RP-HPLC測定元明丹中士的寧的含量

2011-01-30 08:02:20朱祥松

中國醫藥導報 2011年17期

朱祥松，張俊

1.鄂州市食品藥品監督檢驗所，湖北鄂州 436000；2.鄂州市中心醫院康復科，湖北鄂州 436000

元明丹系由馬錢子、三七、西紅花、血竭、當歸等多味中藥組成的醫院傳統驗方制劑，具有活血祛瘀、消腫化瘤、解毒止痛的功效，用于白血病、肉瘤癌、筋骨疼痛及風濕性關節炎等癥。馬錢子中所含的士的寧既為有效成分又具有毒性，安全范圍窄，過量使用常會導致嚴重的神經系統不良反應[1]，應嚴格控制其用量。本制劑的質量標準對士的寧僅有薄層色譜定性鑒別，為保證用藥安全和制劑質量，本文采用RP-HPLC法對元明丹中士的寧進行定量分析，方法靈敏、簡便、準確，可用于元明丹的質量控制。

1 儀器與試藥

DIONEX Ultimate3000高效液相色譜儀：LPG3400A泵，VDW3100紫外檢測器，Chromeleon色譜工作站；BS21S電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)；Aquapro純水儀(重慶頤洋企業發展有限公司)。

士的寧對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110705-200005）；元明丹（鄂州市某醫院提供，批號為090201，090401， 090411）；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適應性

色譜柱為 DIONEX C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；乙腈-0.3%三乙胺溶液（磷酸調 pH=2.6）（9∶91）為流動相，流速：1.0 ml/min，柱溫：30℃，檢測波長：254 nm；進樣體積：20 μl。理論塔板數按士的寧峰計算不少于5 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液稱取士的寧對照品10.14 mg，置20 ml量瓶中，加三氯甲烷使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液3 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得

2.2.2 供試品溶液取元明丹適量，粉碎，過二號篩，取粉末0.7 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加氫氧化鈉試液3 ml，混勻，放置30 min，精密加三氯甲烷20 ml，密塞，稱定重量，置水浴中回流提取2.5 h，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，分取三氯甲烷提取液，用鋪有少量無水硫酸鈉的濾紙濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液5 ml，置60℃水浴揮干，殘渣用甲醇溶解定容至5.00 ml，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得。

2.2.3 陰性對照溶液按處方比例制備不含馬錢子的陰性對照樣品，按照“2.2.2”項下方法制備陰性對照溶液。

2.3 系統適應性試驗

分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20 μl，注入色譜儀，同法測定，結果供試品溶液與對照品溶液主峰的保留時間一致，士的寧峰與其他峰完全分離，峰形理想，陰性對照無干擾。見圖1。

2.4 線性關系

精密量取對照品儲備液5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液⑤；精密量取對照品溶液⑤1、2、3、4 ml，分別置 5 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別作為對照品溶液①、②、③、④。將對照品溶液①～⑤用微孔濾膜（0.45 μm）過濾，依次進樣 20 μl，測定峰面積。以士的寧的峰面積（Y），分別對其進樣量（X）進行線性回歸，得回歸方程為：Y=33.226 1X+11.139 5（r=0.999 7）。結果表明，士的寧在0.405 6～2.028 μg與峰面積線性關系良好。