14-3-3θ在乳腺癌中的表達和意義

[摘要]目的：研究14-3-3θ在乳腺癌組織中的表達及其臨床意義。方法：應用S-P免疫組化法檢測14-3-3θ在66例乳腺癌組織中的表達情況。結果：14-3-3θ在乳腺癌組織中的表達與患者年齡、原發腫瘤大小、臨床分期、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、原癌基因人類表皮生長因子受體2（human epidermalgrowth factor receptor-2， Her-2）無關（P＞0.05）；在腋窩淋巴結轉移組14-3-3θ陽性率明顯高于無轉移組（P＜0.05）；在雌激素受體（estrogen receptor，ER）陰性乳腺癌組織中的陽性率遠高于ER陽性組（P＜0.01）。結論：14-3-3θ與乳腺癌的轉移和預后存在一定的相關性。

[關鍵詞]14-3-3θ；乳腺癌；免疫組化

[中圖分類號] [文獻標識碼] [文章編號]1008-6455（2011）04-0595-02

Expressions of 14-3-3 θ in breast cancer

TONG Chao1， LIU Wen2， LI Nan-lin1， WANG Ling1

(1.Department of Vascular Surgery，Xijing Hospital，The Fourth Military Medical University， Xi'an 710033，Shaanxi，China; 2.Department of Medical Education，Stomatological Hospital， The Fourth Military Medical University)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expressions of 14-3-3θ in breast cancer and its correlations with clinicopathological characteristics.MethodsExpressions of 14-3-3θ in 66 breast tumor tissues were detected by immunohistochemistry.ResultsThe expressions of 14-3-3θ had no correlation with age， tumor size， clinical stage， PR and Her-2 (P>0.05）. While its expressions were positive associated with axillary lymph node metastases（P<0.05）and ER（P<0.01）.Conclusion14-3-3θ might be closely related to metastasis and prognosis in breast cancer.

Key words 14-3-3θ; breast cancer; immunohistochemistry

14-3-3蛋白在全部真核細胞中廣泛表達并發揮作用。目前，已知哺乳動物細胞有7個14-3-3蛋白亞型（β、ε、γ、η、σ、θ和ζ）。近年研究提示，某些腫瘤中14-3-3的表達增加，如在肺癌、口腔鱗狀細胞癌、胃癌和乳腺癌中14-3-3ζ表達增加[1-2]；從肺癌活組織檢查中發現14-3-3β和γ表達增加；而對化療耐受的黑素瘤中發現14-3-3γ增多[3]。然而，對14-3-3θ亞型表達變化與乳腺癌的關系研究尚少。因此，我們采用免疫組織化學方法檢測了14-3-3θ在乳腺癌組織中的表達情況，并探討了其與乳腺癌臨床病理特征的關系及臨床意義。

1材料和方法

1.1 材料：搜集第四軍醫大學西京醫院血管外科2008年3月～2009年5月手術切除并經病理確診的原發性乳腺癌標本66例?；颊呔鶠榕?，年齡27～69歲(M=42.6，SD=5.1)，術前均未接受任何抗腫瘤治療。

1.2 主要試劑及實驗方法：兔抗人14-3-3θ單克隆抗體購自santcruze公司，免疫組化試劑盒購自北京經科宏達生物技術有限公司。采用S-P免疫組化法檢測，實驗操作步驟嚴格按試劑盒說明進行。石蠟切片用微波修復抗原，抗體稀釋度為1:200，DAB顯色，蘇木精復染。用已知陽性組織切片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定：以胞漿出現棕黃色或棕褐色均質顆粒物質判定為陽性細胞。在高倍鏡下（×400）隨即選取5個視野，選取染色較為集中的區域進行細胞計數和結果判定，陽性細胞百分數≥10%為陽性表達。

1.4 統計學方法：所得數據采用SPSS10.0統計學軟件進行χ2檢驗或Fisher精確檢驗，P<0.05為有統計學意義。

2結果

2.1 14-3-3θ在乳腺癌組織中的表達情況：陽性表達率為54.55%(36/66)，陽性為胞漿棕黃染色，見圖1、2。

2.2 14-3-3θ與年齡、原發腫瘤大小、腋窩淋巴結轉移、臨床分期的關系：在腋窩淋巴結轉移組14-3-3θ陽性率明顯高于無轉移組（P<0.05），其表達與患者年齡、原發腫瘤大小、臨床分期均無相關性（P>0.05）（表1）。

2.3 14-3-3θ與ER、PR、Her-2的關系：14-3-3θ在ER陰性乳腺癌組織中的陽性率遠高于ER陽性組（P<0.01），與PR、Her-2無相關性（P>0.05）（表2）。

