HPLC測(cè)定白芷藥材中歐前胡素與異歐前胡素的含量

王云龍，楊立志，姜雪敏，許世偉，邵禮梅

雞西市藥品檢驗(yàn)所，黑龍江雞西 158100

白芷收載于《中國(guó)藥典》2010年版一部，來源為傘形科植物白芷Angelica dahurica (Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss.)Shan et Yuan的干燥根。性溫味辛，歸胃、大腸、肺經(jīng)。具有散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿的功效。用于治療感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻淵、牙痛、白帶、瘡瘍腫痛。《中國(guó)藥典》2010年版一部[1]僅對(duì)白芷中歐前胡素進(jìn)行了含量測(cè)定，文獻(xiàn)報(bào)道[2-3]的方法雖對(duì)兩種成分同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)定，但前處理方法繁瑣。本文采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定白芷藥材中歐前胡素與異歐前胡素的含量，方法簡(jiǎn)便、快速、專屬性強(qiáng)、分離度高，可作為白芷藥材的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

HP1100高效液相色譜儀，配置四元泵、紫外檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、HP Chemstation色譜工作站；AG285電子分析天平、歐前胡素與異歐前胡素為中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，水為重蒸餾水，甲醇為色譜純。白芷藥材購(gòu)于藥店。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm，流動(dòng)相：甲醇-水（70∶30），流速：1 ml/min，柱溫：35℃，進(jìn)樣量 20 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取歐前胡素與異歐前胡素9.48 mg、15.00 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品1粉末（過三號(hào)篩）約1.0 g，精密稱定，置50 ml量瓶中，加甲醇45 ml，超聲處理（功率300 W，頻率50 Hz）30 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 線性關(guān)系考察

精密吸取歐前胡素和異歐前胡素的對(duì)照品混合溶液0.5、1.5、2.5、3.5、4.5 ml， 置 10 ml量瓶中， 用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)X（μg/ml），相應(yīng)成分峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸，歐前胡素0.094 8～0.853 2 μg/ml內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，回歸方程為 Y=4.003×103X+16.5，r=0.999 6；異歐前胡素在0.150 0～1.350 0 μg/ml內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，回歸方程為 Y=4.242×103X+16.917，r=0.999 8。

2.4 精密度試驗(yàn)

按上述色譜條件，以對(duì)照品混合溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算，歐前胡素的RSD=0.3%，異歐前胡素的RSD=0.5%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，在室溫下放置，按上述色譜條件，分別在0、2、4、6、8 h 測(cè)定，以峰面積計(jì)算，歐前胡素的 RSD=0.4%，異歐前胡素的RSD=0.8%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

同一批白芷，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液5份，在上述色譜條件下測(cè)定，測(cè)得歐前胡素的RSD=1.8%，異歐前胡素的RSD=1.7%。

2.7 回收率試驗(yàn)

取已知含量的供試品5份，每份0.5 g，精密稱定，置5個(gè)25 ml量瓶中，分別精密加入上述對(duì)照品溶液5 ml，加甲醇稀釋至刻度，在上述色譜條件下測(cè)定，計(jì)算回收率，歐前胡素的平均回收率為98.0%，RSD=1.0%；異歐前胡素的平均回收率為99.0%，RSD=0.5%，結(jié)果見表1。

表1 歐前胡素與異歐前胡素的加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=5）

2.8 樣品的測(cè)定

取5批供試品，按“2.2.2”制備供試品溶液，在上述色譜條件下測(cè)定，結(jié)果見表2，典型色譜圖如圖1所示。

表2 白芷中歐前胡素與異歐前胡素的含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 提取方法的選擇

本研究比較了超聲提取法與回流提取法對(duì)歐前胡素與異歐前胡素提取率的影響，回流提取與超聲提取無明顯差異，因超聲法簡(jiǎn)便，故采用超聲提取法。

3.2 色譜條件的選擇

對(duì)流動(dòng)相甲醇-水的比例進(jìn)行的考察結(jié)果表明，甲醇-水（80∶20）時(shí)，歐前胡素、異歐前胡素與其他組分分離效果不好；甲醇-水（50∶50）時(shí)，洗脫時(shí)間較長(zhǎng)。 故選擇甲醇-水（70∶30）作為流動(dòng)相，分離度良好，保留時(shí)間適宜。柱溫分別考察了25℃、30℃、35℃，結(jié)果表明35℃時(shí)柱壓較小，分離效果好。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010：97-98.

[2]鄧捷圓,高廣慧,趙春杰,等.HPLC法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地白芷中2種香豆素的含量[J].中草藥,2004,33(5)：354-357.

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