類風濕關節炎患者血清Vaspin變化及相關因素的分析

胡 偉

株洲中醫傷科醫院關節外科，湖南株洲 412000

內臟脂肪組織來源的絲氨酸蛋白酶抑制劑（visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor，Vaspin）是一種新發現的脂肪細胞因子，它屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑Serpin家族[1]。先前的研究表明Vaspin與胰島素抵抗（IR）、肥胖以及2型糖尿病（T2DM）的發病密切相關[2-4]。近年來Seeger等研究發現長期行血液透析治療的患者血清C反應蛋白（CRP）水平與血清Vaspin水平呈獨立負相關，而且是血清Vaspin濃度的獨立預測因子[5]。Ladislav Senolt等研究也發現RA患者滑膜液Vaspin水平明顯高于骨關節炎患者[6]。提示血清Vaspin可能與炎癥反應有關，在RA的發病中具有重要的作用。然而Vaspin在RA發生和發展中的作用機制目前并不十分清楚。類風濕關節炎是一個累及周圍關節為主的多系統炎癥性的自身免疫病，病因不明。其特征為多個對稱性周圍關節的慢性炎癥病變，最常侵犯的部位是四肢小關節，可引起全身的關節腫脹疼痛及功能障礙，病變呈持續、反復發作的過程。本實驗中，觀察RA患者與正常人血清中Vaspin及相關炎性細胞因子濃度的差別，分析RA與相關炎性細胞因子的關系，從而探討Vaspin在類風濕關節炎發生過程中可能的作用機制，進一步闡明Vaspin的生理功能。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2009年9月～2010年12月我院門診或住院的RA患者60例作為RA組，所有患者均符合美國風濕病學會（ARA）1987年修訂的RA診斷標準。RA患者按病情活動分為RA活動亞組（32例）和非活動亞組（28例）。活動RA患者活動性指標包括：晨僵＞30 min；3個以上關節腫脹；5個或5個以上關節壓痛；血沉＞30 mm/h。RA患者年齡18～75歲，平均（50.4±9.0）歲；BMI 18.2～29.0 kg/m2，平均（20.5±2.3） kg/m2。 正常對照組28例，為健康體檢或自愿者，年齡20～70歲，平均（49.8±8.5）歲，BMI17.9～30.0kg/m2，平均（21.0±2.3） kg/m2。 兩組的年齡、性別及BMI比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。所有患者及對照組均無高血壓、糖尿病、腫瘤、妊娠、內分泌疾病及其他自身免疫病。

1.2 標本采集及檢測方法

受試者隔夜14 h采集空腹靜脈血5 ml。其中1 ml用15%EDTA-K2。抗凝后在ALIFAXS.P.A公司的TEST-I型全自動血沉儀上測定血沉（ESR），其余4 ml離心后分離血清，置-70℃冰箱保存用于其他項目檢測。α1-酸性糖蛋白（α1-acid Glycoprotein，AAG）和 C-反應蛋白（CRP）測定采用免疫比濁法，在IMMAGE儀器上檢測，試劑由美國貝克曼庫爾特公司提供。類風濕因子（RF）測定采用免疫速率散射比濁法（上海申能公司）。腫瘤壞死因子α（TNF-α）測定采用放射免疫分析（RIA）法。空腹血清Vaspin濃度采用酶聯免疫法測定（北京愛迪博生物科技有限公司藥盒）。

1.3 統計學分析

數據處理采用SPSS 16.0軟件完成，數據以均數±標準差（±s）表示，非正態分布數據均經過自然對數轉換。組內自身對比與兩組間對比用t檢驗，指標間的關系判定采用直線相關分析及多元線性回歸分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 RA組與對照組生化指標比較

RA 組 ESR、AAG、CRP、RF、TNF-α 顯著高于對照組（P＜0.01）。 見表1。

2.2 血清Vaspin水平比較

2.2.1 RA組與對照組血清Vaspin水平比較 RA組血清Vaspin水平明顯高于對照組[（1.58±0.20） μg/L vs（0.71±0.09） μg/L]（P＜0.01）。 見圖 1。

表1 RA組與對照組臨床生化指標比較（±s）

表1 RA組與對照組臨床生化指標比較（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.01

RA組對照組組別 例數 TNF-α（μg/L）60 28 2.37±0.80*0.90±0.33 AAG（mg/L）1328.2±272.6*491.0±180.70 CRP（mg/L）17.53±4.08*8.40±2.23 RF（IU/ml）29.01±2.64*9.05±1.84 ESR（mm/h）34.70±11.05*11.93±5.76

2.2.2 RA患者活動亞組與非活動亞組血清Vaspin水平比較 RA患者活動亞組血清Vaspin水平明顯高于非活動亞組[（1.98±0.15 ） μg/L vs（1.32±0.12） μg/L]（P＜0.01）。 見圖 2。

2.2.3 不同性別血清Vaspin水平比較 RA組和對照組中所有女性患者血清Vaspin高于男性患者，其中，RA組、對照組中女性患者血清Vaspin分別低于男性患者，但差異均無統計學意義（P＞0.05）。

2.3 血清Vaspin水平與其他指標相關性分析

RA組血清Vaspin與TNF-α及CRP呈正相關（r=0.64，P＜0.01；r=0.47，P＜0.05）。 以血清 Vaspin 為因變量， 以 ESR、AAG、CRP、RF、TNF-α為自變量進行多元回歸分析表明，RA組人群中TNF-α是影響空腹血清Vaspin水平的獨立相關因素（YVaspin=7.350+0.082XTNF-α）。

