腎透明細(xì)胞癌中MMP-10的表達(dá)及臨床意義

韓保健，趙海軍，張?jiān)?/p>

青島市第八人民醫(yī)院泌尿外科，山東青島 266100

腎細(xì)胞癌（RCC）是一種腎臟最常見的惡性腫瘤，以高發(fā)局部侵襲和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移為特點(diǎn)[1]。對于晚期和轉(zhuǎn)移的RCC，幾乎沒有有效的或治愈性的療法。因此，對RCC進(jìn)展機(jī)制的研究對于制訂其治療方案是非常重要的。雖然不同的因素與惡性侵襲性有關(guān)，但細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的降解是許多癌的關(guān)鍵和早期的步驟之一。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）會分解ECM成分，在癌細(xì)胞侵入和轉(zhuǎn)移中具有重要作用[2-3]。

在不同的MMPs中，MMP-2和MMP-9是最多被研究和最重要的因子，它們影響不同癌的惡性程度和生存率[4]。在RCC，有研究者發(fā)現(xiàn)MMP-2和MMP-9的過度表達(dá)與高侵襲性和預(yù)后不良有關(guān)[5-6]。除了這兩種，MMP-1、-3、-7、-11、-12 和-14也在RCC中過度表達(dá)[7-8]。MMP-10也稱作基質(zhì)降解酶-2，降解ECM的多種成分或間質(zhì)結(jié)締組織和膠原Ⅲ和Ⅳ[9]。有研究者報道在不同的癌MMP-10的過度表達(dá)并影響它們的惡性侵襲性[10-11]。然而，目前還沒有人RCC組織MMP-10表達(dá)的報道。腎透明細(xì)胞癌（CCRCC）是腎細(xì)胞癌的主要類型（60%～85%），因此，我們將對CCRCC患者進(jìn)行單變量和多變量分析，來闡明MMP-10表達(dá)的臨床病理的意義和它在腫瘤進(jìn)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1995年 1月～2010年 12月，對我院收治的 112例CCRCC患者進(jìn)行回顧性分析研究，排除手術(shù)前已經(jīng)進(jìn)行治療的患者。pT分期和分級通過組織病理學(xué)驗(yàn)證。分期和分級基于2002腫瘤-淋巴結(jié)-轉(zhuǎn)移（TNM）分級，核分級基于Fuhrman等[12]標(biāo)準(zhǔn)。統(tǒng)計(jì)分析中，腫瘤基于T期分為2組：低期（T1和T2）和高期（T3和 T4），此外，核分級分為 2 組 1～2級為低級，3～4級為高級。復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移通過臨床和X射線照相來評定。單獨(dú)一個病理學(xué)醫(yī)生完成所有病理組織學(xué)檢查。

1.2 免疫組織化學(xué)分析

標(biāo)本石蠟包埋，5 μm切片，脫蠟入水，抗原熱修復(fù)，采用SABC 法染色。 一抗：MMP-10（兔多克隆抗體 1∶500；RnD)，4℃孵育過夜，依次用生物素化二抗，辣根過氧化物-卵白素-生物素復(fù)合物孵育，DAB顯色，用磷酸鹽緩沖液替代一抗作為陰性對照。判斷標(biāo)準(zhǔn)：所有免疫組化染色分析基于腫瘤區(qū)域光鏡結(jié)果，半定量MMP-10免疫染色評定，染色強(qiáng)度分為（-、+、++、+++、++++），癌細(xì)胞免疫染色（+++）、（++++）為陽性染色細(xì)胞，癌細(xì)胞超過50%為陽性，則認(rèn)為MMP-10表達(dá)陽性。每張切片取血管密度最高的5個視野進(jìn)行測定，所有半定量分析由2位不知臨床特點(diǎn)和生存率數(shù)據(jù)的研究者在不同時間評估2次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，χ2檢驗(yàn)用于評價MMP-10表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)間的關(guān)系。單變量分析用Kaplan-Meier方法，統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性用log-rank檢驗(yàn)。多變量分析采用Cox比例風(fēng)險模型，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

MMP-10主要表達(dá)在細(xì)胞漿（圖1、2），在分析112例免疫染色的CCRCC標(biāo)本后發(fā)現(xiàn)：53例（47.3%）陽性，59例（52.7%）陰性，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，MMP-10表達(dá)與pT分期（P=0.004 1）和核分級（P＜0.001）相關(guān)，筆者未發(fā)現(xiàn)MMP-10的表達(dá)與轉(zhuǎn)移（P=0.215 9）有關(guān)（表1）。多變量分析顯示MMP-10表達(dá)在高pT分期是一個重要和獨(dú)立的因素。多變量分析應(yīng)用Cox比例風(fēng)險模型（包括分期、核分級、年齡和MMP-10表達(dá)）顯示MMP-10表達(dá)在CCRCC患者高pT期是一個重要和獨(dú)立的因素（表2）。

3 討論

在本研究中，筆者用免疫組織化學(xué)的方法檢測了MMP-10在CCRCC中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)MMP-10陽性與pT分期、核分級相關(guān)，與轉(zhuǎn)移無關(guān)。許多有關(guān)MMP-10表達(dá)在不同的惡性腫瘤如食管癌[10]、肺癌[13]和前列腺癌[11]的研究顯示與惡性程度和腫瘤的進(jìn)展有關(guān)。雖然表達(dá)在人肺癌細(xì)胞MMP-10蛋白顯著高于正常肺組織，但其與腫瘤的進(jìn)展包括腫瘤分期和轉(zhuǎn)移無關(guān)[14]。此外，Kerkela等[15]報道在皮膚癌MMP-10表達(dá)與惡性侵占性包括侵襲和轉(zhuǎn)移無關(guān)。因此，在實(shí)驗(yàn)中，筆者采用多變量分析研究了MMP-10在RCC高pT期的獨(dú)立的作用。分析顯示MMP-10表達(dá)在腫瘤侵襲中，是一個重要和獨(dú)立的因素。另外，我們也推測MMP-10在人CCRCC細(xì)胞侵襲中起重要作用。

本研究顯示MMP-10的表達(dá)與轉(zhuǎn)移無關(guān)，在多變量分析中不能作為一個獨(dú)立的因素。轉(zhuǎn)移的過程非常復(fù)雜，除了與癌細(xì)胞侵襲性有關(guān)外，多種因素參與其中[16]。由于本研究的樣本量相對較少，其確切機(jī)制需進(jìn)一步探究。以MMPs為靶點(diǎn)的抗癌藥物的研制已經(jīng)開始，也得到了一些臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。然而，關(guān)于它們抗癌作用的結(jié)果、生存率的延長、副作用等還不盡如人意[17]。這種結(jié)果令人失望的一個原因是藥物對分期和/或癌癥類型的廣譜性。近年來，在惡性腫瘤的防治上，許多研究者把焦點(diǎn)投向副作用少的特異性的MMP抑制劑[18-19]。基于本研究結(jié)果，筆者認(rèn)為MMP-10抑制劑可能會在CCRCC方面有潛在的作用。

表1 MMP-10表達(dá)和臨床病理特征之間的相互關(guān)系（例）

表2 CCRCC患者原因特異性Cox比例風(fēng)險分析結(jié)果（n=112）

總之，筆者研究了CCRCC的MMP-10的表達(dá)，通過單變量和多量的分析，發(fā)現(xiàn)MMP-10表達(dá)與pT分期和核分級密切相關(guān)。盡管MMP-10在CCRCC中的生物學(xué)作用有待于進(jìn)一步揭示，筆者的結(jié)果提供了有關(guān)MMP-10在CCRCC中的新的資料。

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