北蟲草提取物延緩皮膚衰老的實驗研究

[摘要]目的：研究北蟲草提取物對延緩D-半乳糖所致小鼠皮膚組織衰老的作用。方法：昆明種3月齡小鼠72只，雌雄各半，隨機分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、模型對照組、正常對照組和陽性對照組。各給藥組、模型組和陽性組每日頸背部皮下注射D-半乳糖，連續注射42天造成亞急性衰老模型，正常組注射相同劑量生理鹽水。各給藥組造模的同時皮膚涂布給藥，42天后取背部皮膚檢測。結果：北蟲草提取物能夠增加衰老小鼠的含水量和SOD活力，降低皮膚中MDA含量。結論：北蟲草提取物具有延緩皮膚衰老的作用。

[關鍵詞]北蟲草提取物；延緩；皮膚衰老；動物實驗

[中圖分類號]R332[文獻標識碼]A[文章編號]1008-6455（2011）04-0612-03

Experimental study on anti-skin-aging action of Cordyceps extract

HUANG Guo-xin，YAN Qin-hui，ZHANG Zhong-min，LV Zai-kun，REN Wei，SU Zi-ren，ZHAO Xue-jun

（RD Center of Herbal Cosmetics，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，Guangdong，China）

Abstract:ObjectiveWeresearched the role to delay aging whichtake in the skin of mice duing to D-galactose about the extractive of Cordyeps militaris.Methods72 healthy Kunming mice of three months were randomly divided into 6 groups-control group， high dose group， middle dose group， low dose group， model control group，normal control group and positive control group. Daily giving subcutaneous injection of D-galactose on the nape back for 42 days to make the subacute senile mouse model at each medical group， model group and positive group，normal control group gave the same doses of normal saline water injection. At the same time，each medical group were coated for medicine on the skin，and we getted the unhairing skin on back to determination after 42 days.ResultsThe extractive ofCordyepsmilitariscan remarkably improve skin water contents and SOD activity， and decrease significantly MDA content. ConclusionThe extractive ofCordyepsmilitaris can delay skin aging.

Key words： extractive of Cordyeps militaris; delay ;skin aging; animal experiments

隨著人們對延緩皮膚衰老的關注，各種預防和延緩皮膚衰老的有效途徑和方法不斷被提出和總結。中草藥因其獨特機理和優良的美容效果現已被廣泛應用于各類抗衰老的產品中。

北蟲草[Cordyceps militaris(L.)Link]，又稱北冬蟲夏草、蛹蟲草，為子囊菌亞門核菌綱球殼目麥角菌科蟲草屬，與冬蟲夏草同屬異種。《中華藥海》記載：“蛹草，性味甘、平，入肺、腎二經。” 《全國中草藥匯編》記載：“蛹蟲草(北蟲草)的子實體及蛹體也可作為冬蟲夏草入藥。”北蟲草中含有蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖以及豐富的蛋白質、18種氨基酸、17種微量元素、12種維生素等營養物質，其中維生素A、B1、B2、B6、B12、C、D、E等含量高于菇類。目前，口服北蟲草已被證實有良好的滋肺補腎、止血化痰、降血壓、抗菌等功效，但對其采用經皮給藥方式，用于評價其延緩皮膚衰老的實驗研究，則少見報道[1-3]。因此，本課題對北蟲草提取物延緩皮膚衰老的作用進行了研究，以期為其在抗衰老產品的開發運用提供實驗依據。

1材料和方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物：昆明小鼠，體重（20±2）g，SPF級，由廣州中醫藥大學實驗動物中心提供，實驗動物質量合格證明號0062558。

1.1.2 藥品：北蟲草提取物，由廣州中醫藥大學新藥開發研究中心提供，含量為1g/ml；維生素E由廣州星群藥業股份有限公司生產，批號：Ge50008；D-半乳糖由上海市晶純試劑有限公司生產，批號：18565；生理鹽水由佛山雙鶴藥業有限責任公司生產，批號：0909204D；考馬斯亮藍試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，批號：20100812；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，批號：20100805；丙二醛（MDA）試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，批號：20100804。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組：健康昆明種3月齡小鼠72只，雌雄各半，體重18～22g，隨機分為北蟲草提取物高劑量組、北蟲草提取物中劑量組、北蟲草提取物低劑量組、模型對照組、正常對照組、陽性對照組，每組12只（n=12）。

1.2.2 造模方法：每日頸背部皮下注射12.5%D-半乳糖1000mg/kg，連續注射42天制造亞急性衰老模型[2]，正常對照組注射相同劑量生理鹽水。

1.2.3 給藥方法：造模的同時給藥；用8%硫化鈉酒精溶液脫毛法背部脫毛（2cm×3cm），分別給以北蟲草提取物高劑量組20g/kg，北蟲草提取物中劑量組10g/kg，北蟲草提取物低劑量組5g/kg，VE陽性對照組50mg/粒/只，模型對照組和正常對照組給生理鹽水10ml/kg，皮膚涂布給藥，連續給藥42天。實驗過程中，每天記錄小鼠表征和活動情況。末次給藥1h后頸椎脫臼處死小鼠，取1cm2左右的皮膚供測定皮膚含水量之用；再取背部皮膚約0.2g作皮膚組織勻漿，用于測定皮膚生化指標。

