固體與液體培養(yǎng)法在鑒別支原體感染的差異性研究

吳清壇，蒲 榮

（1.福建省石獅市醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建石獅 362700；2.廣東省東莞市寮步醫(yī)院，廣東東莞 523400）

固體與液體培養(yǎng)法在鑒別支原體感染的差異性研究

吳清壇1，蒲 榮2

（1.福建省石獅市醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建石獅 362700；2.廣東省東莞市寮步醫(yī)院，廣東東莞 523400）

目的：通過(guò)固體和液體培養(yǎng)方法，比較解脲支原體和人型支原體在感染比例、特異性和敏感性等方面的差異性。方法：首先采用液體Uu和Mh培養(yǎng)試劑盒測(cè)試2010年1月～10月疑似生殖道支原體感染患者5 200例；然后對(duì)液體培養(yǎng)陽(yáng)性和污染標(biāo)本進(jìn)行固體選擇分離培養(yǎng)基培養(yǎng)并評(píng)估其特異性和敏感性。結(jié)果：5 200例生殖道支原體感染患者，液體培養(yǎng)法實(shí)驗(yàn)結(jié)果：陽(yáng)性1 690例，占32.50%，陰性3 510，占67.50%，污染250例，占4.81%。其中，單純Uu感染18.50%，單純Mh感染2.23%（P<0.05）。1 690例液體培養(yǎng)法陽(yáng)性標(biāo)本固體培養(yǎng)陽(yáng)性1 280例，差異率為24.26%（P<0.05），其中，單純Mh差異性最大，占43.97%。250例液體污染標(biāo)本，固體培養(yǎng)結(jié)果有典型支原體生長(zhǎng)58例，差異性占23.20%。典型的支原體1∶10倍比稀釋培養(yǎng)，結(jié)果顯示，固體培養(yǎng)基最高稀釋陽(yáng)性稀釋倍數(shù)為（1×10-4），液體培養(yǎng)基陽(yáng)性最高稀釋倍數(shù)為（1×10-6），P<0.05。結(jié)論：泌尿生殖道支原體感染比例和種類(lèi)差異較大，液體培養(yǎng)法可用于初篩，固體培養(yǎng)法可用于鑒定和確證試驗(yàn)。

解脲支原體；人型支原體；固體培養(yǎng)法；液體培養(yǎng)法；泌尿生殖道

解脲支原體(ureaplasma urealyticum，Uu)和人型支原體(mycoplasma hominis，Mh)是人類(lèi)泌尿生殖道感染中常見(jiàn)的2種病原體，其可以引起泌尿生殖系統(tǒng)多器官感染，導(dǎo)致各類(lèi)炎癥和不孕不育等[1-2]。支原體診斷方法很多，有經(jīng)典的培養(yǎng)法，也有基因擴(kuò)增方法、免疫學(xué)方法以及形態(tài)學(xué)鑒別等[3-4]。目前，培養(yǎng)方法主要有液體培養(yǎng)與固體培養(yǎng)2種，對(duì)于這2種方法爭(zhēng)議較大，相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道不一[5-6]。為了更好地提高支原體臨床診斷水平，減少醫(yī)療糾紛，本文從醫(yī)院門(mén)診婦產(chǎn)科和皮膚性病科疑似生殖道支原體感染患者5 200例為研究對(duì)象，比較泌尿生殖道支原體感染基本情況以及固體培養(yǎng)法和液體培養(yǎng)法鑒別支原體感染的差異性、評(píng)估液體培養(yǎng)法和固體培養(yǎng)法的特異性與敏感性，為臨床提供診斷依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

采用自2010年1～10月在醫(yī)院門(mén)診婦產(chǎn)科和皮膚性病科疑似生殖道支原體感染患者5 200例為研究對(duì)象，男2 060例，女3 140例，年齡為15～68歲，平均年齡33歲。男性取泌尿生殖道分泌物、尿液、前列腺液或精液，女性取宮頸或陰道分泌物。

1.2 采樣方法

女性患者采用陰道窺器擴(kuò)張陰道，用無(wú)菌棉球拭凈宮頸分泌物，然后用干凈的無(wú)菌棉拭子深入宮頸內(nèi)口1～2 cm，在宮頸管內(nèi)旋轉(zhuǎn)360°，采集單層柱狀上皮細(xì)胞，密閉送檢。男性患者首先用消毒棉簽清理尿道口分泌物，自行擠壓陰莖數(shù)次，用無(wú)菌棉拭子輕輕插入尿道2.0～2.5 cm，旋轉(zhuǎn)360°，停留約15 s，取得柱狀上皮細(xì)胞，拭子密封無(wú)菌送檢。同時(shí)，對(duì)男性來(lái)說(shuō)，標(biāo)本類(lèi)型包括前列腺液、精液和中段尿。

