田間蘋果成熟組織RNA高效提取方法

摘要：針對田間蘋果成熟組織富含多酚、多糖和大量次生代謝產(chǎn)物的特點，建立了適合田間蘋果不同組織的高效RNA提取方法，以不同季節(jié)田間生長的蘋果葉片和皮層為材料，用此方法均能在2h左右完成超過10個樣品的總RNA提取，質(zhì)量高、完整性好的總RNA，可用于田間蘋果病毒RT—PCR檢測，獲得良好效果。經(jīng)反復(fù)大量試驗證實，該方法適合田間蘋果不同組織的RNA快速提取，操作簡便、快捷、高效，且使其不受季節(jié)限制，有效地提高了田間果樹病毒檢測以及其他分子生物學(xué)研究的效率。

關(guān)鍵詞：田間蘋果；成熟組織；RNA；高效提取

中圖分類號：$661.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1009-9980(2011)01-161-04

果樹病毒基因組大多為RNA，利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)是從分子水平上檢測果樹病毒的重要手段之一。果樹組織中總RNA提取的質(zhì)量是RT-PCR檢測的基礎(chǔ)和關(guān)鍵因素。目前，關(guān)于各種果樹總RNA提取方法雖有很多文獻(xiàn)報道，但大多以植物幼嫩組織或器官以及組培苗為試材。近年來，關(guān)于富含多糖、多酚的植物組織RNA提取方法也有報道，但普遍存在RNA提取過程復(fù)雜，步驟繁多，耗時長等問題。而在我國以田間蘋果的成熟組織為材料，且同時適用于不同季節(jié)和不同組織材料的快速、簡便的RNA提取方法報道較少。由于田間蘋果成熟組織富含多糖、多酚和其他豐富的次生代謝產(chǎn)物，一些適用于組培苗以及幼嫩組織的常規(guī)化的快速、簡便的植物RNA提取方法遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足田間蘋果成熟組織的需要。

針對田間蘋果成熟組織的特點，遵循操作簡單，提高效率，減少有毒藥品使用的原則，我們以不同時期的田間蘋果成熟組織為材料，對其RNA的提取方法進(jìn)行了優(yōu)化，以期獲得一種快速、高效的蘋果成熟組織高質(zhì)量RNA提取方法?！?br>