1.2.4 8%硫化鈉酒精溶液的配制方法[4]：稱取硫化納8g， 加溫水60ml，待全溶解后再加入體積分數為75%的酒精40ml， 制成硫化鈉酒精溶液。

1.2.5 皮膚含水量測定方法：頸背部皮膚去毛清潔后，切取lcm2皮膚，精密稱其濕重，隨即將其放入烘箱中，于80℃烘干12h，稱其干重，計算。皮膚含水百分率=（濕重-干重）/濕重×100%。

1.2.6 10%皮膚勻漿的制備方法：取脫毛背部皮膚組織0.2g左右，經預冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪和其它結締組織，濾紙拭干，稱重，量取該組織塊9倍重量預冷生理鹽水，先取2/3量倒入裝有組織塊燒杯中，剪碎組織塊后倒入勻漿管中，將剩余l/3生理鹽水沖洗燒杯壁，用內切式組織勻漿機制成10%組織勻漿(在冰水中進行) ，反復凍融3次，使細胞完全破碎，內容物全部游離在液相中。

1.2.7 皮膚勻漿生化指標的測定方法：參照南京建成考馬斯亮藍試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒說明書方法和MDA試劑盒說明書方法測定超氧化物歧化酶（SOD）活力和皮膚中丙二醛（MDA）的含量。

1.3 統計學處理：采用SPSS13.0統計軟件進行統計描述，所得數據用均數±標準差表示，多個樣本均數的比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），當總體方差齊時選擇LSD法分析；當方差不齊時選擇Dunnet C法分析。

2結果

2.1 皮膚含水量實驗結果表明，衰老模型組皮膚含水量正常組相比，具有顯著的統計學差異（P＜0.01），提示造模成功；給藥高、中劑量組與模型組相比，具有統計學差異(P＜0.05)，說明北蟲草提取物有保持皮膚組織水分的作用；給藥高、中劑量組與正常組相比，高劑量與陽性對照組相比，均無統計學差異(P＞0.05)，提示高劑量北蟲草提取物與陽性藥VE效果相當，能夠使衰老皮膚的水分含量恢復到正常水平。結果見表1。

2.2 皮膚生化指標含量測定結果(表2)

2.2.1 在SOD活力的測定中，衰老模型組與正常對照組相比，差異具有顯著統計學意義(P＜0.01)，說明模型組皮膚組織中SOD活力顯著下降，提示衰老模型造模成功。陽性組、給藥高劑量組、中劑量組與正常對照組相比，差異無統計學意義(P＞0.05)；且與模型對照組相比，差異具有統計學意義(P＜0.05)，說明給藥高、中劑量組能提高衰老皮膚組織中SOD的活力，使其恢復至正常水平。給藥高、中劑量組與陽性對照組相比，無統計學差異（P＞0.05）， 提示給藥高、中劑量組與陽性藥VE效果相當。

2.2.2 在MDA含量的測定中，衰老模型組與正常對照組相比，差異具有顯著統計學意義(P＜0.01)，說明模型組皮膚組織中MDA含量顯著升高，提示衰老模型造模成功。陽性組、給藥高、中、低劑量組與正常對照組相比，差異無統計學意義（P＞0.05）；且陽性組、給藥高劑量組與模型組相比，差異具有顯著統計學意義（P＜0.01）；中、低劑量組與模型組相比，差異具有統計學意義（P＜0.05），說明各給藥組均能提高降低皮膚組織中MDA的活力，使其恢復至到常水平。各給藥組和陽性組相比，差異有統計學意義（P＞0.05），提示給藥高、中、低劑量組與陽性藥VE效果相當。

3討論

皮膚組織中水分含量以及SOD活力和MDA含量是判定受試動物皮膚衰老程度的一個特殊而敏感的指標。D-半乳糖所致的小鼠皮膚亞急性衰老模型，是根據衰老代謝學說而研制的衰老模型，研究已證明D-半乳糖誘導的亞急性衰老模型是可靠的衰老實驗動物模型。因此，本課題采用D-半乳糖造成小鼠皮膚亞急性衰老模型[5-6]。

實驗結果表明，北蟲草提取物能明顯提高衰老小鼠皮膚中水分含量和SOD活力，降低衰老小鼠皮膚組織中MDA含量，且與公認的抗氧化劑維生素E相比，有相同的抗衰老作用。

中醫藥理論認為，“肺主皮毛”，“腎主水”；蟲草具有“補肺益腎”之功。而從實驗結果來看，北蟲草提取物具有延緩皮膚衰老、提高皮膚含水量的作用，正反映了我國傳統醫藥理論對于北蟲草功效的正確認識，同時也在一定程度上說明了中藥采用經皮給藥的方式，可以起到和內服相同的結果。

[參考文獻]

[1]馬吳偉，潘蘇華.蛹蟲草的研究進展[J].亞太傳統醫藥，2008，4(11):148-150.

[2]王常鑫，楊春偉.人工栽培蟲草的工藝研究和分析[J].醫藥界，2005， 12(1):76-78.

[3]鐘石，計東風，陳詩等.蛹蟲草的研究進展[J].蠶桑通報，2006，37(4)：6-10.

[4]李峰，吳軍正，劉斌，等.動物實驗用脫毛劑配方的改進[J].實用口腔醫學雜志，1998，14（4）：208-209.

[5]王倩.中藥延緩皮膚衰老的研究現狀[J].中國美容醫學，2006，15(2):219-221.

[6]丁克祥.老化皮膚的生物學特征及表皮改變[J].國外醫學·老年醫學冊，1999，20(1):36-38.

[收稿日期]2011-01-29[修回日期]2011-03-14

編輯/張惠娟