金櫻根多糖的超聲提取研究

摘要：采用超聲輔助提取金櫻根多糖，通過水提醇沉法，得到粗多糖，再利用Sevag法脫蛋白，獲得精制多糖。用苯酚-硫酸法測定多糖含量，以多糖含量為指標，評價提取條件。通過設計L9(34)正交試驗，可得最佳提取條件：提取溫度70 ℃、料液比為1∶50、提取時間為60 min、提取次數為4次。

關鍵詞：金櫻根；多糖；提取工藝

中圖分類號：Q538文獻標識碼：ADOI編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2011.01.007

Study on Extraction of Total Polysaccharides from Root of Rosa Laevigate Michx by Ultrasound

YI Yun-hong， WU Gong-qing， ZHUANG Cheng-jian， TIAN Su-ying

(Zhongshan Campus， Guangdong Pharmaceutical University， Zhongshan， Guangdong 528458， China)

Abstract：Polysaccharidea from root of Rose Laevigatae Michx was extracted by ultrasound-assisted， precipitated with alcohol， at last the crude polysaccharides was collected. Then protein was removed from the crude polysaccharides by the method of Sevag， and the refined polysaccharide was collected. The contents of polysaccharides were determined by the method of Phenol-Sulfuric acid. The conditions of extraction were evaluated with the target of polysaccharides’ contents. The protein’s content of the refined polysaccharides were determined by the method of Lowry. The best extraction conditions were gotten by orthogonal experiments， temperature70 ℃， liquid ratio 1︰50， extraction time 60 minutes， extraction 4 times.

Key words: Root of Rosa Laevigata Michx; polysaccharides' extraction; purification

金櫻根為薔薇科植物金櫻子（Rosa laevigata Michx）的根或根皮。金櫻根用藥歷史久遠，古代藥物典籍《本草綱目》、《中華本草》、《嶺南草藥志》、《江西民間草藥驗方》、《湖南藥物志》 等均有記載。但對于金櫻根的化學成分研究甚少。多糖具有多種生物活性，不僅有抗癌、抗病毒、抗衰老等作用，還可以增強人體免疫力[1]。如Bendjeddou等[2]發現從Anacyclus pyrethrum，Alpiniagalanga和Citrullrs中提取的多糖具有免疫活性作用。因此多糖研究具有十分重要的意義。對金櫻根化學成分的預試驗表明，金櫻根含有多糖成分。本研究采用超聲輔助提取金櫻根多糖，通過水提醇沉法，得到粗多糖，再利用sevag法脫蛋白，獲得精制多糖。用苯酚-硫酸法測定多糖含量，以多糖含量為指標，評價提取條件。

1材料和方法

1.1試驗材料

金櫻根，購于廣州致信中藥飲片有限公司，產地為湖南，經鑒定為薔薇科植物金櫻子Rosa laevigata Michx的根或根皮，即中藥金櫻根。試驗用葡萄糖為標準品，其余試劑均為分析純。紫外可見分光光度計：ΜV1102（上海天美科學儀器有限公司）。

1.2試驗方法

1.2 葡萄糖標準曲線的繪制 采用苯酚-硫酸法[3-4]，葡萄糖溶液標準曲線的回歸方程是：

y = 0.008 5x - 0.005 R2 = 0.999 7，說明線性范圍0.0~100 μg之間線性良好。

1.3金櫻根多糖的測定

1.3.1金櫻根多糖含量的測定將金櫻根多糖提取液準確稀釋一定倍數后，吸取1 mL，按照苯酚-硫酸法，在最大吸收波長處測量其吸光度值，再用葡萄糖標準溶液的標準曲線回歸方程，計算提取液中金櫻根多糖含量。

計算公式：多糖含量（mg·g-1）=(測量濃度×稀釋倍數×提取溶液體積/金櫻根藥材干質量)

