例;有周圍淋巴結轉移者25例，無轉移者11例。收集同期5名健康體檢者的血清。

1.2 實驗方法及陽性判斷標準

分別抽取肘靜脈血，均于清晨采空腹肘靜脈血2mL置于以0.11mol/L枸櫞酸三鈉1∶9抗凝的試管內，搖勻。常溫下以3000r/min速度離心15min，分離血清放置-80℃保存。測定前室溫下復蘇。雙抗體夾心酶聯免疫法(ELISA)測定血清Livin(武漢博士德生物工程有限公司)。ELISA操作步驟:將Livin抗體用0.05M pH9.6的碳酸鹽緩沖稀釋至10μg/mL;在每個聚苯乙烯板的反應孔中加入0.1mL稀釋后抗體，4℃過夜;棄去孔內溶液，用PBS沖洗3次，每次3min，扣干;加入稀釋待檢樣品0.1mL于上述已包被的反應孔中，同時做空白、陰性對照及陽性對照，37℃孵育1h;棄去孔內溶液，用PBS沖洗3次，每次3min，扣干。滴加酶標抗體0.1mL。37℃孵育0.5h;棄去孔內溶液，用PBS沖洗3次，每次3min，扣干。滴加TMB底物溶液0.1mL，37℃孵育0.5h;加入2M硫酸0.05mL終止反應。結果判定:在ELISA檢測儀上于450nm處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

1.3 統計學處理

應用SPSS10.0統計分析軟件對結果行χ2檢驗。

2 結果

在36例胃癌患者血清中Livin 呈陽性表達19例，陽性率為52.8%(19/36);正常健康人血清中未見陽性表達。

Livin在胃癌高中分化癌組織、低分化癌組織中的表達陽性率分別為23%、69.6%，差異有統計學意義(P<0.05);在伴有淋巴結轉移者中的表達與無淋巴結轉移者差異有統計學意義(P<0.05);伴有漿膜層浸潤者的表達與無漿膜層浸潤者差異有統計學意義(P<0.05)。胃癌TNM分期中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期Livin的表達陽性率分別為20%、42.9%、91.7%，TNM分期Ⅲ期的胃癌Livin表達陽性率顯著高于Ⅰ、Ⅱ期。Livin基因表達與胃癌組織的分化程度、臨床分期及淋巴結轉移呈正相關。血清Livin水平與胃癌臨床病理特征的關系見表1。

3 討論

Livin作為一種新近發現的IAPs家族成員，具有特異的BIR和RING結構域，可以通過多種途徑發揮抑制細胞凋亡的作用。Livin抑制細胞凋亡作用主要通過其BIR區與Caspase結合，抑制Caspase活性，尤其是抑制Caspase-3、7、9的活性，達到阻斷凋亡受體及以線粒體為基礎的凋亡途徑而起作用。Livin對化療藥物及死亡受體介導的細胞凋亡亦具有強大的抑制作用。Livin基因失調、蛋白過量表達亦見于多種消化道腫瘤如胃癌、結腸癌、直腸癌、胰腺癌、肝癌等，且與腫瘤惡性程度及預后有關，具有早期診斷和判斷預后的價值。盡管目前消化道腫瘤中Livin的研究較少，但已有的研究表明，Livin的異常表達在消化道腫瘤的發生過程中亦起著重要作用[4]。

本研究用ELISA酶聯法檢測胃癌患者術前血清中Livin水平，結果顯示Livin在36例術前胃癌患者血清中陽性率為52.8%(19/36)，正常健康人血清中未見升高。這與Yagihashi等[5]王同杉等[6]研究結果相類似。本研究結果還提示，大部分胃癌患者血清中有Livin不同程度的陽性表達，且其表達與胃癌的分化程度、浸潤深度、有無淋巴結轉移及分期呈正相關。在Livin表達與臨床病理指標的相關性關系方面，由于可能有多種因素影響了Livin的表達水平，使Livin在消化道腫瘤發生、發展中的確切機制尚未完全清楚，這有待于進一步研究、分析。

目前臨床胃癌患者大多只能在術后(而非術前)通過病理學檢查對胃癌腫瘤TNM進行分期，如能在今后的大樣本研究中，建立血清學Livin術前淋巴轉移分期的評估指標，則術前血清Livin值的測定將有利于指導術前推測腫瘤分化程度、淋巴轉移情況，據此選擇術前個性化化療及術中胃癌淋巴結切除范圍以達R0結果。因此，胃癌血清學Livin檢測可能對改善胃癌預后具有意義。

[參考文獻]

[1] 呂洋，趙坡. 胃癌病理學與分子生物學研究進展[J]. 中華腫瘤防治雜志，2006，13(14):1-4.

[2] Kasof GM，Gomes BC. Livin，a novel inhibitor of apop tosis protein family member[J]. J Biol Chem，2001，276(5):3238-3246.

[3] Lin JH，Deng G，HuangQ，et al. KIAP，a novelmember of the inhibitor of apop tosis p rotein family[J]. Biochem Biophys Res Commun，2000，279(3):820-831.

[4] SannaMG，Correia JDS，DucreyO，et al. IAP Supp ression of apop tosis involves distinct mechanisms:the TAK1 /JNK1 signaling cascade and caspase inhibition[J]. Mol Cell Biol，2002，22(6):1754-1766.

[5]Yagihashi A，Asanuma K，NakamuraM，et al. Detection of anti-survivin antibody in gastrointestinal cancer patients[J]. Clin Chem，2001，47(9):1729-1731.

[6] 王同杉，游思洪，葛紅梅，等. 凋亡抑制蛋白livin在人胃癌中的表達以及和survivin表達的關系[J]. 南京醫科大學學報(自然科學版)，2006， 26(1):39-43.

(收稿日期:2010-02-04)