1.3 主要試劑

液體的Uu和Mh培養(yǎng)鑒定藥敏試劑盒由珠海浪峰生物技術(shù)有限公司提供；固體的Uu和Mh的選擇分離培養(yǎng)基和CO2發(fā)生片由上海恩康生物科技有限公司提供。試劑均在有效期范圍內(nèi)使用，每步操作嚴(yán)格按照試劑使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 陰陽(yáng)性判斷

液體培養(yǎng)法：培養(yǎng)基不變色為陰性；培養(yǎng)基由橙黃色變紅色且清亮為陽(yáng)性，用“＋”表示，顯示有支原體生長(zhǎng)；Uu計(jì)數(shù)結(jié)果在24 h判讀，不超過(guò)28 h；Mh結(jié)果在48 h判讀；培養(yǎng)基變紅但混濁，不能報(bào)陽(yáng)性，提示污染。固體培養(yǎng)法出現(xiàn)典型的棕褐色顆粒菌落和“油煎蛋”菌落，顯示支原體生長(zhǎng)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 液體培養(yǎng)法實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5 200 例中支原體液體培養(yǎng)中陰性3 510例，占67.50%，其中，污染標(biāo)本250例，占4.81%；陽(yáng)性1 690例，占32.50%；在1 690例陽(yáng)性標(biāo)本中，男580例，女1 110例，男女比例為1:1.9；其中，單獨(dú)Uu感染比單獨(dú)Mh感染率高（P<0.05），男女總感染率相比，女性高于男性（P<0.05），結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 Uu和Mh液體培養(yǎng)法檢測(cè)結(jié)果[n(%)]Tab.1 Experimenta l result in the culture broth method on Uu and Mh[n(%)]

2.2 固體培養(yǎng)法實(shí)驗(yàn)結(jié)果

將1 690例液體初篩陽(yáng)性標(biāo)本，進(jìn)行固體培養(yǎng)，結(jié)果1 280例為陽(yáng)性，陽(yáng)性差異率為24.26%，其中單獨(dú)Mh陽(yáng)性標(biāo)本差異最大，高達(dá)43.97%。固體培養(yǎng)法與液體培養(yǎng)法相比，P<0.05。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 1 690例液體法陽(yáng)性標(biāo)本固體法檢測(cè)結(jié)果(n)Tab.2 Experim ental result of the solid cu lture method in 1 690 fluid positive sam ple(n)

2.3 液體污染標(biāo)本固體培養(yǎng)法實(shí)驗(yàn)結(jié)果

將250例液體培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)基變紅且混濁、不能報(bào)陽(yáng)性、提示污染的標(biāo)本接種固體培養(yǎng)基上，48 h后觀察。結(jié)果顯示，58例培養(yǎng)基上有典型的支原體菌落生長(zhǎng)，占23.20%；226例有細(xì)菌或真菌生長(zhǎng)，占90.40%，19例未見(jiàn)菌落生長(zhǎng)，占7.6%。

2.4 固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)敏感性結(jié)果

隨機(jī)挑選典型的Uu和Mh菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)48 h，然后用液體培養(yǎng)基1∶10倍比稀釋成108，然后將原倍和每一稀釋度的標(biāo)本，分別接種到固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基，48 h后觀察結(jié)果。結(jié)果：培養(yǎng)48 h后，固體培養(yǎng)基最高稀釋陽(yáng)性稀釋倍數(shù)為(1×10-4)，液體培養(yǎng)基陽(yáng)性最高稀釋倍數(shù)為(1×10-6)，兩者差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。

3 討論

泌尿生殖道支原體呈性別與種類(lèi)差異[7-9]。本實(shí)驗(yàn)表明，泌尿生殖道支原體感染比例為32.50%，其中，女35.35%，男28.16%，男女總感染率相比，女性高于男性（P<0.05）。這或許跟女性生殖道結(jié)構(gòu)有關(guān)，容易感染支原體。同時(shí)感染種類(lèi)也有一定的差別，本實(shí)驗(yàn)顯示，單獨(dú)Uu感染占18.50%，單獨(dú)Mh感染占2.23%，支原體感染比例中Uu感染遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于Mh（P<0.05）。

固體培養(yǎng)法與液體培養(yǎng)法特異性有較大差異[5]。液體培養(yǎng)法是生化反應(yīng)，特異性差，不是支原體所特有，分解精氨酸與尿素的細(xì)菌和真菌都會(huì)出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，這樣就導(dǎo)致本身細(xì)菌感染誤診成支原體感染。本實(shí)驗(yàn)表明，液體培養(yǎng)陽(yáng)性而固體培養(yǎng)法陰性的標(biāo)本占24.26%，差異性較大，其中，單獨(dú)Mh培養(yǎng)，差異性達(dá)43.97%。液體培養(yǎng)法判斷為污染標(biāo)本，其中23.20%的標(biāo)本在固體培養(yǎng)基上也有典型的支原體生長(zhǎng)。

