Survivin及Livin在中耳膽脂瘤組織中的表達及相關性研究

伍干元 李建軍 李龍平

Survivin及Livin在中耳膽脂瘤組織中的表達及相關性研究

伍干元 李建軍 李龍平

目的 探討Survivin及Livin在中耳膽脂瘤組織中的表達及相關性。方法 采用PV-9000二步法免疫組化法檢測60例膽脂瘤中耳炎患者(實驗組)和20例正常人(對照組)外耳道骨部皮膚組織中凋亡抑制蛋白Survivin和Livin的表達。結果 實驗組組織中Survivin和Livin蛋白表達的陽性率分別為26.7%和16.7%,明顯低于對照組的65.0%和55.0%,差異有統計學意義,P＜0.01(χ2=9.538, 11.386)。膽脂瘤組織中survivin與livin蛋白(γ=0.614,P＜0.01)的表達呈顯著正相關。結論 膽脂瘤組織中Survivin與livin蛋白的表達明顯下調,可能在膽脂瘤的發生、發展中起協同作用。

中耳膽脂瘤;Survivin;Livin

中耳膽脂瘤是耳科常見病,可導致一系列嚴重顱內外并發癥,嚴重威脅患者的生命。目前中耳膽脂瘤的發病機制尚未完全闡明,且臨床尚無有效的藥物療法,必須實施手術才能根治。因此,有關中耳膽脂瘤的研究倍受國內外學者的重視。有學者認為,膽脂瘤上皮細胞凋亡受抑在中耳膽脂瘤的發生和發展中可能起重要作用[1]。作者采用免疫組化法檢測膽脂瘤上皮細胞中凋亡抑制蛋白Survivin和Livin的表達及相關性,旨在探討兩者在中耳膽脂瘤發病過程中的作用機制,為有效治療中耳膽脂瘤提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料 標本取自 2008年 7月至 2008年 9月在我院行手術治療的 60例膽脂瘤中耳炎患者(60耳),均經臨床和病理檢查證實為后天繼發性膽脂瘤,其中男 32例,女 28例,年齡19～68(36.8±11.5)歲,病程約2～10(5.6±2.4)年。取正常外耳道骨部皮膚 20例(20耳)的作為對照組。用已知陽性切片作陽性對照,PBS液作陰性對照。

1.2 檢測方法 采用PV-9000二步法免疫組化法檢測凋亡抑制蛋白Survivin和Livin的表達。兔抗人Survivin多克隆抗體購于Labvision生物公司(Rb-6),兔抗人Livin多克隆抗體購于武漢博士德生物公司(BAl743);免疫組化SP試劑盒購于福州邁欣生物技術公司,DAB顯色試劑盒購于北京金橋生物技術公司。DMEM購Gibco公司。

1.3 結果判定 ①著色范圍以陽性細胞所占的平均百分數計分,無著色為 0分,小于 20%為 1分,21%～50%為2分,大于 50%為 3分;②著色強度依據深淺記分,無著色為 0分,淺著色為 1分,深著色為 2分。以著色范圍和強度計分之和為著色程度積分:積分0或1為陰性(-),2為弱陽性(+),3為陽性(++),≥4為強陽性(+++)。

1.4 統計學處理 所有數據采用SPSS16.0統計分析軟件包進行分析。計數資料的比較采用Pearson卡方檢驗,相關性分析采用Spearman相關分析,以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 實驗組和對照組組織中Survivin蛋白表達的比較 實驗組組織中Survivin蛋白表達的陽性率為26.7%,明顯低于對照組的65.0%,差異有統計學意義,P＜0.01(χ2=9.538)。見表1。

表1 實驗組和對照組組織中Survivin蛋白表達的比較

2.2 實驗組和對照組組織中Livin蛋白表達的比較 實驗組組織中Livin蛋白表達的陽性率為16.7%,明顯低于對照組的55.0%,差異有統計學意義,P＜0.01(χ2=11.386)。見表2。

表2 實驗組和對照組組織中Livin蛋白的表達

2.3 膽脂瘤組織中Survivin和Livin蛋白表達的相關性 膽脂瘤組織中survivin與livin蛋白(γ=0.614,P＜0.01)的表達呈顯著正相關,差異有統計學意義。見表3。