1.3.2金櫻根多糖提取的單因素試驗對金櫻根多糖提取時的提取溫度、料液比、提取時間、提取次數等4個條件分別進行單因素試驗。其中提取溫度試驗料液比1∶50，提取時間30 min，提取1次；料液比試驗溫度為50 ℃，提取30 min，提取1次；提取時間試驗料液比為1∶50，提取溫度50 ℃，提取1次；提取次數試驗料液比為1∶60，溫度60 ℃，提取時間1 h。

1.3.3正交試驗根據單因素結果，設計L9(34)的正交試驗，試驗的因素和水平如表1所示。

2結果與討論

2.1提取溫度對多糖成分提取的影響

從試驗結果得知，70 ℃提取的多糖含量為89.03，mg·g-1比60℃時提取的多糖含量高0.4 mg·g-1。綜合考慮生產成本和試驗條件，單因素試驗結果最佳選擇為60 ℃時。

2.2料液比對多糖成分提取的影響

結果如圖3所示。當料液比為1∶50時提取的多糖最多，其多糖含量為70.74 mg·g-1。隨著料液比的增大，可能多糖水解部分也增多了，因而使得提取的多糖反而變少了，因此，單因素最佳選擇為1∶50。

2.3 提取時間對多糖成分提取的影響

由圖4可知，當提取時間為60 min時，提取的多糖最多，多糖含量為88.97 mg·g-1。超聲波破碎過程是一個物理過程，浸提過程中無化學反應，浸提物在短時間內保持不變，生物活性不減，同時提高了破碎速度，縮短了破碎時間，可極大地提高提取效率[5]。但隨著時間的增大，提取的多糖反而變少，原因可能是因為超聲時間長，引起分子的鍵斷裂，使多糖損失[6]，因此， 單因素最佳選擇是提取60 min。

2.4提取次數對多糖提取的影響

結果表明，當提取次數為3時，多糖的提取已經接近最大值，第4、5次提取時幾經接近水平現象。考慮節約溶劑和簡便生產工藝，單因素試驗結果的最佳選擇是提取3次（圖5）。

2.5正交試驗結果

根據表2正交結果可知，金櫻根多糖提取的最佳工藝條件是A3B2C1D3，即最佳組是提取溫度為70 ℃，料液比是1∶50，提取時間為60 min，提取次數為4次。由極差大小可以判斷，其因素對金櫻根多糖提取的影響程度依次A>B>C>D，即提取溫度為金櫻根多糖提取的首要考慮因素，其次是料液比，再次是提取時間，最后是提取次數。

3小結

對金櫻根多糖提取的影響程度依次提取溫度>料液比>提取時間>提取次數，金櫻根多糖提取的最佳工藝條件是A3B2C1D3，即提取溫度70 ℃，料液比1∶50，提取時間60 min，提取次數4次，測得多糖含量為127.75 mg·g-1。

參考文獻：

[1] 王舒寧.真菌多糖免疫調節作用的研究進展[J].福建畜牧獸醫，2009，31（3）：14-16.

[2] Bendjeddou D， Lalaoui K， Satta D. Immunostimulating activity of the hot water-soluble polysaccharide extracts of Anacyclus pyrethrum， Alpinia galanga and Citrullus colocynthis[J].J Ethnopharmacol，2003，88(2-3):155-160.

[3] 李志洲.淡竹葉多糖的提取及體外抗氧化性研究[J].中成藥，2008，30(3)：434-437.

[4] 邱麗萍，呂青濤，張發科，等.當歸多糖的提取分離與血清指紋圖譜研究[J].中藥材，2008，31(1)：65-67.

[5] 張智芳，林文庭，陳燦坤.植物多糖提取工藝的研究進展[J].海峽預防醫學雜志，2008，3(14)：18-20．

[6] 張昌軍，原方圓，邵紅兵.超聲波法在提取多糖類化合物中的應用研究[J].化工時刊，2007，21(2)：54-56．