北京地區核桃黑斑病病原菌的分離\\致病性測定和16SrDNA序列分析

摘要：核桃黑斑病是危害核桃生產的重要細菌病害，造成樹勢衰弱，減產嚴重，甚至樹體死亡。2008年在北京郊區栽植的幼樹上發現疑似病害，且呈爆發之勢。為確定其病原菌分類地位，用組織分離法分離核桃黑斑病菌，純化培養后用針刺接種法回接到健康核桃樹枝條和葉片上，14 d后葉片和枝條分別出現典型病斑，接種發病組織再分離所得病菌性狀、16SrDNA與初分離的一致，完成柯赫氏法則驗證；以分離的核桃黑斑病菌總DNA為模板，采用細菌16SrDNA的通用引物，通過PCR擴增到約1.5kb的片段，克隆到pMD-18T載體。測序結果表明克隆的16SrDNA片段長為1453個核苷酸，通過GenBank上BLAST分析，表明該病原細菌為Xanthomonas campestris。

關鍵詞：核桃黑腐病；細菌；致病變種

中圖分類號：S664.1 文獻標識碼：A 文章編號：1009-9980(2011)03-469-05

核桃黑斑病，又名核桃黑腐病，在歐美一些國家有發生。在我國，該病廣泛分布于河北、山東、山西、遼寧、河南、江蘇、浙江、四川、云南、山西、甘肅等省核桃產區。據對河南安陽等地調查，一般植株受害率70％～90％。果實受害率lO％～40％，嚴重時達65％以上。甘肅省主要分布在蘭州、天水、臨夏等地，病果率80％以上。核桃黑斑病主要危害葉片、嫩枝、幼果及花器，在葉片上出現圓形及多角形小褐斑，嚴重時相連成片，病斑外圍有水漬狀暈圈：枝梢上病斑長形，黑褐色，稍凹陷，嚴重時因病斑擴展包同枝條而使上段枯死；花序受侵后，產生黑褐色水漬狀病斑；幼果受害時，果面發生黑色小斑點，無明顯邊緣，逐漸擴大成片變黑，并深入果肉，使整個果實連同核仁全部變黑腐爛脫落。……