多倍體枇杷SCOT分析體系的建立與優化

摘要：以軟條白沙枇杷三倍體株系為試材，采用L₂₅(5⁶)正交設計方法，對影響枇杷SCoT—PCR反應的Mg²⁺、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶及模板DNA用量等因素進行優化篩選，并對最適退火溫度進行了探討。建立了適于不同倍性枇杷分析的SCoT-PCR擴增體系，即20μL的優化體系中含有：Mg²⁺1.5mmol·L^-1，dNTPs 0.35mmol·L^-1，引物0.5μmol·L^-1，Taq酶0.5U，模板DNA 50ng。引物最適退火溫度為51.8℃。應用優化的反應體系，對32個SCoT引物和3個枇杷品種(瀘州六號：2x，3x，4x，5x；龍泉1號：2x，3x，4x；早紅3號：2x，3x，4x)的10個不同倍性株系進行擴增，獲得了條帶清晰，穩定可靠的電泳結果。

關鍵詞：枇杷；多倍體；目標起始密碼子多態性；正交優化

中圖分類號：S667.3 文獻標識碼：A 文章編號：1009-9980(2011)03-433-05

目標起始密碼子多態性(Start codon targetedpolvmorohism，SCOT)標記是Collard等于2009年發明的一種新的目的基因分子標記，其根據植物基因中的ATG翻譯起始位點側翼序列的保守性，設計單引物并對基因組進行擴增，產生偏向候選功能基因區顯性多態性標記。是一種能跟蹤性狀的新分子標記技術。已被成功應用于單子葉植物水稻和雙子葉植物花生。

多倍化是植物進化過程中普遍存在的一種自然現象，被認為是植物進化和物種形成的主要驅動力，而多倍體育種也一直是新品種選育和遺傳改良的重要途徑，在農業生產中發揮重要作用。枇杷原產我國，其果實柔軟多汁，營養豐富，又在初夏水果淡季上市，越來越受到消費者的喜愛和研究者的重視。前人對枇杷的研究主要以二倍體為主，在枇杷多倍體研究中，張凌媛等曾統計分析了枇杷氣孔保衛細胞葉綠體數目與倍性的相關性，汪衛星則利用IS—SR、AFLP、GISH和MSAP等技術，對天然與人工合成三倍體枇杷基因組變異及其DNA甲基化進行了分析，而對于更多倍性枇杷植株的研究則鮮有報道。……