表3 膽脂瘤組織中Survivin和Livin蛋白表達的相關性

3 討論

中耳膽脂瘤是一種以上皮細胞增生、角化上皮脫屑堆積和骨質破壞為特征的慢性疾病,具有惡性腫瘤的生物學特征,但在病理上屬良性病變。膽脂瘤上皮的特點是具有高度增生的能力,但其增殖并非不受控制,細胞增殖增強的同時,細胞凋亡也加速。Olszewska等[2]研究發現,膽脂瘤上皮凋亡細胞所占比率明顯高于正常表皮組織,且其凋亡活性主要存在于基底上細胞層,基底層中并未見凋亡細胞。潘松林等[3]研究表明,Fas/APO-1和caspase-3在膽脂瘤上皮中由基底層向外至角質層逐漸增加,與正常外耳道皮膚表達比較,不僅范圍廣,而且表達水平也明顯增強。這些均提示細胞凋亡在膽脂瘤發病、發展過程中起著十分重要的作用。凋亡抑制蛋白家族(IAPs)是新近發現的人類內源性抗凋亡蛋白家族,Livin和Survivin均是其重要成員,可直接抑制caspase的活性,在抑制細胞凋亡過程中起重要作用。國內李冬等[4]采用免疫組織化學 SP法檢測 21例膽脂瘤標本及 11例外耳道骨部正常皮膚組織中Survivin的表達,結果顯示,膽脂瘤上皮的Survivin表達水平明顯高于正常外耳道皮膚上皮。Park等[5]研究表明,獲得性膽脂瘤上皮的Survivin表達水平明顯高于先天性膽脂瘤。本組資料顯示,實驗組組織中Survivin蛋白表達的陽性率為 26.7%,明顯低于對照組的 65.0%,差異有統計學意義,表明中耳膽脂瘤組織中Survivin蛋白表達明顯低于正常外耳道骨部皮膚,進一步證實了凋亡抑制蛋白Survivin在中耳膽脂瘤的異常表達,在膽脂瘤的發生、發展過程中可能有重要作用。目前國內有關中耳膽脂瘤組織中Livin蛋白表達研究較少。本研究發現,實驗組組織中Livin蛋白表達的陽性率為 16.7%,明顯低于對照組的 55.0%,差異有統計學意義,表明耳膽脂瘤組織中Livin蛋白表達明顯下調,提示Livin蛋白同Survivin一樣,在膽脂瘤的發生、發展過程中可能有重要作用。提示臨床上可通過適當調整凋亡抑制蛋白的表達,有效控制或減緩中耳膽脂瘤鱗狀上皮細胞的增殖,從而有效地控制中耳膽脂瘤的發生、發展,為膽脂瘤中耳炎的治療提供一種新途徑和新思路。大量研究證實,survivin和Livin均可直接作用于Caspase-3和Caspase-7,發揮其抗細胞凋亡作用。但是,兩者在抗凋亡功能上并不完全相同,它們之間是否存在關聯目前報道甚少。本研究結果顯示,膽脂瘤組織中survivin與livin蛋白(γ=0.614,P＜0.01)的表達呈顯著正相關,差異有統計學意義,提示survivin與livin蛋白可能在膽脂瘤的發生、發展中起協同作用。

綜上所述,膽脂瘤組織中Survivin與livin蛋白的表達明顯下調,可能在膽脂瘤的發生、發展中起協同作用。

[1] 劉偉,殷團芳,任基浩.中耳膽脂瘤的發生及其與細胞凋亡的關系.山東大學耳鼻喉眼學報,2010,24(1):29-33.

[2] Olszewska E,Chodynicki S,Chyczewski L.Apoptosis in the pathogenesis of cholesteatoma in adults.Eur Arch Otorhinolaryngol,2006, 263(5):409-413.

[3] 潘松林,龔樹生,賀紅斌.細胞外凋亡途徑與中耳膽脂瘤細胞凋亡.中國耳鼻咽喉頭頸外科,2007,14(12):699-701.

[4] 李冬,黃芳,龔樹生.凋亡抑制蛋白Survivin及Bcl-2在中耳膽脂瘤上皮中的表達及意義.中國耳鼻咽喉顱底外科雜志,2006,12 (5):334-338.

[5] Park HR,Min SK,Min K,et al.Increased expression of p63 and survivin in cholesteatomas.Acta Otolaryngol,2009,129(3): 268-272.

Association between expressions of survivin and livin in tissue of m idd le ear cholesteatoma

WU Gan-yuan,LIJian-jun,LILong-ping.

Yiyang Clinical Instituteof Xiangya Medical CollegeofCentral South University, Yiyang Hunan 413000,China

Objective To investigate the correlation between expression of Survivin and Livin in the tissue of the middle ear cholesteatoma.Methods Specimens of 60 midd le ear cholesteatoma(experimental group)and 20 normal skins(controlgroup)collected from the externalear canalwere examined by immunohistochemical PV-9000method usingmonoclonalantibodiesof Survivin and Livin.Results Thepositive rates for the expression of the Survivin and Livin were 26.7 and 16.7%in the experimental group respectively,much lower than those of the control group,with significant differences between both two groups,P＜0.01(χ2=9.538, 11.386).The expression of the Survivinwas positively related to thatof the Livin(γ=0.614,P＜0.01).Conclusion The expressions of the Survivin and Livin in the tissue of them idd le ear cholesteatoma proves to be downregulated markedly,both p laying the collaborative role in theoccurrence and developmentof themiddleear cholesteatoma

Midd le ear cholesteatoma;Survivin;Livin

413000湖南省中南大學湘雅醫學院益陽臨床學院