梅(Prunus mume)IRAP分子標記技術體系的建立

摘要：基于梅Tyl-copia類逆轉座子的長末端重復序列信息設計IRAP引物，通過五因素四水平L₁₆(4⁵)的完全隨機正交試驗、不同濃度PAGE膠等的研究，建立了適合梅IRAP標記的技術體系。結果表明，體系總體積25μL，其中基因組DNA30ng、25mmol·L^-1MgCl₂2.0μL、2.5mmol·L^-1dNTPs2.5μL、10×PCR Buffer 2.5μL、Taq DNA聚合酶1.0U、10μmol·L^-1LTR引物1.0μL，加ddH₂O至25μL為最優IRAP的PCR反應體系，以及6.0％和8.0％濃度的非變性PAGE膠均適于IRAP多態性檢測。這為進一步利用IRAP分子標記研究梅的遺傳多樣性和親緣關系等奠定堅實的基礎。

關鍵詞：梅：IRAP技術體系

中圖分類號：S662.4 文獻標識碼：A 文章編號：1009-9980(2011)03-423-05

梅(Prunus mume sieb，etZucc.)是中國重要水果和春季開花最早的觀賞植物之一，由于其果酸、優美的花韻及寒冬綻放等獨特的特性，在國內外廣泛應用于加工及風景園林。國內外學者已經開展了梅ISSR、SSR、RAPD與SCAR和AFLP等分子標記的研究，分別應用于果梅和花梅的遺傳多樣性及品種鑒定等。逆轉座子在植物基因組中分布廣泛，拷貝數多，異質性高，在種內和種間表現出較高的序列差異性和豐富的插入多態性，基于這些特點開發出的逆轉座子分子標記與常規分子標記相比，能覆蓋全基因組，多態性更豐富，在遺傳多樣性和系譜研究、遺傳連鎖圖譜構建及性狀基因定位方面具有很大的發展潛力。

IRAP即逆轉座子內部擴增多態性(Inter-retro-transposon amplified polymorphism)，最初是由Kalen-dar等開發而成的，是一種檢測寄主基因組內逆轉座子插入位點間多態性的分子標記。其原理是根據逆轉座子的LTRs保守區域或逆轉座子轉錄酶基因包含的保守序列設計LTR特異引物，這些引物在PCR過程中可以與逆轉座子的LTR相應區域退火，從而擴增出相鄰的同一家族的逆轉座子成員的片段。……