3 討論

近年來研究表明脂肪因子如 leptin、adiponectin、resistin、visfatin不僅參與糖脂代謝的調節，而且在調節免疫反應及炎癥反應中具有重要作用并與RA發病及RA的嚴重程度密切相關[7-12]。Vaspin是由內臟脂肪組織分泌的一種屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族的細胞因子，與肥胖和胰島素敏感性有關。Ladislav Senolt等研究發現RA患者滑膜液Vaspin水平明顯高于骨關節炎患者，滑膜液Vaspin水平與DAS28有相關的趨勢[6]。提示血清Vaspin可能在RA患者炎癥反應中發揮了重要的作用。為此，本研究測定了RA患者血清Vaspin水平，并與正常人群進行比較，結果發現RA患者血清Vaspin水平明顯高于對照組，RA患者活動亞組血清Vaspin水平明顯高于非活動亞組。這進一步提示Vaspin參與了RA的發病，在RA的發病機制中具有重要的作用。

類風濕關節炎（RA）是一種以關節組織慢性炎癥性病變為主要表現的自身免疫性疾病，其關節壓痛、腫脹都與炎癥存在一定關系，許多細胞因子參與了其病理過程，其中腫瘤壞死因子（TNF-α）被認為在RA的細胞因子網絡中起中心作用，通過多種途徑參與關節的炎癥反應，促進滑膜細胞增殖和介導關節軟骨及骨質損害；α1-酸性糖蛋白（AAG）和CRP一樣，都屬于急性時相反應蛋白，可反映RA病情的活動性，可作為判斷RA疾病活動性的指標之一；CRP、血沉（ESR）、類風濕因子（RF）均已被認為與本病活動性有一定關系。目前證據表明上述細胞因子在類風濕關節炎患者中均有異常升高。

本研究實驗結果表明 RA 患者 ESR、AAG、CRP、RF、TNF-α較正常對照組明顯增高，這與國內外相關研究結果類似。相關分析發現血清Vaspin水平與TNF-α、CRP成明顯正相關，而與AAG、ESR、RF無相關性。多元回歸分析表明血清TNF-α是影響RA患者血清Vaspin水平的獨立相關因素。這些結果進一步提示Vaspin與RA的發生和發展可能具有重要的關系。但是促進炎癥發生還是對炎癥具有抑制作用現在也沒有明確的定論。本研究通過查閱文獻及歸納分析，推測Vaspin可能在RA患者炎癥反應中對機體發揮一定的保護作用，其升高可能提示了其在炎癥狀態下的一種代償機制，這與2型糖尿病患者及肥胖患者血清Vaspin水平升高是IR的一種代償性機制相類似，但其作用的具體環節及機制尚需進一步研究。

實驗中筆者還發現女性血清Vaspin水平較男性有升高趨勢，但差異無統計學意義。直線相關分析也提示了血清Vaspin水平與性別不相關。這在文獻中也有報道，但原因還未明了，可能是女性雌激素和孕激素對脂肪細胞分泌具有促進作用。

綜上所述，本研究結果表明RA患者血清Vaspin水平明顯升高，與炎癥反應指標TNF-α、CRP成明顯正相關。因此，筆者推測Vaspin可能是一種在RA患者炎癥反應中對機體發揮保護作用的脂肪細胞因子，而其具體的作用機制，尚需進一步研究。

[1]Hida K,Wada J,Eguchi J,et a1.Visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor：a unique insulin-sensitizing adipocytokine in obesity[J].Proc Natl Acad Sci,2005,102(30)：10610-10615.

[2]Zvonic S,Lefevre M,Kilroy G,et al.Secretome of primary cultures of human adipose-derived Stem cells：modulation of serpins by adipogenesis[J].Mol Cell Proteomics,2007,6(1)：18-28.

[3]Kloting N,Berndt J,Kralisch S,et al.Vaspin gene expression in human adipose tissue：association with obesity and type 2 diabetes[J].Biochem Biophys Res Commum,2006,339(1)：430-436.

[4]Youn BS,Kloting N,Kratzsch J,et al.Serum vaspin concentrations in human obesity and type 2 diabetes[J].Diabetes,2008,57(2)：372-377.

[5]Seeger J,Ziegelmeier M,Bachmann A,et a1.Serum levels of the adipokine vaspin in relation to metabolic and renal parameters[J].J Clin Endocrinol Metab,2008,93(1)：247-251.

[6]Senolt L,Polanska M,Filkova M,et a1.Vaspin and omentin：new adipokines differentially regulated at the site of inflammation in rheumatoid arthritis[J].Ann Rheum Dis,2010,69(7)：1410-1411.

[7]Lago F,Dieguez C,Gomez Reino J,et al.Adipokines as emerging mediators of immune response and inflammation[J].Nat Clin Pract Rheumatol,2007,3(12)：716-724.

[8]Tilg H,Moschen AR.Adipocytokines：mediators linking adipose tissue,inflammation and immunity[J].Nat Rev Immunol,2006,6(10)：772-783.

[9]Bokarewa M,Bokarew D,Hultgren O,et al.Leptin consumption in the inflamed joints of patients with rheumatoid arthritis[J].Ann Rheum Dis,2003,62(10)：952-956.

[10]Schaffler A,Ehling A,Neumann E,et al.Adipocytokines in synovial fluid[J].JAMA,2003,290(13)：1709-1710.

[11]Senolt L,Housa D,Vernerova Z,et al.Resistin is abundantly present in rheumatoid arthritis synovial tissue,synovial fluid,and elevated serum resistin reflects disease activit[J].Ann Rheum Dis,2007,66(4)：458-463.

[12]Brentano F,Schorr O,Ospelt C,et al.Pre-B cell colony-enhancing factor/visfatin,a new marker of inflammation in rheumatoid arthritis with proinflammatory and matrix-degrading activities[J].Arthritis Rheum,2007,56(9)：2829-2839.