3討論

14-3-3蛋白家族是一個分子量在28～33kD之間的酸性蛋白質家族，其在細胞中含量豐富，能夠自我裝配成二聚體的形式。該蛋白家族的蛋白質序列高度保守，目前體內已有超過200種蛋白被證實與14-3-3蛋白有關，這些分子主要在調控細胞周期、胞內信號轉導、引起應激反應、細胞凋亡、調節轉錄、細胞新陳代謝以及維持細胞骨架完整性方面發揮作用。14-3-3蛋白能夠通過特異性結合靶蛋白上磷酸化的絲氨酸/蘇氨酸殘基，調節靶蛋白的功能，包括改變靶蛋白的催化活性、在細胞中的分布或是這些靶蛋白對蛋白酶或磷酸酶的敏感性。14-3-3蛋白在細胞中最顯著的作用就在于它們與促細胞有絲分裂和應激信號的轉導、細胞周期和細胞凋亡的調控以及對DNA損傷的反應等事件相關[4-6]。14-3-3蛋白同時具有抑制腫瘤和促進腫瘤生長的特性，目前研究顯示只有14-3-3σ具有抑癌活性而其他亞型都表現出促癌的能力。14-3-3θ被發現在原發性乳腺癌中過表達與P21表達降低有關，并且導致病人的生存率降低[7]，Martin等發現利用腫瘤相關細胞外基質分子tanascin-C培養乳腺癌細胞系MCF-7細胞能增加14-3-3θ的表達[8，10]。也有報道敲除小鼠的14-3-3θ基因是致死性的或引起嚴重的發育遲緩[9]。

本研究結果顯示14-3-3θ蛋白在乳腺癌組織中的表達與患者年齡、原發腫瘤大小、臨床分期、PR、Her-2無關（P>0.05），而在腋窩淋巴結轉移組中的陽性表達率明顯高于無轉移組（P<0.05），在ER陰性乳腺癌組織中的陽性率遠高于ER陽性組（P<0.01）。

在分析14-3-3θ與乳腺癌臨床病理特征時發現，14-3-3θ與乳腺癌淋巴結轉移呈正相關，與ER的表達呈負相關。提示14-3-3θ可能是侵襲性乳腺癌的一個診斷性指標，而其與ER的表達呈負相關也說明14-3-3θ陽性的乳腺癌患者可能對內分泌治療效果較差，與乳腺癌的轉移和預后存在一定的相關性，這也與國外報道一致[7]。傳統乳腺癌改良根治術手術范圍大，對患者心理也造成了一定的影響。目前保乳手術正被廣泛的應用于臨床，其能有效的改善術后乳房外觀的美容效果，能使患者維持較好的軀體和外觀形象。如能進一步證實14-3-3θ與乳腺癌的轉移和預后的相關性，對于指導乳腺癌手術具有一定臨床意義。

綜上可見，14-3-3θ可以作為乳腺癌惡性轉化、轉移和評估的重要指標之一，有望成為乳腺癌一個新的治療的靶點和指導手術術式的重要標志。

[參考文獻]

[1]Qi W， Liu X， Qiao D， Martinez JD. Isoform-specific expression of 14-3-3 proteins in human lung cancer tissues[J]. Int J Cancer， 2005， 113:359-363.

[2]Arora S，Matta A，Shukla NK，et al. Identification of differentially expressed genes in oral squamous cell carcinoma[J]. Mol Carcinog，2005，42:97-108.

[3]Sinha P，Kohl S，Fischer J，et al. Identification of novel proteins associated with the development of chemoresistance in m alignant melanoma using two-dimensional electrophoresis[J]. Electrophoresis， 2000，21:3048-3057.

[4]van Heusden GP. 14-3-3 proteins: regulators of numerous eukaryotic proteins[J].IUBMB Life， 2005，57:623-629.

[5]Hermeking H. The 14-3-3 cancer connection[J]. Nat Rev Cancer，2003，3:931-943.

[6]Dougherty MK， Morrison DK. Unlocking the code of 14-3-3[J].J Cell Sci，2004，117:1875-1884.

[7]Abbas T，Sivaprasad U， Terai K，et al. PCNA-dependent regulation of p21 ubiquitylation and degradation via the CRL4Cdt2 ubiquitin ligase complex[J].Genes Dev，2008， 22:2496-506.

[8]Martin D，Brown-Luedi M，Chiquet-Ehrismann R. Tenascin-C signaling through induction of 14-3-3 tau[J]. J Cell Biol，2003，160:17 1-175.

[9]Lau JM，Jin X，Ren J，et al.The 14-3-3tau phosphoserine-binding protein is required for cardiomyocyte survival[J]. Mol Cell Biol，2007， 27:1455-1466.

[10]Fung C，Lock R，Gao S，et al.Induction of autophagy during extracellular matrix detachment promotes cell survival[J].Mol Biol Cell，2008，19:797-806.

[收稿日期]2010-10-09[修回日期]2010-12-19

編輯/張惠娟