固體培養(yǎng)法與液體培養(yǎng)法敏感性有一定差異。本實(shí)驗(yàn)隨機(jī)挑選典型的Uu和Mh菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)48 h，液體培養(yǎng)基1∶10倍比稀釋，接種固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。結(jié)果顯示：固體培養(yǎng)基最高稀釋陽(yáng)性稀釋倍數(shù)為（1×10-4），液體培養(yǎng)基陽(yáng)性最高稀釋倍數(shù)為（1×10-6），P<0.05。液體培養(yǎng)法敏感性高，有利于初篩支原體感染。

總之，泌尿生殖道支原體感染比例較大，液體培養(yǎng)法敏感性高，可用于初篩，固體培養(yǎng)法特異性高，可用于鑒定和確證試驗(yàn)[10]。

[1]曹玉璞,葉元康.支原體與支原體病[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:121-138.

[2]龐偉鴻,劉紅杏,許景寧,等.精液中支原體衣原體及抗精子抗體的檢測(cè)及評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2010,7(5):393-394.

[3]Cao X,Wang Y,Hu X,et al.Real-time TaqMan polymerase chain reaction assays for quantitative detection and diferentiation of Ureaplasm urealyticum and Ureaplasma parvum[J].D iagn Microbial InfectDis,2007,57(4):373-378.

[4]Yoshida T,Deguchi T,Meda S,et al.Quantitative detection of Ureaplasma parvum and Ureaplasma urealyticum in urine specimens from menwith and withouturethritisby real-time polymerase chain reaction[J].Sex Transm Dis.2007.34(6):416-419.

[5]顧可梁,洪因之,王根芬,等.解脲和人型支原體選擇性固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基比較[J].浙江預(yù)防醫(yī)學(xué),2007,19(3):95-96.

[6]孟冬婭,薛文成,馬曉博,等.兩種接種固體培養(yǎng)基方法檢測(cè)泌尿生殖道分泌物中支原體[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2007,22(3):74-75.

[7]張久富.泌尿生殖道支原體、衣原體感染狀況及藥敏分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2010,16(7):140-141.

[8]顏雪芳,張灼華,江惠.解脲支原體和人型支原體感染的培養(yǎng)鑒定和藥物監(jiān)測(cè)分析[J].吉林醫(yī)學(xué),2010,31(1):72-73.

[9]武蓉珍,劉勝勇,陳東紅,等.解脲支原體不同生物群別對(duì)小鼠體外受精的影響[J].中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志,2010,18(2):82-85.

[10]李婷,葉元康.固體培養(yǎng)基直接分離解脲脲原體和人型支原體方法的研究[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2005,28(10):1081.

Com parison in solid culturemethod and broth culturemethod on ureap lasma urealyticum and m ycop lasma hom inis

WU Qingtan,PU Rong
(1.Shishi Hospital of Shishi City,Fujian Province,Shishi 362700,China;2.Liaobu Hospital of Dongguan,Guangdong Province,Dongguan 523400,China)

Objective:To Compare with the Infec ratio and specificity and sensitivity by solid culture method and broth culturemethod with ureaplasma urealyticum andmycoplasma hominis.Methods:First,the gential tractmycoplasma infection 5 200 specimens to doubtwere tested by broth method on ureaplasma urealyticum and mycoplasma hominis from January to October in 2010.And then,the resuits of positive and pollution specimens from broth method were analyzed by broth method,and evaluated the specificity and sensitivity respectively.Results:A total of 5200 patients were measured,and the positive rate of Mycoplasma was 1 690(32.50%),negative was 3 510(67.50%),pollution was 250(4.81%),among them,the positive rate of Uu was 18.50%,Mh was 2.23%(P<0.05).The difference rate was 24.26%between solid method and broth method,among them,the rate of Mh was 43.97%,pollution was 23.20%.The sensitivity was(1×10-4)in solid method and(1×10-6)in brothmethod(P<0.05).Conclusion:There is a high positive rate and different species in the gential tract mycoplasma infection in clinic.It is a good choice to solid method with preliminary screening and broth method with identification and confirmatory test.

Ureaplasma urealyticum;Mycoplasma hominis;Solid culturemethod;Broth culturemethod;Genitourinary tract

R446.11

B

1673-7210（2011）02（c）-069-03

吳清壇（1967-），男，石獅市醫(yī)院檢驗(yàn)科主任，副主任技師，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作。

2010-12-10）